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自贡市44株临床非结核分枝杆菌的鉴定
目的 对自贡市2012 2016年临床分离44株疑似非结核分枝杆菌进行菌种鉴定.方法 使用PCR-荧光探针法对自贡市临床44份疑似非结核患者的菌株进行初步筛查,并对44份菌株的hsp65及rpoB基因进行扩增并测序,通过序列比对获得菌株型别.结果 44株菌株分枝杆菌经PCR-荧光探针法检测结果显示均为非结核分枝杆菌.对44株分枝杆菌进行hsp65及rpoB基因测序比对,进一步菌种鉴定结果显示,44株分枝杆菌分别为11种非结核分枝杆菌.结论 自贡市非结核分枝杆菌种类较多,44株菌即分为11个种.PCR荧光探针法及基因测序法可对临床非结核分枝杆菌进行快速、准确的鉴定.
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PCR-荧光探针法在中国HCV常见基因型检测中的意义
目的 探讨聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)-荧光探针法在检测丙型肝炎病毒(HCV)基因型中的应用价值.方法 随机选择2016年3月至6月来自全国各地的166例慢性HCV感染者血清样本,采用逆转录巢式PCR扩增HCV的Core-E1(CE1)基因区域和测序、系统发育树分析确定基因亚型,并采用PCR-荧光探针法对HCV基因型进行检测.采用Kappa检验对两种方法测得的HCV分型结果进行比较.结果 巢式PCR测序法共分型166例,其中1 b型66例(39.8%),2a型34例(20.5%),3a型16例(9.6%),3b型为27例(16.2%),6a型23例(13.9%);PCR-荧光探针法共分型166例,其中1 b型68例(41.0%),2a型34例(20.5%),3a型16例(9.6%),3b型25例(15.0%),6a型23例(13.9%).PCR-荧光探针法分型中的2例1 b型,测序法分型为3b型,两种方法检测一致率为98.7%(164/166),差异无统计学意义(χ2=0.0492,P>0.05).结论
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应用PCR-荧光探针法快速检测耐多药结核分枝杆菌基因型
目的 评价PCR-荧光探针法快速检测耐多药结核分枝杆菌基因型的临床应用价值.方法 应用PCR-荧光探针法对142份涂阳痰液样本进行分子菌种鉴定,对鉴定为结核分枝杆菌复合群的标本进行katG、inhA、rpoB 耐药基因突变位点检测,并与传统药敏试验结果比较.结果 142份涂阳痰样本中3份鉴定为非结核分枝杆菌,139份鉴定为结核分枝杆菌复合群;139株结核分枝杆菌中92株未检测出katG、inhA、rpoB基因耐药检测位点突变,其中传统药敏结果72株为HSRS、6株为HSRR、14株为HRRR; 33株检测出katG和rpoB或inhA和rpoB两个基因耐药位点突变,传统药敏结果均为HRRR;11株检测出katG或inhA耐药基因位点突变,传统药敏结果均为HRRS;1株检测出rpoB耐药基因位点突变,传统药敏结果为HSRR,药敏试验符合率为84.17％;对部分样本行PCR产物直接测序(PCR-DS),结果显示,PCR-荧光探针和PCR-DS检测耐多药结核分枝杆菌基因型结果符合率为100.00％.结论 PCR-荧光探针法快速检测耐多药结核分枝杆菌基因型简便、快速,具有临床推广应用价值.
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PCR-荧光探针法快速诊断分枝杆菌属感染临床应用研究
目的 探讨PCR-荧光探针法相对于传统分枝杆菌属培养及抗酸染色在辅助诊断分枝杆菌属感染中的应用价值.方法 回顾性分析2013年2-10月北京协和医院563份送检标本采用 PCR-荧光探针法检测结核/非结核分枝杆菌核酸 ,将其检测结果与培养及镜检结果进行比较.结果 563份不同临床标本PCR-荧光探针法检出分枝杆菌属阳性60份 ,阳性率10 .66% ,其中结核分枝杆菌(MTB)54株、非结核分枝杆菌(NTM )6株 ;培养和镜检检出阳性率分别为7 .46% 、7 .64% ,PCR-荧光探针法阳性检出率略高于传统培养及镜检方法 ,差异无统计学意义 ;PCR-荧光探针法将检出时间缩短至3 h ,且可以区分结核或非结核分枝杆菌 ,具有一定的优越性 ;以培养为金标准 ,PCR-荧光探针法阳性预测值为43 .33% 、阴性预测值为96 .82% .结论 PCR-荧光探针法灵敏度高、操作简便、耗时短 ,可作为实验室辅助诊断分枝杆菌属感染的有效方法之一.
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非小细胞肺癌组织EGFR基因扩增和突变的检测方法比较
目的 表皮生长因子受体(epidermal growth factor recptor,EGFR)基因是非小细胞肺癌(non-small cell lung carcer,NSCLC)治疗的药物靶点,其检测方法有多种,本研究利用荧光原位杂交法(fluorescence in situ hybridization,FISH)、PCR-荧光探针法及测序法分别检测NSCLC患者中EGFR基因的扩增和突变状态,对比3种检测方法的可靠性和临床实用性.方法 收集2008-01-01-2012-01-01山东大学附属千佛山医院行肺部手术的NSCLC患者242例,FISH法检测石蜡切片的EGFR基因扩增状态,PCR-荧光探针法及测序法检测EGFR基因的突变情况,对比分析3种方法所得结果的一致性及其与患者的临床病理学指标的关系.结果 FISH法检测结果显示,242例NSCLC患者中EGFR扩增阳性66例,扩增率为27.27％;测序法结果显示,85例标本存在EGFR基因突变,突变率为35.12％;PCR-荧光探针法结果显示,78例标本中存在EGFR基因的突变,突变率为32.23％.相关性分析结果显示,3种检测结果具有显著相关性,P值均＜0.001.EGFR基因的扩增和突变状态均与患者的年龄无关,但女性、腺癌患者明显高于男性、非腺癌患者,P值均＜0.001.结论 FISH、PCR-荧光探针法及测序法是检测NSCLC患者EGFR基因扩增和突变的可靠方法,3种方法的协同应用可以准确判断EGFR基因状态,指导EGFR个体化治疗方案的选择及患者预后的评估.
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两种方法检测强直性脊柱炎患者HLA-B27的应用比较
目的 比较PCR-荧光探针法(PCR-Fluorescence Probing)和流式细胞术(flow cytometry,FCM)在强直性脊柱炎( ankylosing spondylitis,AS)临床诊断中检测HLA-B27的应用价值.方法 同时用PCR-荧光探针法和流式细胞术(flow cytometry,FCM),对2007年6月-2011年6月间孝感市中心医院接诊的342例AS疑似患者进行HLA-B27检测,根据临床确诊结果和检测结果分别计算两种方法的敏感度、特异度及阴性、阳性预测值.结果 临床确诊AS患者188例,非AS患者154位.PCR-荧光探针法检测AS患者HLA-B27的敏感度、特异性较高.PCR-荧光探针法和FCM两种方法的敏感度、特异度及阴性、阳性预测值分别为0.989,0.979；0.987,0.974；0.969,0.979；0.987,0.974,两两比较其差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 PCR-荧光探针法和FCM在检测HLA-B27上比较,敏感度和特异度均较高,两种方法临床适用性相接近,PCR-荧光探针法更适宜在基层医院推广应用.PCR-荧光探针法检测HLA-B27抗原的表达即其表型,可能更有利于患者的早期诊断.
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分枝杆菌实验室诊断方法比较
目的 了解分枝杆菌实验室检测中培养、 涂片抗酸染色及PCR-荧光探针法的应用情况与诊断价值.方法 回顾2013年1月至2015年12月北京协和医院送检分枝杆菌的10326份培养、25269份涂片抗酸染色及5949份PCR-荧光探针法检测的标本种类分布及阳性标本检出率,比较3种检测方法的差异及诊断价值.结果 培养法以血液标本数量多(31.4％),涂片抗酸染色和PCR-荧光探针法均以痰标本数量多(40.3％和40.4％).PCR-荧光探针法阳性标本检出率(8.9％)明显高于培养(5.6％)和涂片抗酸染色(1.9％)(P<0.05).以培养法为金标准,PCR-荧光探针法的敏感度(42.9％)高于涂片抗酸染色法(31.3％),特异度(95.2％)低于涂片抗酸染色法(97.4％)(P均<0.05).结论 3种分枝杆菌实验室检测方法中,PCR-荧光探针法的阳性标本检出率和敏感度均较高,在实验室分枝杆菌属的检测中具有重要价值.
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PCR-荧光探针法在沙眼衣原体泌尿生殖道感染判愈中的应用
目的:评估不同判愈标准下罗红霉素治疗沙眼衣原体(C.t)泌尿生殖道感染患者治愈率的差别.方法:回顾性分析2013年1月-2017年12月在赣南医学院第一附属医院门诊确诊为C.t生殖道感染354例患者的临床资料,所有患者采用罗红霉素治疗C.t感染并完成2次随访.临床判愈标准为临床症状消失,病原学判愈标准为PCR检测临床标本C.t DNA阴性,比较不同判愈标准的患者治愈情况.结果:根据临床判愈标准,354例患者中治愈283例,治愈率为79.94％;而第1、2次PCR-荧光探针法检测的治愈率分别为73.45％和72.32％.临床判愈标准的治愈率均明显高于第1、2次PCR-荧光探针法判愈标准,差异均有统计学意义(χ2=4.37、6.07,P=0.04、0.01);但两次PCR-荧光探针法判愈标准的治愈率比较,差异无统计学意义(χ2=0.18,P=0.67).结论:PCR-荧光探针法可作为C.t泌尿生殖道感染治疗后随访较为客观的病原学判愈方法,推荐采用罗红霉素治疗患者疗程结束后1个月复查1次.
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PCR-荧光探针法在缺失型α-地中海贫血基因诊断中的应用
目的:探讨PCR-荧光探针法在缺失型α-地中海贫血基因诊断中应用的可行性.方法:选取2014年4～6月在该实验室检测的303例样本,经基因DNA提取后,按双盲对照试验,分别采用缺口PCR(Gap-PCR)和PCR-荧光探针法对各样本进行α-地中海贫血基因缺失突变检测,比较两种方法基因诊断的符合率,对两种技术检测结果不吻合的样本采取多重连接探针扩增(MLPA)技术进行验证.结果:应用Gap-PCR技术检测出α--珠蛋白基因缺失突变175例,无α-珠蛋白基因缺失突变128例;PCR-荧光探针法检测出α-地中海贫血基因缺失样本173例,无α-地中海贫血基因缺失样本130例,其中有2个样本与Gap-PCR方法的结果不符合,经MLPA方法验证2个样本结果与Gap-PCR结果一致.与Gap-PCR方法相比,PCR-荧光探针法对α-地中海贫血基因缺失检测的阳性符合率为98.85％ (173/175)、阴性符合率为100.00％(128/128)、Kappa值为0.987,总符合率为99.34％ (301/303).结论:PCR-荧光探针法用于缺失型α-地中海贫血的检测,具有快速、准确、简单实用、高通量低成本等优点,可结合血液学初筛技术应用于缺失型α-地中海贫血基因诊断.
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PCR-荧光探针法检测庆阳地区丙型肝炎病毒基因型
目的:应用PCR-荧光探针法分析庆阳地区丙型肝炎患者基因型,并对PCR-荧光探针法的各种性能进行评价.方法:收集庆阳地区289例各种丙型肝炎患者的临床资料和外周静脉血,采用PCR-荧光探针法检测其基因型,并和PCR-反向点杂交法、测序法进行比较.结果:289份HCV RNA阳性血清标本中,PCR-荧光探针法基因型及亚型检出率为99.3%(287/289),其中1b型139例(48.1%),2a型136例(47.1%),3a型7例(2.4%),3b型5例(1.7%),未分出型2例(0.7%).PCR-荧光探针法的特异度和准确度为100%,重复性良好,并与PCR-反向点杂交法、巢式PCR测序法分型结果均一致,三种方法的一致率为98.2%(56/57),差异无统计学意义(P>0.05).1b基因型患者ALT、AST、PLT和HCVRNA(lg)水平均高于2a基因型患者,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:庆阳地区HCV基因型呈现多基因型分布特点,主要为1b型和2a型,且2a型和1b型的比例相当,呈现出2a型比例升高,1b型下降的趋势;PCR-荧光探针法HCV基因分型敏感度和特异度高,方法简单,适合临床实验中应用.
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比较PCR-荧光探针法与其他方法对性病门诊中衣原体和淋球菌检出率的影响
目的 比较PCR-荧光探针法与乳胶法(即沙眼衣原体抗原检测法)和淋球菌培养法对性病门诊就诊者生殖道分泌物中沙眼衣原体和淋球菌检出率,控讨PCR-荧光探针法的优势.方法 采集2015年3月至2015年12月上海市皮肤病医院虬江分院性病门诊就诊的428位患者的生殖道分泌物,采用PCR-荧光探针法检测分泌物中的衣原体和淋球菌,并与乳胶法和淋球菌培养法对比.结果 (1) PCR荧光探针法在衣原体的检测中,428份标本中衣原体阳性检出率显著高于乳胶法(9.95％ vs 4.21％) P＜0.01. (2) PCR荧光探针法在淋球菌的检测中,428份标本中淋球菌阳性检出率显著高于淋球菌培养法(7.24％ vs 2.80％,P＜0.01). (3) PCR荧光探针法在性病门诊的应用显著增加衣原体和淋球菌阳性率的检出,有助于临床感染的早期诊断和及时治疗.结论 PCR-荧光探针法的敏感性显著高于乳胶法和淋球菌培养法,适合广泛应用于性病门诊中检测衣原体和淋球菌,有助于临床早期诊断和治疗.
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两种检测乙型肝炎病毒YMDD变异方法的临床应用
目的 比较两种检测HBV YMDD变异方法的应用价值.方法 采用PCR-荧光探针法和DNA测序法检测54例HBV感染者HBV YMDD变异情况,并比较两种方法的应用价值进行分析.结果 PCR-荧光探针法检测出YMDD野生型34例和YMDD突变型20例;其中,YMDD突变型包括YIDD突变型、YVDD突变型和YIDD+ YVDD突变型.DNA测序法检测出YMDD野生型15例和YMDD突变型39例;其中,YMDD突变型除了YIDD突变型、YVDD突变型和YIDD+YVDD突变型,还伴有L180M+M204V、L80I+ M204I等位点的突变.PCR-荧光探针法的阳性检出率为37.04％,低于DNA测序法的72.22％(P＜0.05).以DNA测序结果为相对标准,PCR-荧光探针法检测HBV YMDD变异的相对灵敏度为51.28％,符合率为64.81％.结论 与PCR-荧光探针法比较,DNA测序法检测HBV YMDD变异具有较高的检出率和符合率,更适用于临床.
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济宁市2010-2011年手足口病病原体初步调查
目的 了解济宁市引起手足口病病原体的构成,为临床诊断和治疗提供依据,也为了科学防治手足口病提供理论依据.方法及结果 用PCR-荧光探针法检测4651例手足口病患者大便标本EV71阳性2973例(63.92％),2011年与2010年相比EV71感染率有所增加,而且有统计学差异(P＜0.05).2011年开始检测EV、EV71和CA16,共2809例,其中EV71阳性1994例(70.96％),CA16阳性77例(2.74％),EV单独阳性323例(11.51％),没有发现EV71和CA16合并感染的患者,3项全阴416例(14.81％).结论 济宁市2010-2011年手足口病以EV71感染为主,占63.92％,CA16占2.74％,其它肠道病毒占11.51％,没有发现EV71和CA15合并感染.
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583例HBSAg阳性患者乙型肝炎病毒DNA检测与分析
目的 通过对乙型肝炎表面抗原阳性患者进行DNA检测,了解乙型肝炎病毒的传染性.方法 对来自鹤壁市医院门诊乙型肝炎血清标志物检测阳性患者进行乙型肝炎DNA检测.结果 583例血清标本HBV-DNA阳性358例,阳性率61.41％.结论 HBV-DNA的检测为预防乙肝流行和临床治疗乙肝提供实验室依据.
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多重PCR与PCR-荧光探针法检测外环境霍乱弧菌的比较研究
目的:对比多重PCR与PCR-荧光探针法从外环境中直接检测霍乱弧菌的效果.方法:收集40份水样和40份水产品样本,再以20份已知特性菌株作对照.将上述样本和菌株进行培养后提取模板,分别进行多重PCR和PCR-荧光探针法检测.结果:两种方法均从40份水样中检出14份非O1非O139群霍乱弧菌,两种方法均能从40份水产品中检出29份O1群霍乱弧菌及3份非O1非O139群霍乱弧菌.以上检出霍乱弧菌均可经血清学试验证实.20份已知特性样本两种方法均鉴定无误,低检出限均为102 cfu/ml.结论:两种方法灵敏度和特异度均极高,多重PCR方法因能同时进行致病力的初步判断,检验速度相对较快,成本较为经济而更为实用.
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双功能氧化酶2在尖锐湿疣患者皮损中的表达及与HPV型别关系的研究
目的:检测尖锐湿疣(CA)患者皮损中是否表达双功能氧化酶2(Duox2),并分析其与HPV6/11,16/18型别之间的关系,以初步探讨其与CA发病之间的可能联系.方法:用PCR-荧光探针法检测40例CA患者皮损及对照组(20例,正常皮肤组织)中Duox2的mRNA表达水平并比较,聚合酶链反应(PCR)检测及鉴定CA组织中人乳头瘤病毒(HPV)感染类型:HPV6/11、HPV16/18.结果:CA组患者皮损中Duox2 mRNA表达水平明显高于对照组(t=-0.24,P=0.007).40例患者中仅HPV6/11阳性23例,仅HPV 16/18阳性8例,HPV6/11DNA阳性组Duox2 mRNA表达水平明显低于HPV16/18DNA阳性组(=4.92,P=0.001).结论:CA患者中,HPV病毒感染特别是HPV16、18病毒会引起Duox2的水平增高.
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三种诊断方法在丙型肝炎中的应用
目的 探讨三种检测方法作为临床筛选和诊断丙型肝炎的的优缺点.方法 随机收集71例丙肝患者血清作为阳性组,63例非丙肝患者血清作为阴性组,采用PCR-荧光探针法检测HCV RNA,同时采用CMIA法和ELISA法检测Anti-HCV.结果 阳性组中,PCR-荧光探针法灵敏度为87.32％,CMIA为100％,ELISA为97.18％;经卡方检验分析,x2=4.95,两种Anti-HCV检测方法均与PCR-荧光探针法检测结果的差异有统计学意义(P＜0.05);而两种Anti-HCV检测方法之间差异无统计学意义(P＞0.05);阴性组中,HCV RNA特异度为100％,CMIA为95.23％,ELISA为98.41％;经x2检验分析,x2=3.84,三种诊断方法特异度的差异无统计学意义(p＞0.05).结论 三种方法各有利弊,在诊断丙型肝炎方面,本文推荐采用其中一种抗体检测方法与PCR-荧光探针法联合检测;在疗效观察方面,本文推荐PCR-荧光探针法;在大规模体检时,考虑经济因素,本文推荐ELISA;在Anti-HCV检测结果为阳性,或者两种Anti-HCV检测方法结果不一致时,需联合HCV RNA检测.
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丙型肝炎病毒血清学检测的方法学评价
目的 比较酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光微粒子免疫检测法(CMIA)、PCR-荧光探针法三种方法对同一种样本检测结果的一致性.方法 120例疑似丙型肝炎患者的血清标本同时用ELISA与CMIA检测HCV-Ab,PCR -荧光探针法检测HCV-RNA.结果 在不考虑CMIA检测HCV-Ab结果为可疑的情况下,ELISA与CMIA检测HCV-Ab结果具有一致性.当CMIA检测HCV-Ab结果为可疑时,ELISA检测HCV -Ab的OD值与CMIA检测HCV -Ab的S/CO值没有相关性.当CMIA检测HCV-Ab结果为阳性时,ELISA检测HCV -Ab的OD值与PCR -荧光探针法检测HCV-RNA的含量没有相关性,CMIA检测HCV-Ab的S/CO值与PCR-荧光探针法检测HCV-RNA的含量也没有相关性.结论 在临床检测丙型肝炎病毒感染时建议采用化学发光微粒子免疫检测法(CMIA)检测HCV-Ab的同时也采用PCR -荧光探针法检测HCV-RNA含量,这样不仅可以降低漏诊,同时也为临床抗病毒提供有效的医学数据.由于ELISA检测HCV-Ab仍然具有可靠性,对于基层医院,ELISA检测HCV-Ab仍是首选的方法.
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化学发光微粒子免疫分析在丙型肝炎诊断中的应用价值
目的 研究化学发光微粒子免疫分析(CMIA)在丙型肝炎诊断中的应用价值.方法 收集2014年4月至2015年4月该院住院患者350例血清标本,依照临床诊断分为丙型肝炎病例2(128例)和非丙型肝炎对熙组(222例),分别用酶联免疫吸附试验(ELISA)、CMIA、PCR-荧光探针法和重组免疫印迹法(RIBA)检测,并对结果进行比较.结果 丙型肝炎病例组的ELISA,CMIA及PCR-荧光探针法检测阳性率高于非丙型肝炎对照2,RIBA则较低.CMIA的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率和约登指数分别为95.3％、95.5％、92.4％、97.3％、95.4％和90.8％.CMIA与ELISA比较,CMIA的特异度、阳性预测值、符合率和约登指数比ELISA高,差异有统计学意义(P＜0.05).CMIA与PCR比较,CMIA的灵敏度、阴性预测值、符合率和约登指数比PCR-荧光探针法高,差异有统计学意义(P＜0.05),特异度比PCR-荧光探针法低,差异有统计学意义(P＜0.05).CMIA与RIBA比较,CMIA的灵敏度、阴性预测值和约登指数比RIBA高,差异有统计学意义(P＜0.05),特异度比RI-BA低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CMIA具有高的灵敏度和阴性预测值,较高的特异度和阳性预测值,符合率高,约登指数高且诊断价值高.
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血清与血浆定量检测丙型肝炎病毒的对照研究
目的 探讨采用血清和血浆两种标本同时检测丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染者HCV病毒含量的差异性.方法 同时收集256例HCV感染者血清和血浆标本,采用PCR-荧光探针法(RT-PCR)进行HCV-RNA的定量检测.结果 血清HCV-RNA检出率为69.92%(179/256),血浆的检出率为85.16%(218/256),差异有统计学意义(X2=5.25,P<0.05).同时对两种标本检测大于103 IU/ml的定量结果 进行统计分析,差异有统计学意义(P=0.032).结论 采用血浆标本测定HCV-RNA检出率明显高于血清标本,并且分离标本快速,避免溶血和RNaes的影响,值得推广应用.
关键词： 血清 血浆 丙型肝炎病毒核糖核酸 丙型肝炎病毒 PCR-荧光探针法
