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网状蛋白4基因rs2588519T/C和rs7582359A/G多态性在广西人群中的分布
目的 研究广西人群中网状蛋白4(RTN4)基因rs2588519 T/C及rs7582359 A/G位点多态性的分布特征,对比分析不同种族间这两个位点基因型及等位基因频率的分布差异.方法 运用多重单碱基延伸技术和DNA测序方法检测323例广西健康体检者的RTN4基因rs2588519 T/C及rs7582359 A/G位点基因型,分析其基因型及等位基因频率的分布,并对比HapMap(国际人类基因组单体型图计划)公布的欧洲人、日本人、非洲人和北京人的多态性数据.结果 在广西人群中,RTN4基因rs2588519 T/C位点存在CC(53.0％)、TC(38.7％)、TT(8.3％)3种基因型;rs7582359 A/G位点存在AA(7.4％)、AG(37.5％)、GG(55.1％)3种基因型,这两位点的基因型及等位基因频率在男女间差异无统计学意义(P＞0.05).rs2588519 T/C位点基因型与非洲人群比较差异具有统计学意义(P＜0.05),其等位基因则与欧洲人、日本人和非洲人差异具有统计学意义(P＜0.05);rs7582359 A/G位点基因型及等位基因与欧洲人、非洲人比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 RTN4基因rs2588519 T/C及rs7582359 A/G位点多态性分布存在不同程度的种族差异.
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广西人群白细胞介素17A基因rs3819024和rs1974226的多态性
目的 探讨白细胞介素17 A(IL-17A)基因rs3819024和rs1974226多态性在广西人群中的分布特点,比较不同种族和地区人群间两位点基因型和等位基因频率的差异.方法 采用SNaPshot SNP技术和DNA测序法,检测443例广西人rs3819024和rs1974226多态性,统计分析两位点基因型和等位基因频率与国际人类基因组单体型图计划公布的北京汉族人群(HapMap-CHB)、日本人群(HapMap-JPT)、欧洲人群(HapMap-CEU)和非洲人群(HapMap-YRI)的差异.结果 广西人群rs3819024存在GG、GA和AA 3种基因型,而rs1974226存在CC、CT和TT 3种基因型,两位点基因型和等位基因频率在不同性别间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).广西人群rs3819024基因型和等位基因频率与HapMap-CHB人群比较,差异均无统计学意义(P＞0.05),然而与HapMap-JPT、HapMap-CEU和HapMap-YRI人群比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).而广西人群rs1974226基因型和等位基因频率与HapMap-CHB和HapMap-JPT人群比较,差异均无统计学意义(P＞0.05),然而与HapMap-CEU和HapMap-YRI人群比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 广西人群存在IL-17A基因rs3819024和rs1974226多态性,与其他种族和地区人群比较存在不同程度的差异.
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hTERT反义基因对舌鳞癌Tca8113细胞端粒酶活性的影响
目的研究hTERT反义基因对舌鳞癌Tca8113细胞株的影响.方法应用RT-PCR法获得反义hTERT基因并转染舌鳞癌细胞,采用TRAP-DNA测序法检测转染前后细胞的端粒酶活性,并对细胞生长速度和倍增时间进行比较.结果转染后细胞的端粒酶活性及生长速度较转染前明显下降.结论 hTERT反义基因的表达可显著抑制舌鳞癌细胞的端粒酶活性和生长速度.
关键词： 端粒酶 hTERT基因反义基因 舌鳞癌细胞 DNA测序法 -
实时荧光PCR探针法和DNA测序法应用于CYP2C9和VKORC1基因检测的对比研究
目的:比较实时荧光PCR探针法和DNA测序法检测细胞色素氧化酶P450(CYP2C9)和维生素K环氧化物还原酶复合体1(VKORC1)基因多态性的一致性,建立适用于临床推广的华法林基因多态性检测的方法.方法:本研究随机收集清远市人民医院20例就诊患者的全血标本,应用实时荧光PCR探针法和DNA测序法检测其CYP2C9和VKORC1基因的多态性,结果运用Excel软件统计并进行比较分析.结果:两种方法对CYP2C9和VKORC1基因多态性的检测结果一致,且实时荧光PCR探针法比DNA测序法更简易、经济、快捷.结论:与DNA测序法相比,应用实时荧光PCR探针法检测CYP2C9和VKORC1基因的突变具有较高的临床应用价值,比较适用于临床检测.
关键词： 实时荧光PCR探针法 DNA测序法 CYP2C9 VKORC1 -
两种检测乙型肝炎病毒YMDD变异方法的临床应用
目的 比较两种检测HBV YMDD变异方法的应用价值.方法 采用PCR-荧光探针法和DNA测序法检测54例HBV感染者HBV YMDD变异情况,并比较两种方法的应用价值进行分析.结果 PCR-荧光探针法检测出YMDD野生型34例和YMDD突变型20例;其中,YMDD突变型包括YIDD突变型、YVDD突变型和YIDD+ YVDD突变型.DNA测序法检测出YMDD野生型15例和YMDD突变型39例;其中,YMDD突变型除了YIDD突变型、YVDD突变型和YIDD+YVDD突变型,还伴有L180M+M204V、L80I+ M204I等位点的突变.PCR-荧光探针法的阳性检出率为37.04％,低于DNA测序法的72.22％(P＜0.05).以DNA测序结果为相对标准,PCR-荧光探针法检测HBV YMDD变异的相对灵敏度为51.28％,符合率为64.81％.结论 与PCR-荧光探针法比较,DNA测序法检测HBV YMDD变异具有较高的检出率和符合率,更适用于临床.
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PCR-SSP法检测HPA-15基因频率的可靠性分析
目的 探讨聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)法检测人类血小板抗原(HPA)-15基因的可靠性.方法 设计序列特异性引物,采用PCR-SSP法对惠州地区100例无偿血小板献血者进行HPA-15基因分型,同时采用DNA测序法检测HPA-15基因频率,与PCR-SSP方法检测结果进行比对.结果 PCR-SSP法检测HPA-15a和HPA-15b的基因频率分别为0.535 0和0.465 0,DNA测序法检测HPA-15a和HPA-15b的基因频率分别为0.530 0和0.470 0,两种方法检测HPA-15基因频率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PCR-SSP方法可作为一种快速、便捷、可靠的筛查HPA-15基因频率技术,可为临床病人提供HPA-15相合的血小板.
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qPCR-HRM曲线分析技术与普通PCR加直接测序法检测胶质瘤EGFR突变比较
目的:比较实时聚合酶链反应-高分辨率融解(qPCR-HRM)曲线分析技术和普通PCR法加直接测序法检测胶质瘤患者EGFR基因突变类型,探讨适用于临床的EGFR基因突变检测方法,为胶质瘤患者术后放射、化学治疗及预后判断研究提供可靠的依据.方法:用普通PCR加测序法与qPCR-HRM曲线分析技术检测胶质瘤患者EGFR基因突变类型,检测结果比较采用卡方检验.结果:两种方法检测EGFR外显子19基因突变结果比较差异无统计学意义,且qPCR-HRM曲线分析技术比直接测序法更快捷、灵敏.结论:与直接测序法相比,qPCR-HRM曲线分析技术可能更适用于临床检测胶质瘤患者标本EGFR突变性质.
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基因芯片法检测结核分枝杆菌耐药性的可行性分析
目的：分析基因芯片法检测结核分枝杆菌（MTB）耐药性的灵敏度、特异度及符合率，为临床提供方便、准确、快速的MTB耐药性的检测方法。方法以DNA测序法为金标准，采用基因芯片法与比例法药敏试验同时对2014年8～12月收治的250例结核病患者的痰液标本分离 M T B菌株进行耐药性检测，比较两种方法检测 M T B对利福平和异烟肼耐药性的效能。结果基因芯片法与比例法药敏试验检测MTB对利福平的耐药率分别为3．0％、3．5％，对异烟肼的耐药率分别为6．7％、8．2％。以DNA测序法为金标准，基因芯片法检测MTB对利福平与异烟肼耐药性的灵敏度、特异度及符合率均高于比例法药敏试验，且检测时间短于比例法药敏试验，差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论运用基因芯片法检测MTB对利福平和异烟肼的耐药性，具有较高的灵敏度、特异度与符合率，可以代替比例法药敏试验成为检测MTB耐药性的有效方法。
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化疗药物代谢酶相关基因SNPs分析及其在肿瘤个体化治疗中的探讨
目的 建立化疗药物代谢酶相关基因SNPs位点分析方法 ,探讨其在肿瘤个体化治疗中的可行性.方法 自行设计PCR引物扩增化疗药物代谢酶相关基因DPYD、GSTP1、MTHFR和XRCC1相关片段,建立基于基因测序的SNPs分析方法 ,并用于临床4例肿瘤患者、2例健康对照样品分析.结果 成功建立了化疗药物代谢酶相关基因SNPs位点分析方法 .6例样品共得到24个测序结果 ,其中1例肿瘤患者GSTP1基因为突变型,预测其化疗疗效较好,可减少药物剂量.结论 药物代谢酶相关基因DNA测序能为临床制订个体化治疗方案提供依据,指导医生选择合适并适量的化疗药物.
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实时荧光定量PCR和测序法检测非小细胞肺癌EGFR基因突变的比较
背景与目的 以厄洛替尼(Erlotinib)为代表的小分子表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂在治疗非小细胞肺癌已经取得很好的疗效.许多研究发现表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变与酪氨酸激酶抑制剂的疗效密切相关.本研究目的是通过比较荧光定量PCR(Real-time PCR)和DNA测序法检测EGFR基因突变的一致性,建立适用于临床的EGFR基因突变检测方法.方法 应用荧光定量PCR(Real-time PCR)及DNA测序法检测103例非小细胞肺癌标本的EGFR外显子19和21的基因突变,结果比较采用卡方检验.结果 两种方法对EGFR外显子19和21的基因突变的榆测结果无统计学差异,且荧光定量PCR法比测序法更快捷和灵敏.结论 与测序法相比,荧光定量PCR更适用于临床检测.
