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喜树碱抑制舌鳞癌Tca8113细胞增殖和诱导凋亡的作用
目的研究喜树碱对舌鳞癌Tca8113细胞增殖和凋亡的作用.方法将不同浓度的喜树碱分别作用于Tca8113细胞24、48、72 h.分别用MTT法、光镜和电镜观察,流式细胞术及琼脂糖凝胶电泳法检测细胞增殖和凋亡状况.结果喜树碱对Tca8113细胞的增殖有明显的抑制作用,且在一定的浓度范围内呈时间和浓度依赖性.佳浓度范围为0.016～8μg/mL.镜下可见典型的凋亡细胞形态学特征.流式细胞术检测,喜树碱浓度≥1μg/mL,作用48 h,可引起细胞凋亡,细胞阻滞于S期.琼脂糖凝胶电泳呈凋亡特征性梯状带.结论喜树碱对Tca8113细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用,其抗肿瘤机制与诱导凋亡有关.
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hTERT反义基因对舌鳞癌Tca8113细胞端粒酶活性的影响
目的研究hTERT反义基因对舌鳞癌Tca8113细胞株的影响.方法应用RT-PCR法获得反义hTERT基因并转染舌鳞癌细胞,采用TRAP-DNA测序法检测转染前后细胞的端粒酶活性,并对细胞生长速度和倍增时间进行比较.结果转染后细胞的端粒酶活性及生长速度较转染前明显下降.结论 hTERT反义基因的表达可显著抑制舌鳞癌细胞的端粒酶活性和生长速度.
关键词： 端粒酶 hTERT基因反义基因 舌鳞癌细胞 DNA测序法 -
舌鳞癌细胞热处理后HSP27的表达变化
目的 观察热疗后舌鳞癌Tscca细胞中热休克蛋白27 (heat shock protein 27,HSP27)的变化及其对凋亡的作用.方法 常规培养的Tscca细胞分6组,对照组不加热,其余5组43℃水浴法热处理40 min后分别常规培养2、4、8、12、24h,应用蛋白组学方法检测HSP27变化.运用空载质粒(pcDNA3)、pcDNA3-HSP27质粒转染Tscca细胞24h,免疫印迹分析靶细胞中的HSP27表达.43℃水浴处理未转染及转染组细胞0 min、40 min,再培养24 h后流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 加热后12 h内细胞内HSP27持续升高.HSP27质粒转染细胞中HSP27蛋白表达增强.0 min热处理,未转染组、pcDNA3转染组及HSP27质粒转染组细胞凋亡率无差异;40min热处理,未转染组与pcDNA3转染组凋亡率无差异,HSP27质粒转染组分别与未转染组及空载质粒转染组比较,均有差异(P＜0.05).结论 热处理后舌鳞癌Tscca细胞中HSP27含量升高.HSP27的变化与Tscca细胞凋亡的变化有关.
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姜黄素对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖和凋亡作用研究
目的 探讨姜黄素对体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞增殖和凋亡作用.方法 不同浓度的姜黄素处理体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,并行凋亡相关蛋白Fas、P53、Bcl-2的免疫组化测定.结果 在10、30、50、70 μmol/L浓度范围内,姜黄素可剂量依赖性抑制人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的作用.30、40、50 μmol/L三个不同浓度姜黄素处理组的凋亡指数与对照组比较差异有统计学意义(P ＜ 0.05),细胞凋亡率与药物浓度正相关.30、40、50 μmol/L不同浓度姜黄素处理组Fas、P53、Bcl-2凋亡细胞阳性率与对照组比较差异具有统计学意义(P ＜ 0.05).结论 姜黄素可显著抑制人舌鳞癌Tca8113细胞增殖,并诱导其凋亡,其作用呈剂量依赖关系.
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沉默Beclin1基因抑制自噬促进舌鳞状细胞癌细胞增殖及侵袭转移
目的 探讨抑制自噬基因Beclin1表达对舌鳞状细胞癌(以下简称舌鳞癌)细胞增殖及侵袭转移的影响,了解舌鳞癌侵袭转移的调控机制.方法 利用RNAi技术,针对人cDNA序列设计Beclin1干扰序列,用脂质体Lip02000包裹后转染至舌鳞癌UM2细胞.实验设空白对照组、脂质体2000(Lip02000)组、阴性siRNA组和Beclin1 siRNA组,通过蛋白印迹法检测Beclin1、LC3的表达变化；CCK-8法检测细胞增殖能力变化；Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力改变;SPSS13.0统计软件进行数据分析.结果 转染Beclin1 siRNA对UM2细胞Beclin1有显著敲减作用(P＜0.05),自噬标记蛋白LC3-Ⅱ的表达明显降低(P＜0.05),细胞增殖较对照组增快(P＜0.05),细胞迁移和侵袭转移能力明显增强.结论 沉默Beclin1表达可下调舌鳞癌细胞自噬水平,并促进舌鳞癌细胞增殖和侵袭能力.
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雷帕霉素诱导自噬抑制舌鳞癌细胞增殖和迁移
目的 探讨自噬诱导对舌鳞癌细胞增殖和迁移能力的影响.方法 应用雷帕霉素(Rap)诱导上调舌鳞癌Tca81 13细胞自噬活性.Western blot检测诱导后Tea8113细胞自噬标记蛋白Beclinl和LC3的表达变化;MTT法检测自噬诱导对细胞增殖的影响;Wound.healing检测诱导后细胞迁移能力改变;SPSS 19.0统计软件进行数据分析.结果 Rap诱导6h即可上调舌鳞癌Tca8113细胞自噬标记蛋白LC3-II表达,24 h时LC3-II表达强,自噬活性高(P
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片仔癀联合多西他赛通过STAT3信号通路抑制Tca8113细胞的增殖
[目的]探讨片仔癀(Pien Tze Huang,PZH)联合多西他赛(docetaxel,DOC)对舌鳞癌Tca8113细胞凋亡、细胞增殖的影响及可能机制.[方法]PZH与DOC联合作用Tca8113细胞,应用Hoechst 33258染色法观察细胞核形态的变化,MTT法检测细胞的增殖,Western blotting法检测两药联用对Tca8113细胞中STAT3等信号通路的影响.[结果]PZH与DOC联用可使细胞核呈现致密浓染、核固缩等现象,对Tca8113细胞增殖的抑制作用有协同作用.联合给药组与单药组相比可明显降低p-STAT3和Bcl-2蛋白的表达.[结论]PZH与DOC联合应用可通过抑制STAT3通路抑制Tca8113细胞的增殖.
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EGCG对舌鳞癌细胞CAL-27的EGFR、67LR及VEGF表达的影响
目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对舌鳞癌细胞CAL-27的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、相对分子质量为67 000的层粘连蛋白受体(67 000 dalton laminin receptor,67 LR)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor receptor,VEGF)表达的影响,从而揭示EGCG抑致舌鳞癌细胞增殖的可能机制.方法:不同浓度EGCG处理CAL-27细胞24h后,MTT法检测细胞增殖活性;Real Time PCR法和Western Blot法分别检测CAL-27细胞EGFR、67LR、VEGF的mRNA及蛋白表达情况；Western Blot 法检测磷酸化EGFR(p-EGFR)的蛋白表达水平.结果:EGCG浓度依赖性抑制CAL-27细胞的增殖,且抑制其EGFR、67LR、VEGF的mRNA和蛋白、p-EGFR的蛋白表达.结论:EGCG能影响EGFR 、67LR及VEGF的转录和翻译水平以及p-EGFR蛋白表达,这可能是EGCG抑制舌鳞癌细胞CAL-27增殖的重要机制.
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Semaphorin3F基因转染舌鳞状细胞癌细胞的方法研究
目的:探讨阳离子脂质体介导转染舌癌细胞的可行性,筛选含有Semaphorin3F(SEMA3F)的舌鳞状细胞癌细胞,检测SEMA3F基因在舌癌细胞中的表达.方法:应用阳离子脂质体转染方法将SEMA3F导入Tca8113细胞中,G418筛选阳性克隆,用RT-PCR检测转染组细胞中SEMA3F基因的表达.结果:Tca8113细胞中SEMA3F基因表达下调.筛选14d后,含有SEMA3F的转染组细胞克隆形成,SEMA3F在转染组细胞中表达稳定.结论:阳离子脂质体介导转染的外源性基因SEMA3F在Tca8113细胞获得稳定表达,为进一步实验奠定了基础.
关键词： 阳离子脂质体 舌鳞癌细胞 Semaphorin3F 基因转染 -
中药"参阳"方对人舌鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤作用
目的:前瞻性研究表明,中药"参阳"方能够延长口腔癌患者的生存期并提高生存率,但其抗癌机制尚不十分明确.本研究的主要目的是观察中药"参阳"方对人舌鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤作用,并探讨其可能的作用机制.方法:将体外培养的人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞接种于裸鼠皮下,建立人舌鳞癌移植瘤模型,共48只,随机分为4组:"参阳"方A组、B组、阳性对照组和阴性对照组.采用灌胃方法进行药物干预,共30d,观察各组的抑瘤效果及对裸鼠一般状况、生存时间和脾脏指数的影响.结果:每只鼠每天喂养"参阳"方72.8mg,能轻度抑制Tca8113细胞移植瘤的生长,抑瘤率为22.04%;裸鼠的脾脏指数明显提高(t检验,P＜0.05);生命延长率为18.9%.主要脏器的组织学检查未见病理改变,表明所用剂量药物无明显的毒副反应.结论:"参阳"方对荷瘤鼠的直接抗癌作用较弱,其对口腔鳞癌的治疗作用可能是通过调节机体的免疫功能而实现.
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表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)与Ni2+共同作用对舌鳞癌细胞cyclinD1和survivin基因表达的影响
目的 研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)及镍离子(Ni2+)共同作用对舌鳞癌细胞系Cat-27 cyclinD1和survivin基因表达的影响.方法 MTT法检测Cal-27的细胞存活率；real-time PCR法检测cyclinD1及survivin mRNA水平表达的影响；Western blot法检测cyclinD1和survivin蛋白水平的表达情况.结果 高浓度EGCG(＞ 100 μmol/L)可明显抑制Cal-27生长,且对细胞cyclinD1和survivin 基因转录及蛋白表达有明显下调作用(P＜0.05);Ni2+与EGCG共同作用增加了对Cal-27的抑制作用,cyclinD1和survivin表达更加显著下降(P＜0.05).结论 Ni2+与EGCG共同作用后可增强EGCG对细胞生存率及cyclinD1和survivin基因表达的抑制作用,两者起协同作用.
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EGF和TGF-α对舌鳞癌细胞周期调控的信号通路研究
目的:研究EGF和TGF-α调控舌鳞癌细胞周期分布的信号通路.方法:不同浓度EGF和TGF-α作用体外培养的舌鳞癌细胞株TCA-8113,流式细胞仪检测细胞周期分布,细胞免疫组化法研究p38-MAP kinase、c-myc、c-fos和NF-κB在舌鳞癌细胞中的表达水平.结果:EGF和TGF-α效应类似,与对照组相比,G1/G0期细胞比例下降,S期细胞比例增加,p38-MAP kinase、c-myc和c-fos表达水平下调.NF-κB p65表达水平上调,但量效关系不同.EGF和TCF-α分别上调和下调NF-κB p50表达.结论:EGF和TGF-α对舌鳞癌细胞周期分布的影响差异与NF-κB相关,NF-κB可能与舌鳞癌发生关系密切.
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RNA 干扰抑制人舌鳞癌细胞 MMP-1表达对细胞侵袭、转移能力的影响
目的：探讨基质金属蛋白酶‐1（MMP‐1）短发夹RNA（shRNA）的慢病毒表达载体在人舌鳞癌细胞株CAL27中对MMP‐1表达及细胞侵袭、转移的作用。方法设计合成用于干扰人MMP‐1的shRNA并与载体 PLKO ．1连接，构建重组的慢病毒载体质粒 PLKO ．1／MMP‐1‐shRNA ，稳定感染CAL27细胞。Western blot检测CAL27细胞中MMP‐1蛋白表达，划痕实验和Transwell实验分别检测CAL27细胞的迁移和侵袭能力。结果成功构建慢病毒载体 PLKO ．1／MMP‐1‐shRNA ；其能明显下调CAL27细胞中MMP‐1蛋白表达，抑制CAL27细胞迁移和侵袭能力。结论慢病毒载体PLKO ．1／MMP‐1‐shRNA能有效抑制MMP‐1表达、细胞迁移和侵袭。MMP‐1可能是舌鳞癌细胞转移的重要调节因子。
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FasL的特异性miRNA阻断舌鳞癌细胞免疫逃逸的研究
目的 研究特异性微小RNA(miR)-590对舌鳞癌细胞SCC-3 Fas配体(FasL)的表达的影响.方法 将合成的miR-590 mimics或miR-590抑制剂转染至SCC-3细胞.通过RT-PCR和Western blot法检测SCC-3中FasL信使RNA(mRNA)和蛋白的表达;将转染后的SCC-3细胞在顺铂(DDP)5 mg/L处理下,在不同时间段通过MTT法绘制细胞生长曲线,并通过针对FasL的miR-590的抑制剂从反面验证miR-590的作用.结果 miR-590可以在mRNA和蛋白水平上降低SCC-3细胞FasL的表达;转染miR-590后SCC-3细胞对于DDP的耐药性降低.结论 miR-590可以有效抑制SCC-3细胞FasL的表达,降低SCC-3的DDP的耐药性,从而可能降低和减少其对免疫活性细胞的凋亡诱导和杀伤作用,从而阻断肿瘤细胞的免疫逃逸,为舌鳞癌的生物治疗提供了新的靶点.
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FasL反义寡核苷酸对舌鳞癌细胞Tca8113增殖和凋亡的影响
目的 探讨Fas配体(FasL)反义寡核苷酸(ASO)对舌鳞癌细胞系Tca8113细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计合成特异性的FasL ASO,并用阳离子脂质体介导转染Tca8113细胞.荧光倒置显微镜观察及流式细胞术(FCM)检测转然前后的转染效率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度ASO在转染后不同时间对Tca8113 细胞增殖的影响;FCM测定转染前后诱导 Tca8113细胞的凋亡情况.结果 通过荧光倒置显微镜观察及FCM检测发现在脂质体的量一定的情况下,在一定范围内,ASO 的浓度越高,转染效率越高.MTT 结果显示ASO 对Tca8113细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.05),FCM对细胞凋亡的检测结果显示反义链组与正义链组、空白对照组及脂质体组相比,总凋亡率有明显差异(P<0.05).结论 FasL ASO对Tca8113细胞的增殖有一定的抑制作用,能够促进其凋亡,因此FasL ASO有望成为舌鳞癌的潜在的基因治疗方法.
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X线对舌鳞癌细胞系Tca8113细胞周期的影响
目的:探讨放射线对人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞周期变化的影响.方法:采用流式细胞仪检测不同剂量X线照射后不同时间点的细胞周期变化.结果:人舌鳞癌细胞系Tca8113与未照射细胞相比,经X线处理后,S期减少,G2/M期阻滞程度具有剂量和依赖性,G2/M期阻滞在12 h与24 h时与照射剂量呈正相关.在12 h或24 h达到阻滞高峰后,48 h的结果显示大峰值回落.结论:人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞X线照射后存活后代生长延缓,放射敏感性增高,呈S细胞减少和G2期阻滞.
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周氏克金岩方促进舌苔形成相关细胞凋亡作用机制
目的 探讨周氏克金岩方促进舌苔形成相关细胞凋亡的作用机制.方法 体外培养SAS和TCA-8113舌鳞癌细胞,撤除血清模拟舌苔形成相关细胞凋亡环境,周氏克金岩方正丁醇部位作用舌鳞癌细胞,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡,ELISA检测细胞培养上清PGE2含量.结果 与对照组相比,周氏克金岩方丁醇部位能够降低舌鳞癌细胞的增殖活性,促进SAS和TCA-8113细胞凋亡率升高,抑制细胞分泌PGE2,且具有剂量和时间依赖性.结论 周氏克金岩方正丁醇部位促进舌苔形成相关细胞凋亡与抑制PGE2合成相关.
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缺氧促进舌苔形成相关细胞凋亡的分子机制
目的 探讨缺氧对舌苔形成相关细胞凋亡的影响.方法 将CoCl2作用于撤血清舌鳞癌Tca-8113细胞,建立化学性缺氧模型.MTT法检测细胞增殖活性,荧光染色检测细胞凋亡,琼脂糖电泳观察DNA Ladder,流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡,Western blotting检测Akt、NF-κB p50、NF-κB p65、Bax、Bcl-2、HSP 70的表达水平.结果 50～400μmol/L CoCl2作用细胞8～24h能明显抑制撤血清舌鳞癌细胞增殖(P＜0.05),并具有量效和时效关系.Hoechst荧光染色显示CoCL2可引起撤血清舌鳞癌细胞凋亡.流式细胞术显示100,200,400μmol/L CoC12 12h缺氧-12h复氧可促进撤血清舌鳞癌细胞凋亡(P＜0.05),且凋亡率随CoCl2的浓度增高.Western blotting表明12h缺氧-12h复氧可上调Bax、HSP 70、NF-κB p50,下调NF-κB P65表达(100μ,mol/L CoCl2),促进舌鳞癌细胞凋亡.结论 缺氧是促进舌苔形成相关细胞凋亡的重要因素,其发生机制可能受NF-κB、Bax、HSP 70蛋白的调控.
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三氧化二砷纳米粒对舌鳞癌细胞PI3K/AKT通路的影响
目的:探讨三氧化二砷固体脂质纳米粒对舌鳞癌Tca8113细胞作用前后PI3K/AKT信号通路关键因子表达情况.方法:使用MTT的方法观察三氧化二砷固体脂质纳米粒对舌鳞癌Tca8113细胞作用后的存活率情况,并用使用Western blot检测方法检测PI3K/AKT信号通路关键蛋白PI3K、p-AKT、AKT的表达和变化.结果:三氧化二砷固体脂质纳米粒对舌鳞癌细胞作用后,MTT显示舌鳞癌Tca8113细胞增殖抑制,且具有浓度依赖性,PI3K/AKT信号通路关键因子PI3K、p-AKT、AKT表达降低.结论:三氧化二砷纳米粒降低舌鳞癌细胞的PI3K/AKT通路信号传导.
关键词： 三氧化二砷纳米粒 舌鳞癌细胞 PI3K/Akt通路 -
人脐带间充质干细胞条件培养基对舌鳞癌Cal-27细胞增殖的影响
目的:探讨人脐带间充质干细胞(HUC-MSCs)条件培养基对舌鳞癌Cal-27细胞生物学特性的影响.方法:培养HUC-MSCs和Cal-27细胞,倒置显微镜下观察细胞形态;将HUC-MSCs条件培养基与Cal-27细胞体外间接共培养,CCK-8法检测Cal-27细胞的增殖活性,绘制生长曲线;通过Western blot法检测HUC-MSCs条件培养基对Cal-27细胞凋亡蛋白及Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白的表达.结果:生长曲线结果显示,HUC-MSCs条件培养基可抑制Cal-27细胞增殖,并呈一定的浓度依赖性,这些变化伴随Cal-27细胞内PARP-1表达上调,Bcl-2、β-catenin、c-Myc表达下调.结论:HUC-MSCs条件培养基可抑制Cal-27细胞增殖并促使其凋亡,这可能与细胞内的Wnt/β-catenin信号通路被抑制有关.
