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金黄色葡萄球菌分型方法的建立及应用
目的 建立食源性金黄色葡萄球菌的分型与溯源方法.方法 以血浆凝固酶为目标基因,通过PCR方法对食源性金黄色葡萄球菌进行鉴定,同时借助全自动微生物基因指纹鉴定系统(RiboPrinter)对其进行分型和类聚状况分析.结果 PCR方法可特异性鉴定金黄色葡萄球菌,RiboPrinter方法可将金黄色葡萄球菌分为6个亚型,各亚型类聚状况平均分布.结论 上述方法的建立可准确地将金黄色葡萄球菌进行鉴定和分型,分析类聚分布与同源性关系,为食源性致病菌的快速鉴定与分型溯源提供技术手段.
关键词: 金黄色葡萄球菌 血浆凝固酶 全自动微生物基因指纹鉴定系统 基因分型 食源性致病菌 -
健康人ABO型血浆与兔血浆在检测金黄色葡萄球菌血浆凝固酶中的效果比对
目的 在金黄色葡萄球菌血浆凝固酶检测中,人血浆较兔血浆方便易得,用人血浆做本实验能为工作提供更多的便利.方法 用人的不同血型血浆与兔血浆进行血浆凝固酶比对试验,以及用不同抗凝剂的人血浆进行血浆凝固酶试验.结果 人不同血清型血浆与兔血浆在检测血浆凝固酶试验中对结果的影响无显著差异.不同的抗凝剂对本试验有影响.结论 在检测金葡菌血浆凝固酶试验中,可以用人ABO各型血浆来做血浆凝固酶试验,抗凝剂可选用肝素钠、EDTA- Na2、枸椽酸钠.
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MEBO抗感染作用实验研究(续)
目的:观察MEBO(含100% MEBO,以下简称MEBO)对烧伤感染常见细菌如变形杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌的作用.方法:将上述细菌接种在普通琼脂培养基上,并在接种的细菌表面涂一层MEBO,置37℃,20h~22h观察.结果:MEBO使上述细菌的形态结构发生变异.与在含25%MEBO和含50%MEBO的培养基上细菌形态变异现象相比较,无论在细菌形态变异出现的时间和形态变异的特点都有明显统计学差异.结论:MEBO具有较强的抗感染作用.
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金黄色葡萄球菌耐药性变迁
1临床资料本组共152例,其中1980年1月~1989年12月(80年代组)116例,1996年1月~1998年12月(90年代组)36例.两组均为我院收治住院的农村患者,经血培养或骨髓培养分离鉴定为金葡菌败血症,血浆凝固酶阳性.药敏试验采用K-B法.
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凝固酶阴性葡萄球菌的感染现状及耐药对策
凝固酶阴性的葡萄球菌(coagulase-negative staphylococci,CNS或CoNS)广泛存在于自然界,属人体正常菌群之一,随着医院现代化发展,大量介入性治疗、免疫制剂、激素、抗生素等广泛应用,使该菌引起的感染日益增多,且耐药性逐年增加,为控制感染带来一定麻烦,已成为临床治疗的难题之一.
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儿科学讲座(12) 肺炎(下)
几种不同病原体所致肺炎的特点1金黄色葡萄球菌肺炎1.1病原为金黄色葡萄球菌(简称金葡菌).1.2病理特点金葡菌致病力强,能产生多种毒素与酶,包括外毒素、杀白细胞素、血浆凝固酶等.以肺部广泛出血、坏死、多发小脓肿为其病理特点.炎症易扩散至其他部位,如心包、脑、肝、皮下组织等处,引起迁徙性化脓病变.
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金黄色葡萄球菌血浆凝固酶克隆、表达、纯化及其生物活性研究
[目的]克隆表达金黄色葡萄球菌血浆凝固酶,获取重组血浆凝固酶并分析其生物学活性,探讨其在口腔术后止血方面的应用前景.[方法]提取金黄色葡萄球菌基因组,以此为模板,利用PCR技术扩增出编码血浆凝固酶(coagulase,Coa)的基因,通过分子生物学方法构建表达带有his标签血浆凝固酶的pET21a(+)-hiS-coagulase重组质粒.经PCR分析、酶切分析和测序鉴定后,转化至大肠杆菌BL21内.经IPTG诱导表达目的蛋白,采用SDS-PAGE法分析重组蛋白的表达水平情况并经his柱纯化,获取血浆凝固酶重组蛋白,测定其对兔血浆及人血浆的凝固作用.[结果]PCR结果和酶切分析显示,得到了 2 100 bp左右的核酸片段,与his-coagulase片段大小一致,测序结果也与预先设计序列一致;重组质粒经诱导表达后获得相对分子质量为 78 × 103左右蛋白条带,纯化目的蛋白经测定具有促兔血浆及人血浆凝固活性.[结论]本研究成功构建了表达血浆凝固酶的重组质粒,获得了相应的工程菌株,以及具有促凝活性的重组血浆凝固酶,为口腔手术术后止血提供了新的方向.
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快速鉴定血培养中金黄色葡萄球菌的两种方法的比较
金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌是血培养中的常见病原菌,血浆凝固酶实验(TCT)是鉴别葡萄球菌的重要实验之一,荧光原位杂交法(FISH)目前也成了一种细菌鉴定的快速方法.本文采用临床分离的235株葡萄球菌,以传统的培养生化鉴定方法作为金标准,评价两种快速鉴定血培养中葡萄球菌的方法.
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表皮剥脱性毒素阳性球菌与致病性葡萄球菌指标的关系
表皮剥脱性毒素(原称皮肤坏死毒素)是化妆品中致病性球菌对皮肤的主要致病因素.近年来应用化妆品所致的皮肤色素沉着、皮炎及红疹时有发生,但表皮剥脱性毒素的检测尚无简便易行的方法.我们观察了可致皮肤发生烫伤综合征[1]病变的革兰阳性球菌与常用致病性葡萄球菌诊断指标血浆凝固酶、甘露醇、溶血毒素及卵磷脂酶的相互关系,通过对表皮剥脱性毒素的检测,为直接、准确地检测各种致病性球菌对皮肤的致病作用提供参考依据.
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用于血浆凝固酶试验的兔血浆制备和贮存方法
目的建立一种实用方便的兔血浆制作、贮存方法,用于葡萄球菌血浆凝固酶实验.方法 EDTA*K2抗凝兔血浆,生理盐水4倍稀释,比较2~8°C、-20°C及-85°C的贮存效果,并同时与病人血浆、法国生物梅里埃公司胶乳试剂作比较.结果 54株受试菌,该法与胶乳法符合率为100%,优于病人血浆.结论该方法实用方便,结果准确,值得推广.
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耐药葡萄球菌及其感染的治疗
葡萄球菌为革兰阳性球菌,多数为非致病菌,少数可导致疾病.除金黄色葡萄球菌(金葡菌)产生血浆凝固酶外,其它菌种凝固酶皆属阴性,称为凝固酶阴性葡萄球菌(CNS),其中较常见的致病菌为表皮葡萄球菌(表葡菌)、溶血葡萄球菌和腐生葡萄球菌(腐葡菌).
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157名小学生手掌面金黄色葡萄球菌调查
金黄色葡萄球菌(下简称金葡萄)是引起感染的主要致病菌之一,尤其是小孩,由于手污染引起的金葡萄感染更为普遍。为此,我们于1998年4~7月对本区所辖的某小学选择1年级和5年级学生进行调查并进行耐药性监测。现将结果报告如下。对象与方法1 调查对象选择该小学1年级和5年级各2个班,共157人进行调查。2 菌株分离方法[1]用浸有7.5%NaCl肉汤的无菌棉签擦拭受试者右手掌面,剪去污染部分,投入7.5%NaCl肉汤,36℃培养24小时,取培养液在Barid-Ponker平板上作分离,培养挑取可疑菌落进行鉴定。鉴定时根据菌落色素、形态、触酶、革兰氏染色镜检、甘露醇发酵、明胶液化、亚碲酸钾还原、溶血、血浆凝固酶等试验结果判定为金葡菌。
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动态比浊快速鉴定金黄色葡萄球菌方法建立及应用评价
目的:探讨动态比浊法快速鉴别金黄色葡萄球菌可行性。方法以VITEK-2-compact鉴定及nuc基因阳性作为参照,分析动态比浊法鉴别金黄色葡萄球菌的特异性、敏感性及可行性。结果动态比浊法鉴别金黄色葡萄球菌的特异性100%;敏感性100%,明显高于试管法;对临床分离的189株阳性球菌进行快速检测中,金黄色葡萄球菌鉴定符合率98.9%(87/88),101株非金黄色葡萄球菌仅1株鉴定为金黄色葡萄球菌,符合率为99.0%(100/101)。结论动态比浊法可快速鉴别金黄色葡萄球菌。
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对197株金黄色葡萄球菌的再鉴定
实验室对金黄色葡萄球菌的鉴定主要是血浆凝固酶试验.文献[1]报导不论葡萄球菌是不是黄色或溶血,只要血浆凝固酶为阳性,即可鉴定为金黄色葡萄球菌.我室在做玻片法及血浆凝固酶检测时发现,如果试验操作方法不当可引起大量的凝固酶试验假阳性.为此本室收集了197株被鉴定为金黄色葡萄球菌的菌株,同时用人血清、人血浆、兔血清、兔血浆做玻片法和试管法对照,对其方法及影响结果的因素进行了实验研究,其结果与原鉴定相差甚远,现将结果报告如下:
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静脉滴注洛美沙星后出现精神异常1例
患者女性,25岁.因发热、咳嗽6d于2004-08-31入院.既往无药物过敏史.诊断:1肺炎(右);2急性尿路感染.痰培养检出血浆凝固酶阳性葡萄球菌,对洛美沙星中度敏感;中段尿培养检出大肠杆菌,对洛美沙星高度敏感.2004-09-01~09-03给予盐酸洛美沙星注射液(安徽丰原药业股份有限公司无为药厂,国药准字H10970236)0.2g静脉滴注,30滴/min,1次/12h.2004-09-03-19:00,患者静脉滴注完洛美沙星约0.5h后突然出现情绪激动、哭闹不止、谵妄,十余分钟后转清醒、安静下来,对之前所发生之事毫不知情.5min后又开始哭闹、胡言乱语、烦躁不安、幻觉,症状持续约30min.予地西泮注射液10mg、氯丙嗪25mg肌肉注射后口中仍念念有词、前言不搭后语.约20min后安静入睡至次日清晨.患者醒后能间断回忆起昨夜情况.停用洛美沙星注射液后未再发作.
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兔血浆纤维蛋白原琼脂培养基技术与Baird-Parker琼脂培养基技术检测食品中金黄色葡萄球菌的比较
目的 比较兔血浆纤维蛋白原琼脂(RPF)培养基技术与Baird-Parker琼脂培养基技术检测食品中金黄色葡萄球菌的效果.方法 对119份样品中的血浆凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌的分离率分别用RPF和Baird-Parker进行检测,同时采用金黄色葡萄球菌的标准菌株和食品分离株,比较2种技术的检出限量和生长率.结果 RPF和Baird-Parker琼脂培养基对食品中金黄色葡萄球菌的定性检测结果符合率为100%;在含有干扰菌和食品基质的背景下,RPF培养基对金黄色葡萄球菌的检出限量为0.45 cfu/g;平均生长率为100.30%.与Baird-Parker琼脂培养基比较,结果差异无统计学意义(P>0.05).结论 在食品基质中,RPF培养基对金黄色葡萄球菌的检测灵敏度和生长率均能满足实验要求,与Baird-Parker琼脂培养基一致.RPF培养基技术可作为一种快速检测技术应用于食品中金黄色葡萄球菌的检测.
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抗凝血浆对葡萄球菌血浆凝固酶鉴定影响
为正确选择抗凝剂、制备血浆,做好凝固酶试验,本文对5种抗凝单一、混合血浆及不同时间的血浆凝固酶进行了实验,现将结果报告如下.
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基层医院血浆凝固酶阴性葡萄球菌感染现状和耐药性分析
目的 研究血浆凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)的感染现状和耐药情况,为临床医生合理使用抗生素,提供试验依据.方法 按照《全国临床检验操作规程》进行细菌分离培养,采用法国生物梅里埃公司生产的API-staph细菌鉴定系统进行菌种鉴定,药敏试验采用纸片扩散法(K-B法).结果 共检出CNS6种135株,以表皮葡萄球菌和木糖葡萄球菌为主要菌种,耐苯唑西林株检出率为73.3%(99/135).耐药率监测表明,耐苯唑西林葡萄球菌(MRCNS)株对15种抗生素耐药率远高于苯唑西林敏感葡萄球菌(MSCNS)株,各种CNS对万古霉素和替考拉宁均敏感.结论 病原学监测是检测和控制CNS感染的有效方法,应重视MRCNS的检测和报告,根据细菌的药敏结果合理选择抗菌药物.
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婴幼儿耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染状况和耐药基因的研究
目的 了解感染婴幼儿的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药性和耐药基因,明确检测青霉素结合蛋白2a(PBP2a)和甲氧西林耐药基因(mecA)的临床价值.方法 用金黄色葡萄球菌乳胶凝集试验和梅里埃鉴定金黄色葡萄球菌,同时用纸片扩散法完成12种常用抗生素的药敏试验.对头孢西丁的结果,按当年CLSI标准执行,用于判断菌株甲氧西林的耐药性.采用PBP2检测试剂盒检测PBP2a蛋白,PCR检测mecA基因.结果 2007-2009年婴幼儿共检出245株金黄色葡萄球菌,其中MRSA检出率为17.6%(43/245).MRSA对庆大霉素、复方新诺明、克林霉素、红霉素、氯霉素的耐药性均显著高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(P<0.05),其余抗生素的差异无统计学意义(P>0.05),43株MRSA的PBP2a蛋白和mecA基因的检测结果全为阳性,阳性率为100%.结论 用头孢西丁(30μg)能有效地筛查MRSA,检测PBP2a蛋白和mecA基因均能正确地确认MRSA.且检测PBP2a蛋白方便快捷,特异性好,值得临床推广.
关键词: 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 PBP2a蛋白 血浆凝固酶 耐药性 mecA -
不同抗凝剂、血浆影响葡萄球菌玻片法血浆凝固酶试验的评价
目的探讨玻片法血浆葡萄球菌凝固酶试验的佳血浆、抗凝剂和稀释度并解决假阳性问题,提高其检测的敏感性和特异性.方法 用EDTA、肝素钠及以草酸盐抗凝及稀释度不同的人、兔血浆对200株葡萄球菌试管法进行玻片法血浆凝固酶试验,以试管法为金标准作分析比较.结果 分别用EDTA抗凝的兔血浆、肝素钠抗凝的兔血浆及草酸盐抗凝的人血浆,在不同的稀释度时其诊断的敏感性和特异性各不相同,以EDTA抗凝的兔血浆为佳,但是EDTA抗凝的兔血浆原液和佳稀释度无明显差异.结论 血浆浓度及采用何种血浆、何种抗凝剂直接影响玻片法血浆凝固酶试验的诊断效率.三种抗凝血浆佳稀释度范围均为1:16~1:32.