尿液脱落细胞端粒酶活性测定在膀胱癌术后复发监测中的应用

目的 探讨尿液脱落细胞端粒酶活性测定在膀胱癌术后复发监测中的价值.方法 定期收集60例膀胱癌患者术后3年的尿液,采用PCR-ELISA法检测尿液中脱落细胞端粒酶活性,用以指导膀胱镜检查并确定诊断.结果 14例患者的尿液脱落细胞端粒酶活性呈阳性,其中10例确诊复发；而2例复发的患者端粒酶活性呈阴性,尿液脱落细胞端粒酶活性在膀胱癌术后患者中的敏感性和特异性分别为80.0％和87.5％.结论 尿液脱落细胞端粒酶活性测定是膀胱癌术后复发检查中的有效手段,可指导有针对性的膀胱镜检查.

尿液脱落细胞的检查

尿液中膀胱癌脱落细胞端粒酶活性检测的临床意义

为探讨尿液中膀胱癌脱落细胞端粒酶活性检测对膀胱癌诊断和术后随访的意义,以TRAP-银染法检测膀胱癌组织和自然排尿中膀胱癌脱落细胞端粒酶活性,以巴氏染色法对脱落细胞进行细胞学检查.45例膀胱癌患者中,44例肿瘤组织表达端粒酶活性(97.8%);29例尿脱落细胞表达端粒酶活性(64.4%),14例尿脱落细胞中发现癌细胞(31.1%),脱落细胞的端粒酶活性检测明显优于细胞学检查(P＜0.005),且随着肿瘤分化程度和临床病理分期的增加,阳性率明显升高(P＜0.05).而10例非膀胱癌患者的这三项检测,无1例阳性.结果显示:自然排尿端粒酶活性的检测,操作简便,敏感,特异,可望成为诊断和随访膀胱肿瘤的首选方法.

PCR-ELISA检测尿液中脱落细胞端粒酶活性及临床意义

为探讨尿液中脱落细胞端粒酶活性检测对膀胱癌的诊断与术后跟踪随访的意义,以PCR-ELISA方法检测膀胱癌组织和自然排尿中膀胱癌脱落细胞端粒酶活性,以巴氏染色法对脱落细胞进行细胞学检查.62例膀胱癌患者中,有59例肿瘤组织表达端粒酶活性(95.2%);47例尿脱落细胞表达端粒酶活性(75.8%),24例尿脱落细胞中发现癌细胞(38.7%),脱落细胞的端粒酶活性检测明显高于细胞学检查(P＜0.005),随着肿瘤分化程度和临床病理分期的增加,阳性率明显增高(P＜0.05).结果表明:自然排尿端粒酶活性的检测,操作简单、灵敏、特异性强,可望成为诊断膀胱癌的首选方法.

先天性马蹄内翻足诱导多能干细胞建立及鉴定

目的 以尿液脱落细胞为来源,构建先天性马蹄内翻足患者特异的诱导多能干细胞(iPSCs).方法 收集先天性马蹄内翻足患者尿液180 ml,通过离心,分离出尿液脱落细胞并进行培养,然后使用病毒系统对该细胞进行重编程,获得状态良好的细胞并进行鉴定,鉴定方法包括多能性基因检测、碱性磷酸酶(ALP)染色、核型鉴定、流式细胞仪(FACS)检测表面标志物、拟胚体(EB)悬浮球实验和甲基化检测等多种检测手段.结果 获得的细胞多能性基因表达与人胚胎干细胞H9相似,ALP染色呈强阳性,核型正常,多能性标记Tra-1-60阳性率为84.1％,能形成大量EB悬浮球,细胞在Nanog同源框(NANOG)和有机阳离子/肉毒碱运输蛋白4(Oct4)基因启动子区域的甲基化基本消失,证实获得的细胞具有多能性干细胞的所有特征,确定为iPSCs.结论 本实验成功构建了先天性马蹄内翻足患者特异iPSCs,为明晰先天性马蹄内翻足的演变特征提供了疾病模型.

尿液脱落细胞HER-2/neu基因扩增/17号染色体多倍体在尿路上皮癌诊治中的意义

我们采用荧光原位杂交法(FJSH)检测了尿液脱落细胞HER-2/neu基因扩增与17号染色体的数量变化,探讨了其在尿路上皮癌诊治中的意义.

人乳头瘤病毒感染参与膀胱疾病发生的研究进展

高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染为女性宫颈癌致病因素的理论已经被广泛接受[1],而其是否参与膀胱癌发生发展的观点也引发了热议.解剖结构上,与子宫颈一样,膀胱黏膜也由上皮细胞构成,经尿道与外界相通,各种感染时常发生,从而便有相当部分学者提出并寻求理论、实验研究支持高危HPV感染参与膀胱癌发生发展,检测膀胱组织或尿液脱落细胞中HPV的感染情况可以协助临床早期诊断、治疗膀胱癌,预测膀胱癌的发生危险性和转归结局的理论;同时,也另有部分学者通过科学的实验后对HPV感染参与膀胱疾病发生的论断持怀疑态度[2-3].

荧光原位杂交技术在肾移植术后尿路上皮肿瘤患者诊断中的研究

由于长期服用免疫抑制剂,肾移植术后患者并发肾癌的比例是正常人群的10倍,且肿瘤的发生率随移植肾存活的时间延长而增长[1].现今肿瘤的确诊的"金标准"还是病理活检技术,但针对肾移植术后患者而言,活检的风险也相应增加.需要1种无创且准确地检查技术,本科采用荧光原位杂交技术(FISH)对尿液脱落细胞进行检测.FISH技术检测膀胱肿瘤的发生,是根据探测荧光探针标记的染色体非整倍体变化推断肿瘤的发生.现将本科2011年4月采用FISH技术对1例肾移植术后并发肾盂尿路上皮肿瘤患者成功诊断的病例报道如下.

不同预处理方法对提取尿液脱落细胞mRNA质量的影响

目的 探索合适的处理尿标本的方法获得尿脱落细胞mRNA.方法 比较尿液容量、尿液标本冻存时间、处理方式对提取尿液脱落细胞RNA的产量与质量的影响,并进行qPCR的试验.结果40 ml尿液标本组及10 ml尿液标本组RNA总量均值分别为886.94±222.93 ng及211.22±62.01 ng,两组A2s0nm/A280nm比值分别为1.80±0.10和1.77±0.09;尿液标本量与RNA总量相关(f=3.604,P=0.002),不同尿液标本量RNA质量差异无统计学意义(t=0.708,P值＞0.05).实时离心提取及冰冻保存尿液7天后提取两种预处理方法RNA总量分别为886.94±945.84 ng及881.50±829.02 ng,A260nm/A280nm比值分别为1.80±0.10及1.80±0.87;RNA总量与A260nm/A280nm.比值差异无统计学意义(t=-0.221～0.085,P值均＞0.05).直接冰冻尿液标本与TRIzol保存沉渣细胞两种预处理方法RNA总量分别为637.81±525.24 ng及639.86±535.42 ng,A260nm/A280nm比值分别为1.84±0.13及1.83±0.96;RNA总量与A260nm/A280nm=比值差异无统计学意义(t=-0.47～0.293,P值均＞0.05).尿脱落细胞mRNA中可以检测到足细胞的标记蛋白WT-1,podocin和synaptopodin的基因表达.结论 尿液标本量是提取脱落细胞RNA量的关键因素,-80℃低温冻存尿标本7天或Trizol预处理冻存均对提取尿液沉渣细胞RNA数量和质量无影响.

激光显微捕获技术用于尿液脱落细胞DNA检测

目的 采用激光显微捕获技术(LCM)捕获尿液脱落细胞,并进行STR分型.方法 收集10份健康成人尿液样本,根据储存时间分组,其中新鲜尿液组(≤24h)分别采用Chelex-100及LCM联合DNA IQTM提取法提取DNA,储存尿液组(＞24h)再分为4℃组和室温组,分别在4～30d内不同时间点采用LCM联合DNA IQTM提取法提取DNA;各组提取的模板DNA进行扩增及SRT分型检验.结果 新鲜尿液组采用LCM联合DNA IQTM提取法提取DNA,所有样本均可检出全部基因座(16个),采用Chelex-100法则在部分基因座上出现等位基因丢失、非特异性扩增、峰值低等现象；4℃储存10d和室温储存4d以内的尿液经检验可明确判读12个以上基因座,4℃20～30d及室温7d,可检出7个以上基因座.结论 LCM技术可用于尿液检材的DNA分型检验,且检材应尽可能4℃保存并尽快检验.