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用随意扩增多态性DNA PCR方法检查实验小鼠的嗜肺性巴氏杆菌
嗜肺性巴氏杆菌是动物致病菌,人感染多通过猫、狗咬伤或抓伤而致.嗜肺性巴氏杆菌是实验啮齿动物(特别是小、大鼠和豚鼠)巴氏杆菌病的主要病原菌.为了鉴定从实验小鼠分离的15株嗜肺性巴氏杆菌的基因型,本文用3个随机引物(每个引物不得由0个碱基组成),用RAPD-PCR方法对分离的15株嗜肺性巴氏杆菌进行扩增试验,以鉴定这15株嗜肺性巴氏杆菌的基因分型.本试验所用的15份测试菌株标本采自小白鼠,编号1~15号.24?h培养物离心沉淀,收集嗜肺性巴氏杆菌,细菌用PBS洗2次,再用单蒸水洗1次,沉淀物加0.7ml无菌水悬起,样品于100℃温度下加热煮沸5?min,迅速放冰水中冷却,直接用于PCR扩增,毋须提取DNA.3个随机引物的名称及碱基序列如下:OPL-7 5′AGG CGG GAA C-3′;ORL-11 5′ ACG ATG AGC C-3′;OPL-12 5′GGG CGG TAC C-3′,每次反应只用1个引物(图1).
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硫磺软膏微生物限度检查方法学验证
目的 建立硫磺软膏的微生物限度检验方法,以保证临床用药的安全有效.方法 分别采用离心沉淀加培养基稀释法、培养基稀释法、常规法,根据5株阳性对照菌的试验组、菌液组、供试品对照组的结果,对样品进行微生物限度检查的方法学验证试验研究.结果 硫磺软膏具有抑菌活性,常规法、培养基稀释法回收率<70.0%,离心沉淀加培养基稀释法回收率>84.8%,能有效去除其抑菌活性.结论 采用该法进行微生物限度检查,可以客观地反映药物中微生物的污染状况,以达到检测目的.
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硫软皂的微生物限度检查
硫软皂是我院皮肤科常用的制剂,具有杀疥虫及真菌的作用.其配方为升华硫100g,软皂900g.我们按照<中国药典>2000年版微生物限度的常规检查法[1]检查发现供试品的金黄色葡萄球菌阳性对照为阴性.说明本品对金黄色葡萄球菌的检查有干扰作用.实验证明硫软皂中的干扰作用是软皂所致.因此采用离心沉淀加薄膜过滤法可以排除软皂的干扰.使硫软皂的微生物限度检查得到满意的结果.
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孕中期不同孕周孕妇羊水的生化值变化
随着产前筛查和产前诊断技术在全国的普及,越来越多的孕妇在孕中期接受羊水穿刺,其中羊水的离心沉淀用于羊水染色体的培养,但上清往往被丢弃掉了,这很可惜,因为羊水的生化变化直接反映胎儿的一些疾病.本研究旨在建立孕中期不周孕周的孕妇羊水生化的参考值,观察在不同孕周时羊水各生化值的变化趋势.
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胸腹腔积液离心石蜡包埋技术在细胞病理学诊断中的应用
胸腹腔积液的主要诊断方法为直接离心后用沉渣物涂片并行HE染色来进行细胞病理学诊断,此方法早已广泛应用于临床,具有简单、经济、快捷等优势[1],其诊断恶性胸腹腔积液的敏感性为50%~78%,但部分病例由于肿瘤细胞与间皮源性细胞形态相似、鉴别困难以及涂片存在厚薄不均、细胞重叠等原因,所以仅靠细胞学涂片易造成诊断困难,有时需多次送检才能得出结论[2]。近年来,随着细胞石蜡包埋法及免疫组化技术的不断完善,胸腹腔脱落细胞的免疫组化染色也逐渐运用于临床病理诊断。本研究对36例脱落细胞学检查怀疑恶性的胸腹腔积液离心沉淀后石蜡包埋切片,并进行了免疫组化染色,取得了满意的诊断效果。现报道如下。
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离心沉淀-离心超滤法测定盐酸青藤碱脂质体的包封率
目的 建立盐酸青藤碱(sinomenine hydrochloride,SM-HCl)脂质体包封率的测定方法,并阐明药物在脂质体中韵滞留特性.方法 采用薄膜分散法制备SM-HCl脂质体.以HPLC法测定脂质体药物的量,色谱柱为Kromasil ODS C<,18>柱(250mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-水-乙二胺(55:45:0.225),体积流量1.0 mL/min,检测波长265 nm.以离心沉淀-离心超滤法测定SM-HCl脂质体的包封率,并与以枸橼酸缓冲液(pH 7.0)水化的脂质体样品稀释前后的包封率进行对比.结果 辅料与溶剂对青藤碱的定量测定无干扰,青藤碱在9.82~78.56 μg/mL线性关系良好(r=0.999 7),平均回收率在99.29%~100.8%,日内与日间精密度良好(RSD≤2.1%).50 μL药液可使超滤膜对药物的吸附达到饱和.以枸橼酸缓冲液(pH 7.0)水化的脂质体样品的包封率为33.16%,稀释1倍后该样品的包封率降至14.75%.结论 HPLC法与离心沉淀-离心超滤法结合可用于测定SM-HCl脂质体的包封率,该方法快速、准确;离心超滤中应弃去50μL初滤液以确保滤液与脂质体外水相药物浓度一致;青藤碱与脂质双分子层有一定的亲和力,但在脂质体中的滞留性较差.
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结核性和恶性胸水多指标检测的意义
结核性和恶性胸水鉴别常较困难,治疗和预后也截然不同。我们于1996年4月-1999年10月对64例结核性和恶性胸水患者进行胸水pH值、腺苷脱氨酶(ADA)、癌胚抗原(CEA)及脱落细胞检测,分析如下。1 材料与方法1.1 病例选择 34例结核性胸水患者,男26例,女8例,年龄(54±36)岁,经痰涂片、胸部X线片检查及临床抗结核治疗有效并随访2~3个月胸水明显吸收而确诊。30例恶性胸水患者,男23例,女7例,年龄(71±59)岁,其中鳞癌20例,腺癌8例,胸膜间皮瘤2例,均经纤维支气管镜、胸膜活检、胸部CT检查证实。1.2 检测方法每位患者治疗前均抽胸水进行pH值、ADA、CEA,脱落细胞检测。pH值测定采用pH试纸,ADA活性测定采用比色法,CEA测定采用放免法,胸水离心沉淀作Giemsa染色进行脱落细胞检查。
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血尿的鉴别诊断
血尿(hematuria)是泌尿系统疾病的常见症状之一,包括肉眼血尿和镜下血尿.前者肉眼可见尿为血色;后者是指10 ml中段新鲜尿,1500 r/min离心沉淀5 min,取沉渣镜检,红细胞计数(RBC)≥3个/HP,或者Addis计数RBC>50万/12 h,或者尿红细胞排泄率>10万/h.
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胆固醇结晶尿液一例鉴别与临床意义
患者:女性,60岁.体格检查:心肺无异常,肝脾肋下未及.家族史:无遗传性疾病记载.既往史:否认肝炎、结核病史,否认食物、药物过敏史,患有高血压、高血脂病,现口服心痛定(硝苯地平片)药物治疗.实验室检查:血常规正常,尿常规:蛋白(-),红细胞0~1,尿液外观呈浑浊状.患者自服药后常发现尿液浑浊,表层油渍,特来我院检查.经过肉眼观察、离心沉淀、乙醚萃取、显微镜观察等方法检查,结果发现尿液外观浑浊,表层为油性薄片状物,离心后结晶,离心后脓结晶,离心后细菌,乙醚萃取乳糜均为阴性,显微镜观察表层物体为胆固醇结晶(+),尿液表层油性薄片状物,经以上检验鉴定为胆固醇结晶.
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离心沉淀稀释常规法验证心脑静片微生物限度
心脑静片剂适应于治疗清心清脑,镇惊安神,降低血压,疏通经络,防治中风,用于头晕目眩,烦躁不宁,风痰壅盛,言语不清,手足不遂.其主要成分:莲子心15g,珍珠母65 g,槐米90 g,黄柏90 g,木香10 g,黄芩400 g,夏枯草300 g,钩藤300 g,龙胆100 g,淡竹叶50 g,铁丝威灵仙250g,天南星(制)80 g,甘草20 g,牛黄10 g,朱砂10 g,冰片27g.为确保药品质量,除对其进行含量测定,还应对其进行微生物限度检查.本文采用离心沉淀稀释法常规法应用《中国药典》(2005年版)有关微生物限度检查法对心脑静片进行验证,试验结果良好,方法可行可靠,报告如下.
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细胞聚集石蜡块制备及在临床中的应用价值
细胞石蜡包埋技术应用已久,在国外该技术已成为细胞学诊断的常规技术,在国内已有医院在开展。但将其全面应用于常规工作的仍然较少,即使开展了,对于量较多的体液标本也并没有收集所有的体液细胞,只是吸取部分沉淀离心,漏诊的概率难免会较大,为此我科结合我院应用细胞学标本开展的工作,将所有送检体液标本静置后离心沉淀制成细胞组织石蜡块,供各种检查备用,通过反复实验证实此法阳性检出率比较高,更好地为临床提供肿瘤的来源,分型,预后以及与治疗相关的信息,现介绍如下。
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乳汁HBV-DNA定量时标本处理的优选及临床应用
目的:选择灵敏度高、重复性较好的乳汁HBV-DNA定量标本提取方法应用于乙肝携带产妇的乳汁检测.方法:选择14例乙肝"大三阳"产妇乳汁,每份分为乳汁原标本,乳汁离心后中层,乳汁离心后下层沉淀混合液3组,分别提取HBV-DNA并检测含量,用秩和检验分析结果的差异;用乳汁离心后中层对316例乙肝产妇检测HBV-DNA含量.结果:乳汁离心后中层清液灵敏度高于乳汁原样本,乳汁离心后中层清液重复性高于下层沉淀混合液.在316例乙肝产妇中,血清HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+组,其乳汁HBV-DNA阳性率为77.60%;血清HBsAg+,HBeAb+,HBcAb+组其乳汁HBV-DNA阳性率为0.73%.血清HBsAg+,HBeAg+组乳汁HBV-DNA阳性率为80.00%,血清HBsAg+和HBcAb+组乳汁HBV-DNA阳性率为5.17%,其余组别乳汁HBV-DNA阳性率皆为0.结论:乙肝携带者产妇的乳汁可用于评估母乳喂养安全性.在乙肝产妇乳汁中,以其血清HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+者和血清HBsAg+、HBeAg+者母乳喂养小儿被传染乙肝病毒的风险较大.
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脑脊液常规镜检发现新型隐球菌1例报告
目前鉴定新型隐球菌主要是根据墨汁染色法找到有宽阔、透明荚膜的菌体。新型隐球菌性脑膜炎在临床上比较少见,易被忽视。我们于1980年~1999年的二十年中,在临床医生并未要求检查该菌的情况下,通过脑脊液常规镜检,共发现3例新型隐球菌,现有1例资料齐全,介绍如下:1 病历摘要 李锡东,男,68岁,因高热40℃原因不明于1999年6月从外院转入我院。抽取脑脊液检查:外观微红,潘氏蛋白定性阳性,蛋白定量0.5g/L,氯化物108mmol/L,葡萄糖1.4mmol/L。白细胞90×106/L,其中单核细胞50%,分叶核细胞50%。离心后有少量红细胞沉淀。常规镜检时,发现有许多大小不等的不明物,形态为圆形或椭圆形,直径与红细胞接近,无色,具有折光性。直接取脑脊液1滴,加墨汁1滴,加上盖片镜检,5min后,见到不明物显现宽阔透亮的厚膜,并可见到单芽生孢子,即确定为新型隐球菌。2 讨论 新型隐球菌经墨汁染色后,极易辨认,但是在未染色的常规镜检中,无经验者不易辨认,特别是在临床未要求细菌学检查的情况下,更易忽略。因此如发现有圆形、大小不等,体积与淋巴细胞、红细胞相近,数量较多具有一定折光性,细胞内既不均匀又无一定形态的核的病原体,应考虑到新型隐球菌,行墨汁染色。 按要求墨汁染色应用印度墨汁或国产优质墨汁,我们应用的是市售普通墨汁,其中的2例用“一得阁”墨汁,因菌体较多,未经离心沉淀,直接涂片染色镜检,脑脊液与墨汁比例为1∶1,但需5min后进行观察,染色效果明显,否则可出现假阴性。
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胆红素对尿八联分析仪检测尿胆原结果的影响
许多疾病可导致胆红素和尿胆原结果的异常,如肝炎、肝硬化、肝癌等.但胆红素、尿胆原易分解且对尿胆原检测有一定的干扰.我们比较了手工方法与尿液分析仪对各种肝胆等疾病尿胆素(BIL)和尿胆原(URO)检测结果,探讨尿液中胆红素对尿胆原测定的影响.1 材料与方法(1) 仪器试带条桂林市医疗电子仪器厂优利特200及其优利特8A尿试纸条.(2) 手工测定法试剂胆红素采用改良哈氏浓缩试剂,尿胆原采用欧氐试剂.(3) 标本采集采用本院病人标本,其中原发性肝癌110例,阻塞性黄疸48例,肝占位28例,胆管癌25例,胆结石19例,胆囊炎19例,其他33例.(4) 手工法①尿胆红素检测:取尿液约5ml,置于15×100mm试管中,约加其体积一半的100g/L,氯化钡溶液并混匀,以RCF1600g离心3~5min,轻轻将上清液弃去,于管内沉淀上加氧化剂2-3滴,放置片刻,观察结果.②尿胆原检测:如尿内含胆红素,应先取尿液5份,加100g/L氯化钦1份,混匀离心沉淀除去胆红素,取上清液1ml,放入10×75mm试管内,加入欧氏试剂0.1ml混匀,静置10min,在白色背影下观察结果.(5) 仪器法按照尿八联分析仪检测要求检测.
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细胞块石蜡切片在脱落细胞学中的应用
浆膜腔积液脱落细胞学检查常规制片方法是离心沉淀后涂片及HE染色.该方法简单易行,但可能造成阳性率低或误诊.作者尝试采用细胞块石蜡包埋切片与涂片观察相结合的方法,同时对部分病例加做免疫组化检查,取得了较为满意的结果.报告如下.
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1例淋巴瘤误诊为结核性胸腔积液并文献复习
结核性胸腔积液是临床常见的一类胸腔积液,而它的确诊还是相对困难的.结核性胸膜炎的确诊需要胸腔积液或胸膜活检标本中找到结核杆菌,或胸膜活检有典型结核性肉芽肿改变;然而根据病史和临床表现,以及胸腔积液ADA增高,临床上也可诊断结核性胸腔积液[1].超过一半的结核性胸腔积液患者,胸腔积液是唯一的临床表现.由于结核性胸腔积液胸膜结核分枝杆菌负荷低,胸腔积液离心沉淀后的结核菌涂片阳性率在5%以下[2],结核性胸腔积液胸水培养结果阳性率<20%[3],而且这往往需要等待几个星期.胸膜活检病理检查作为诊断结核性胸腔积液的一种重要手段,但并非只有结核性胸腔积液的胸膜病理呈肉芽肿病变,还有如真菌性疾病、结节病、土拉菌病和类风湿胸膜炎也可有肉芽肿病变[1],有时还得抗酸染色或活检标本的培养.
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ZnSO4浮聚抗酸菌的实验观察
可疑结核病人标本涂片检查抗酸杆菌,仍是确诊结核病为快速、简便和可靠的检查手段,其缺点检出率较低.本文取可疑结核病人痰、胸水和支气管肺泡灌洗液(BAL)三样标本进行直接涂片、离心沉淀和ZnSO4浮聚法实验比较,结果如下:
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结核分枝杆菌两种培养方法的对照
目前,传统的抗酸染色和细菌培养仍是临床确诊结核病的重要依据.提高结核分枝杆菌培养的阳性率,进行菌型鉴定和药物敏感试验,对正确指导化疗方案具有重要意义.实验说明,在对培养标本作前处理后,采用离心沉淀接种培养基,可提高培养阳性率.
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含抑菌剂药品致病菌的检验方法探讨
对氯霉素眼药水检测致病菌--金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌,若采用一般微生物限度检验方法,因其含有的防腐剂和抗生素(氯霉素)具有抑菌作用,在细菌检测时易产生假阴性的结果,为克服此缺陷,作者对薄膜过滤法和离心沉淀集菌法两种检验方法作了比较,发现前者比后者检出率要高.报道如下.
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三金片联合氧氟沙星治疗单纯急性下尿路感染疗效分析
尿路感染以尿频、尿急、尿痛为主要症状,多发于成年女性,且容易反复发作.尽早控制感染、防止复发很重要[1].前瞻性分析应用三金片加氧氟沙星治疗40例尿路感染报告如下.1 资料与方法1.1 诊断标准参照《2009中国泌尿外科疾病诊断治疗指南》.(1)清洁中段尿细菌定量培养,革兰阳性球菌菌数≥104/ml或革兰阴性杆菌菌数≥105/ml.(2)清洁中段尿离心沉淀中在每30个视野中有半数视野见到细菌.