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病毒基因分型方法的研究进展及应用
同一种病毒不同分离株(变异株)之间核苷酸序列及抗原性之间的差异造成了各分离株间血清学反应性、致病性、毒力、对治疗的应答、流行区域及分布等的不同.因此,进一步研究病毒分型对流行病学调查、病毒毒力强弱的研究、不同亚型病毒特异疫苗的研制、病毒感染的自然历程及其持续感染在发病过程中的作用、病毒的演变过程、病毒与宿主的相互作用及临床治疗效果等有着十分重要的意义.
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重组人p53腺病毒基因局部注射联合肝动脉化疗栓塞治疗原发性肝癌
目的:评估重组人p53腺病毒基因治疗(rAd-p53)联合经皮肝动脉栓塞化疗术(TACE)治疗中、晚期肝细胞肝癌的临床疗效.方法:TACE、经皮肝瘤体内注入重组人p53腺病毒注射液(rAd-p53)2种方法治疗中晚期肝细胞肝癌共150例,其中采用经皮肝瘤体内注入rAd-p53后联合TACE治疗中晚期肝细胞肝癌68例(治疗组),并与同期病情相当的中晚期肝细胞肝癌单独的TACE治疗82例(对照组)相比较.结果:治疗组、对照组有效率分别为67.6%和51.2%.治疗组瘤体明显缩小,两组间有显著性差异(P=0.042<0.05);对照组白细胞下降例数多,程度重;治疗组白细胞下降例数少,程度轻(P=0.003<0.05);治疗组比对照组的癌性疼痛减轻程度明显,差异显著(P=0.017<0.05);治疗组与对照组治疗后Karnofsky有显著性差异(P=0.029<0.05).结论:重组人p53腺病毒注射液(rAd-p53)联合TACE治疗HCC,增强了抗癌效果,改善了患者的生存质量.
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RNA干扰的抗病毒效应
双链RNA介导的RNA干扰(RNAinterference,RNAi)能序列特异性的诱发转录后基因沉默,被认为是机体阻止外来病毒感染、保护细胞免受病毒入侵的一种细胞自我保护机制.近年来研究表明,以病毒基因和宿主细胞受体分子为靶点,引入外源的小分子干扰RNA(siRNA)能显著性抑制病毒的复制与感染.RNAi作为一种抗病毒的有力武器,将给病毒性疾病的基因治疗带来新的希望.
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肝炎病毒基因工程抗体的研究
0 引言乙型病毒性肝炎、丙型病毒性肝炎分别是由乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的世界性传染病[1-10].HBV、HCV感染不仅引起急性、慢性病毒性肝炎,而且与肝硬化和肝细胞癌的发生和发展密切相关[11-20].流行病学调查表明,HBV感染的阳性率为10%,抗-HCV的阳性率为3.2%,对我国人民健康危害极大.因此,急需研究有效的针对乙型、丙型病毒性肝炎的防治措施.其中肝炎病毒人源化基因工程抗体及其应用是目前的主要研究方向之一.
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丙型肝炎的实验室诊断和临床意义
0引言丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染的实验室诊断是丙型肝炎诊断的重要依据,主要包括特异性抗体(抗-HCV)的检查、HCV基因和HCV核心抗原的检测以及肝细胞损害的检查.抗-HCV阳性是感染的标记,感染的间接证据;而病毒基因和抗原检测阳性是病毒存在的直接证据.
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乙肝病毒核心抗原单链抗体细胞内免疫抗乙肝病毒基因治疗研究
目的:研究乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)人源单链抗体(ScFv)细胞内免疫抗乙型肝炎病毒(HBV)基因治疗的作用.方法:用噬菌体表面展示技术筛选特异性的HBcAg人源可变区单链抗体,聚合酶链反应(PCR)法和基因重组技术体外扩增HBcAg单链抗体基因,并构建表达HBcAgScFv基因的重组逆转录病毒载体pLXSN-HBcAg,转染PA317细胞,逆转录PCR(RT-PCR)方法验证细胞培养液上清分泌的假病毒颗粒中HBcAg ScFv的表达;将假病毒颗粒感染2.2.15细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)检测其上清HBsAg和HBeAg,定量检测HBV DNA.结果:成功筛选出HBcAg ScFv,PCR扩增出750bp的全基因,构建HBcAg ScFv基因的逆转录病毒载体,转染PA317细胞,在上清中检测出含HBcAg ScFv假病毒颗粒的存在,上清感染2.2.15细胞后第3、5、7、14天,HBsAg、HBeAg逐渐下降,到14d时HBsAg已变为阴性,DNA定量检测无明显变化.结论:HBcAg ScFv能成功地在逆转录病毒载体中表达,并有抑制HBsAg、HBeAg表达的作用.
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乙、丙型肝炎病毒基因联合诊断芯片的研制及应用
目的:制备一款肝炎病毒检测芯片,能同时实现对乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、HBV YMDD变异株及HCV基因型的检测,并与其他检测方法进行比较,以探讨基因芯片技术临床应用的可行性.方法:根据HBV、HCV的序列设计出探针,采用点样法制备芯片.收集HBV DNA阳性和HCV RNA阳性血清各20份,YMDD变异株阳性血清20份,HBV DNA阴性和HCVRNA阴性血清各10份,用基因诊断芯片检测,并与荧光定量法、错配PCR及测序法比较.结果:HBV DNA阳性标本和HCV RNA阳性标本用芯片检测均为阳性;芯片法检测HBV YMDD变异株和错配PCR法的符合率为75%,和测序法的符合率为95%;芯片法检测HCV基因型和测序法的符合率为75%.结论:基因诊断芯片的敏感性和特异性较高,且能检测出不同病毒株的共生状态,但在检测HCV基因型方面存在一定的假阴性和假阳性.
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供者淋巴细胞输注联合替比夫定治疗慢性乙型肝炎一例
尽管目前临床上已有多种能够有效抑制HBV 的药物可供选择,慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB )的治疗仍面临许多挑战,如长期使用可能出现病毒基因发生耐药突突变等[1] .对HBeAg 阳性CHB 患者而言,HBeAg 血清清学转换被认为是满意的治疗终点,也是病情得到到控制的重要指征[2] .但是经过1年核苷(酸)类药物物治疗的平均HBeAg 血清学转换率仅为20% [3-7] .笔笔者尝试采用供者淋巴细胞输注(donor lymphocytte infusion,DLI )联合替比夫定(telbivudine, LdTT)治疗1例CHB 患者,现报告如下.
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血清新型冠状病毒特异性抗体水平的检测及其动态变化规律
重症急性呼吸综合征(SARS)的病原体相继被不同实验室发现并确证为一种新型冠状病毒,又称为SARS病毒[1],已确定了病毒基因的一级结构和一些基因组特征,为利用分子免疫学手段研究和建立SARS的血清学诊断方法奠定了基础[2].我国军事医学科学院等单位已成功建立了检测SARS病毒抗体的ELISA方法,并开发出相应的检测试剂盒.本研究采用ELISA方法检测SARS患者和医务人员血清SARS病毒特异IgG抗体,观察SARS病毒抗体在患者和高危易感人群的产生规律和水平,为SARS的诊断及其流行传播特点的分析提供实验依据.
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EB病毒相关血液系统疾病免疫治疗的研究进展
EB病毒(EBV)属于疱疹病毒γ亚科,在细胞外成熟的病毒颗粒呈球形.EBV基因是线性双链DNA,平均172 kb,其中含有一系列0.5 kb的末端重复序列,多个内部重复序列将病毒基因分成长短不等的独特序列区.全球90%的人口潜伏感染过EBV.EBV初次感染常发生在口咽部,可以是无症状的,也可表现为单核细胞增多症.EBV具有高度的免疫原性.在初次感染时,正常人体内可激发强大的体液免疫及包括CD+4细胞和CD+8细胞在内的细胞免疫,EBV血清阳性的免疫功能正常的人群可以控制初次感染和周期性感染的再次激活.在清除初次感染后,EBV在感染的B细胞内作为游离体形式存在,表达很有限的一部分EBV抗原而形成潜伏感染,这些抗原包括EBV核心抗原(EBNA)1、2、3A、3B、3C和LP,潜伏模蛋白(LMP)1、2.
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转录激活因子ELK-1在持续性心房颤动患者心房肌中表达下调
心房颤动(房颤)是临床上常见的心律紊乱之一,其发病机制尚不甚清楚.目前证实,心房肌的电生理重构和结构重构是房颤发生、发展的基础.近发现,心房肌在房颤状态下的重构是适应性的逆向分化.转录激活因子ETS样蛋白1(ETS-like1,ELK-1)作为ETS家族(命名缘于禽类白血病病毒基因E26)成员之一,在细胞分化调节中起着重要作用[1].因此推测,转录激活因子ELK-1参与调控房颤心房肌的分子和结构重构.本实验采用Westernblot和免疫组化技术,观察了转录激活因子ELK-1在房颤心房肌的表达改变,以验证假设是否成立.
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甲型H1N1流感诊疗方案(2009年第三版)
2009年3月,墨西哥暴发"人感染猪流感"疫情,并迅速在全球范围内蔓延.WHO初始将此型流感称为"人感染猪流感",后将其更名为"甲型H1N1流感".6月11日,WHO宣布将甲型H1N1流感大流行警告级别提升为6级,全球进入流感大流行阶段.此次流感为一种新型呼吸道传染病,其病原为新甲型H1N1流感病毒株,病毒基因中包含有猪流感、禽流感和人流感三种流感病毒的基因片段.本诊疗方案是在7月10日第二版诊疗方案基础上,依据近期国内外研究成果及我国甲型H1N1流感诊疗经验修订而成.由于这种甲型H1N1流感是一种新发疾病,其疾病规律仍待进一步观察和研究.
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包皮中人乳头瘤病毒基因的检测
人乳头瘤病毒(HPVs)作为一种新的致病因子,近年来倍受关注.HPV能在人体皮肤、粘膜中寄生,诱发增生性、乳头状瘤样损害.某些型别的HPV在皮肤、粘膜癌前病变和癌变中起重要作用,例如HPV16、18型感染与宫颈癌及阴茎癌发生发展关系密切.我们采用聚合酶链反应(PCR)技术检测48例包皮环切患者包皮中HPV DNA并分型,探讨包皮感染与HPV型别、HPV感染及与阴茎癌的关系.报告如下.
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人感染禽流感临床特点
禽流感(avian influenza,AV)是由甲型(A型)流感病毒某些亚型引起的一种禽类疾病综合征,病毒基因易发生变异,有可能感染人,其中以H5N1亚型引起的临床症状重,对人危害大,病情进展快,可引起呼吸系统和全身多脏器功能衰竭,病死率高.
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甲型H1N1流感大流行的机遇与挑战
自2009年4月北美首次发现甲型H1N1流感病毒以来,该新型猪源病毒已播散至全球,引起21世纪首次流感大流行,对人类健康产生巨大威胁[1-2].与季节性流感不同,本次甲型H1N1流感大流行是由一种整合了古典猪流感、欧亚猪流感、禽流感和人季节性H3N2流感病毒基因的新型四源重组毒株引起.免疫系统包括先天性免疫和获得性免疫系统,在构建了人体对流感病毒的防御体系的同时,也参与了流感病毒的致病机制.
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Grazoprevir联合Elbasvir用于伴4~5期慢性肾病的丙型肝炎病毒基因1型感染患者安全有效
《柳叶刀》杂志于2015年10月17日第386卷第10003期发布了一项关于Grazoprevir联合Elbasvir用于伴4~5期慢性肾病的丙型肝炎病毒( HCV )基因1型感染患者的Ⅲ期临床试验内容。
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建立反向PCR检测HIV-1整合位点的方法
高效抗反转录病毒治疗(highly active anti-retmviral therapy,HAART)可降低艾滋病的发病率和死亡率,使感染者血浆中HIV-1 RNA降至常规方法检测不到的水平[1-2],但用敏感度高的方法仍可检测到病毒基因和低水平的病毒复制,这是因为存在HIV-1潜伏库,含有整合HIV DNA的静止性CD4+T细胞是主要的HIV-1潜伏库[3-5].
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病毒性肝炎与非酒精性脂肪性肝病
病毒性肝炎与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)关系密切,尽管甲、戊型肝炎与NAFLD可同时存在,但因为甲、戊型肝炎是急性肝炎,很快可以治愈,故对NAFLD影响较小.乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、丁型肝炎病毒(HDV)感染可导致肝细胞脂肪变(肝脂肪变),其中以丙型肝炎病毒基因3a型感染为明显,肝脂肪变是丙型肝炎病毒感染的特征之一,然而病毒性肝炎伴随的肥胖和胰岛素抵抗(IR)与脂肪肝的关系可能比病毒本身更为重要.
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肝癌自杀基因治疗新进展
自杀基因治疗是指利用基因工程技术将某些细菌或病毒基因<目的基因)与载体相结合,并导入肿瘤细胞中,在一定条件下目的基因持续高效表达,从而杀伤肿瘤细胞,所以又称为"病毒导向酶解药物前体疗法.这些病毒或细菌的基因表达产物(酶)能导致受体细胞的死亡,因此将这些基因称为自杀基因.本文就肝癌自杀基因治疗的新进展作一综述.
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甲型H1N1流行性感冒重症与危重症患者临床特征分析
甲型H1N1流感病毒是一种新的流感病毒,病毒基因中包含有猪流感、禽流感和人流感3种流感病毒的基因片段.其主要损害部位是肺.2009年3月首先在墨西哥暴发流行,随后蔓延全球.目前已有207个国家报道有甲型H1N1流感病毒感染患者,已导致8000多人死亡.