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多媒体技术在组织学实验考核中的应用
组织学是一门医学形态学科,实验教学是其中一个重要环节,而实验考核是评价学生观察组织学切片和电镜照片效果好坏的标准之一.传统的实验考核存在一些弊端.随着计算机多媒体教学的普及,将这一高科技引入组织学实验考核中也已成为必然.我室利用抓图软件和Powerpoint97制作了组织学切片和电镜照片的考核软件,经在教学中使用,具有许多优势,值得推广,同时为今后计算机远程教学打下了基础.一、组织学实验考核软件的制作首先选择好所要考核的组织切片中的细胞、结构、组织、器官以及电镜照片,利用与计算机相连带摄像头的显微镜或实物展示台将光镜结构和电镜照片展示出来.在计算机上利用抓图软件对选择的图象进行抓拍,注意调整图片精度、图形亮度、对比度及颜色,以达到佳, 启动Powerpoint97,将已抓拍的图形复制并粘贴到幻灯片中,调整好图形的大小.利用工具栏中所提供的简单工具对图片进行标注.然后设制幻灯片播放时间,配上编号、提问的话外音,一套完整的考核软件制作完成.二、组织学实验考核软件的使用及效果传统的实验考核办法具有浪费人力物力、标识不明确、考题易泄露等缺点.我室在2000 级专科生中使用了该套组织学考核软件进行实验考核,教师在使用过程中发现其具有许多优势:1.不需教师摆放显微镜和寻找镜下结构,节省了大量人力、物力.2.不使用显微镜,不存在移动切片的可能,学生通过观看电视屏幕,能得到清晰、明了的细胞、组织、结构、器官画面.3.计算机上可同时准备不同难度或同一难度的多套考题,不同专业、不同层次的学生可以随堂考试,避免了考题泄露的可能,提高了教学效率,保证了考试的准确性、公平性,该方法值得推广.当前优化教学媒体是促进教学改革、提高教学质量和教学效率的有效途径.我们不断通过创造性的劳动,以为精练的语言和生动的表现形式,把新的信息传递给学生.我室已进行多媒体的实验、理论教学和实验考核,并着眼于计算机多媒体网络教学和远程教学,不断改进教学手段,提高教学质量.
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二次包埋法手工制作病理学教学组织芯片
组织芯片又称组织微阵列(tissue micmarray,TMA)是将数十个、数百个乃至上千个组织样本整齐地排列在某一载体上(通常是载玻片)而成的微缩组织切片[1].
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RNA原位杂交技术难点及针对措施
利用互补RNA为探针进行原位杂交是分析组织或细胞内RNA分布行之有效的方法,通过对RNA分布的研究可以了解特定基因的表达情况.用寡核苷酸探针检测组织切片中相关的mRNA是较为常见的RNA原位杂交.该探针方法简便、探针较短,组织穿透性好,有较高的灵敏度.但是过程较长,操作繁琐,因而在一些实验中不能得到很好的使用,为此本文根据笔者的实际操作经验对该技术中的一些难点及相应措施作简要的介绍.
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用免疫组化ABC法的漂片法做好脑片实验的体会
ABC法是将亲和素作为桥,把生物素化的抗体与生物素结合的酶连接起来.首先,以Ⅰ抗与组织切片共孵育,使特异性Ⅰ抗与组织中的相应抗原结合,之后加上生物素标记的Ⅱ抗,Ⅱ抗与Ⅰ抗通过抗原-抗体反应结合,后加入ABC复合物,Ⅱ抗上的生物素则与ABC复合物中的亲和素上空下的位点结合.用ABC法中的漂片法做脊髓冰冻切片的染色比较容易做出结果,但如果是用此法做大鼠脑的冰冻切片染色则较难做出结果,特别是做出漂亮的脑片更难.作者在用ABC漂片法做脑组织冰冻切片的免疫组织化学实验的过程中,通过改变常规的操作步骤环节,使做出的脑片质量大为提高.以下实验技术介绍的是将免疫组化ABC法的漂片法用于脑组织冰冻切片中的几点体会.
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神经纤维快速染色改良法
神经纤维的染色方法很多,技术操作也比较复杂,特别是镀银法,若操作不当,不易成功.本染色法是在镀银法原理的基础上,加以改进而建立的神经纤维快速染色法.此方法快捷简便易行可靠,光镜下的神经纤维分布和形态改变清晰可见.本染色法目前尚无文献报导.1.材料和方法 1.1 材料:大白鼠周围神经、腓神经.主要试剂:硝酸银.由北京化工厂提供.1.2 方法:1)所需试剂①0.5%酸性高锰酸钾水溶液50ml,0.5%硫酸水溶液50ml,临用前等量混合.②2.5%铁明矾水溶液:硫酸铁胺2.5g,蒸馏水 100ml.③胺银溶液:以四张组织切片的用量为例.取浓氨水2滴,滴入洁净的50m l烧杯中,然后逐滴向氨水中滴加10%硝酸银,边滴边摇动烧杯,当胺银混合液微呈乳白色的半透明状态下即可使用,无需滤过.2)染色步骤:①周围神经取材后经10%甲醛固定 3 ～4天,制备石蜡切片(8μm);②切片脱蜡,入流水;③酸化高锰酸钾氧化10min ,流水洗三次;2.5%草酸漂白2min,流水洗三次;④2.5%铁明矾媒染5min ,流水洗,蒸馏水洗二次;⑤用滴管将胺银滴加在组织片上,约5～8sec,弃去染液, 将组织切片立即放入10%甲醛溶液中还原10～15sec,在光镜下见组织切片呈棕色为止,流水洗三次;⑥放入0.2%氯化金液中分化1～2min,流水洗;⑦0.2%亮绿复染,流水洗二次;⑧脱水透明,中性树胶封固.2.结果神经纤维呈黑色,胶原纤维淡绿色,背景绿色.3.讨论神经纤维的嗜银性很强,经高锰酸钾氧化后,再经铁明矾媒染剂促染,使胺银液重大银盐沉积于神经纤维处,经过还原剂作用,将银离子还原为黑色的金属银而显现出来. 用氯化金将神经纤维中的未反应出来的银盐除掉.神经纤维镀银法成败的关键是胺银液的配制是否恰到好处.通常配制方式都是向20%硝酸银液中滴加氢氧化铵,形成沉淀,再加氢氧化铵使之刚溶即停,这对经验不足的操作者如果掌握不准,染色就会失败.本染色法与其它神经纤维的镀银法所不同之处,就是胺银溶液的配制方式加以省略和简化.与之相反的是向浓氨水中加硝酸银,这样更便于掌握和操作.这种染色法的优点是操作简单容易掌握,省药品,省时间,光镜下的神经纤维清晰可见,层次分明,没有多余的银颗粒污染现象.染色效果优于其它的神经纤维染色法.注意事项:所用染色材料必须洁净;当组织再还原中呈棕黄色即可.
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自体静脉移植血管相关组织形态研究
1.材料与方法1.1 动物手术健康杂交兔6只,体重2kg左右,以2.5%戊巴比妥钠(25mg/kg体重)肌注麻醉进行无菌手术. 在股动脉中段切除1cm,造成5cm缺损,切取同侧股静脉5cm,用肝素生理盐水冲洗后倒置移入股动脉上,8-0无创伤做端-端吻合.单笼饲养,术后6个月取材.取材时,移植血管均通畅.正常静脉试样取自另外5只兔,体重与做移植术的兔相近.1.2 在移植血管中段切取1cm长的移植血管作标本,制成厚度为5μm的组织切片,分别用H 》E染色、弹性纤维染色(Gomopi法)和胶原纤维(Van Gieson法)染色,光镜观察.2.结果和讨论2.1 组织形态学观察移植血管腔面内皮细胞完整,可见明显增厚的内膜,在环绕管腔的不同部位,内膜增厚程度不同.血管内弹性膜不完整,中膜、外膜分界不清,可见较多的弹性纤维和胶原纤维,管壁中的弹性纤维和正常静脉相比差别不大,但与动脉相比,明显减少.2.2 讨论自体静脉移植于动脉环境中时,由于动脉血液动力学的影响,其组织结构发生了一系列的适应性变化.实验结果显示,移植术后血管逐渐硬化,力学性质的变化,不仅没有动脉化趋势,而是偏离动脉,管壁中影响血管力学行为的组分是弹性纤维、胶原纤维和平滑肌,血管的力学性质不仅取决于各组分的含量比例,也取决于这些组分在管壁中结构.本文组织学观察结果显示,移植血管中弹性纤维的含量和正常静脉相比差别不大,都远低于正常动脉中的含量,表明移植血管的力学性质虽然发生了变化但并没有动脉化的趋势.
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半薄切片中免疫金银染色与石蜡切片中免疫组化染色的比较
免疫金-银染色(Imm unogold-silver,IGS)是1983年Holgate等用免疫金染色加银显影液增强的一种染色方法,可在光镜下观察到阳性反应结果.此法一经推出就受到了广大生物、医学研究人员的认可,给科学研究带来很大的方便.它特异性强,操作简便,而且经济,特别是近十几年来,经过不断改进,应用到半薄切片中,为免疫电镜的研究提供了基础.我们将其与石蜡切片中免疫组化的染色进行了比较研究.1、材料和方法 1.1材料 20例通过光镜、免疫荧光、电镜诊断为IgA肾病的肾活检组织环氧树脂包埋块.1.2方法 1)用NaOH无水乙醇脱树脂;2)10%过碘酸浸10m in,蒸馏水冲洗;3)切片入0.05M TBS pH7.4冲洗10min;4)正常山羊血清10min;5)TGFβ(1:10)和bFGF(1:10),室温孵育20h;6) 0.05M TBS洗10min×3次,0.02M TBS pH8.2 10min;7) 金标(1:20),室温孵育1～2hr;8)0.02M TBS洗10min,0.05 M TBS再洗10min×3,蒸馏水冲洗;9)柠檬酸缓冲液浸5min;10)银显影液染 20min,蒸馏水洗;11)减薄液数秒,充分洗涤;12)二甲基-天青Ⅱ、碱性复红衬染、冲洗、晾干、封固.2、结果 2.1IGS染色:大量的银染颗粒以近曲小管上皮细胞内表达为主(图1);2.2免疫组化染色(sABC法):TGFβ和bFGF大量的表达在皮质区近曲小管和部分远曲小管上皮细胞内(图2).3、讨论半薄切片不同于一般组织切片,由于细胞间关系及细胞组织结构保存良好,进行各种光学染色时更清晰,并可观察到石蜡切片中所不能观察到的微细结构,提高了光镜的分辨水平,为超薄结构水平的研究积累大量的资料.与石蜡切片比,即可节省药品,检测的成分定位更准确,又能在此基础上进行免疫电镜检查.在半薄切片上进行IGS染色时应注意 :1)低于0.05%戊二醛固定可以更好保存抗原性;2)脱环氧树脂812的时间不能少于 1小时;3)过碘酸中放置时间取决与半薄切片的厚度;4)一、二抗稀释液中要加BAS或P EG;5)配制银染液时在暗室加硝酸银,同时染色;6)半薄切片IGS染色对切片的洗涤比其它免疫染色法要求高,在缓冲液中要加表面活性剂,用TBS冲洗后还要用蒸馏水、双蒸水多次冲洗;7)组织在减薄液中的时间应光镜下控制.总之,半薄切片IGS染色法的阳性反应物清晰,对所检测成份存在位点更明确,为进行免疫电镜的进一步观察奠定了在三级切片(石蜡切片4-6μm、半薄0.5-1.0μm、超薄60-80nm)上准确定位的基础.
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采用犀牛牌双面不锈钢刀片制作石蜡切片
采用犀牛牌双面不锈钢刀片制作石蜡切片,比普通石蜡切片刀的切片效果好,操作简便、快捷、省时、经济适用.光镜下组织结构完整无损,清晰透明,具有推广和应用价值, 本切片技术目前国内未见文献报导.1.材料和方法 1.1 材料沈勒公司产犀牛牌双面不锈钢刀片;日本羽毛公司产Mic rotome Holder;美国产AO型滑动式切片机;人体和各类实验动物不同组织 ,10%甲醛固定,常规脱水、石蜡包埋.1.2 方法 1)先将刀架固定在滑动式切片机上 ,将固定刀片的压盖螺丝松开,取一双面刀片顺刀刃方向从中间剪断或折断,平行分开同时夹在刀架上,刀刃外留0.5～0.6mm的宽度,再将固定的螺丝紧靠.2)切片时刀锋下倾角调至1.5～2.0mm,刀架的平行角调至130～140度之间.3) 切片过程中应将粗切与细切所用的刀片各自专用.以便于节省刀片,保证切片质量.4)取片用小楷毛笔,当刀刃接触蜡块时,用毛笔尖抵住蜡片的起始端,随着进刀速度,把组织切片同步提起离开刀刃.2.结果用该刀片制作石蜡切片可达3μm,无颤痕,刀痕显著减少,镜下组织细胞结构完整,清晰透明,达到良好的染色诊断和观察的效果.3.讨论长期以来,石蜡切片大都采用双平面型的高碳钢切片刀,统称普通石蜡切片刀, 该刀在使用过程中弊端较多.凡用过一次就须磨一次.磨刀方法不当,会使刀刃损伤,切片刀痕多,既浪费时间,也影响染色和观察效果.我们采用双面刀片制作石蜡切片,既不用磨刀、被刀,操作也简便,省时省力,切片厚度一般在3～5μm.刀痕皱褶明显减少.从双面刀片与普通切片刀的切片效果对比看,普通切片刀的切片之刀痕皱褶高于双面刀片的一倍之多.从适用角度,我们对双面刀片的切片限量方面作了实验统计,每一刀片对小于2.5 cm2硬度不同的各种组织蜡块平均能切3块,连续性切片可切15～30张,因此,肯定此项切片技术不仅提高了切片质量也提高了切片的工作效率.其方法可行可靠.该特别提出的是用双面刀片制作石蜡切片很经济适用.每片双面刀片0.5元,进口单面一次性刀片18元,相当于36张双面刀片.36张双面刀片可切80～90块,若用单面刀片至少需4～6片.折价80～110元.几年来我们已将此技术应用于尸检、活检病理切片和制作教学切片及科研实验动物的石蜡切片工作中,取得了良好的实验效果.应提出的是,该刀片毕竟不是石蜡切片专用刀具,在使用过程中受到一些条件所限,所以操作时注意以下几方面:组织块宽度不能大于刀片的长度;组织固定脱水浸蜡必须充分;骨组织脱钙必须充分;刀刃外留宽度不能大于0.7mm,不小于0.6mm.
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硬质酸石蜡包埋组织观察
制作组织切片时,用二甲苯混合石蜡对组织透明,其二甲苯对操作人员的危害众所周知,特别是加温二甲苯时挥发很大,对人体的危害更严重.20世纪80年代有人用硬质酸混合石蜡完成对病理组织的透明和浸蜡,这种方法减少了使用二甲苯.我们用这种方法制作正常组织切片并进行了观察.
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苯和二甲苯混合剂与单纯二甲苯对组织块透明效果的比较
石蜡包埋术是组织切片中常用的技术,而组织脱水透明方法和程序对后续包埋及切片产生重大影响.二甲苯是普遍采用的一种透明剂,但是二甲苯很容易引起组织收缩、变脆、硬化,影响切片质量[1],为改善这一情况,有一些代替二甲苯的透明剂的报道[1-4],苯作为一种常用透明剂也被实验室采用,其特点是比二甲苯对组织收缩小,一般不会使组织过度硬化变脆,经我们将苯与二甲苯作透明效果对比,认为苯的透明效果明显优于二甲苯,且较二甲苯更适合作为透明剂在实验室使用,但苯在透明时间上要长于二甲苯,一般在3h以上,不利于快速切片,为此,我们将苯和二甲苯按一定比例混合作为透明剂,并与单纯二甲苯对几种软硬程度不同的组织的透明效果进行比较,取得了较好的效果.
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Ⅰ抗孵育时间对免疫组织化学实验结果的影响
众所周知,抗原与抗体之间的结合具有高度的特异性,免疫组织化学技术应用这一原理,对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究.在神经科学领域,此项技术是不可缺少的.免疫组织化学染色方法有多种类型,但在染色过程中都需要采取一些基本的技术方法,以增强抗原、抗体的特异性反应,降低或消除非特异性反应,使染色达到佳效果.其中增强特异性染色的方法有多种,调整I抗孵肓时间是其中之一.本文探讨了不同的I抗时间对免疫组织化学实验结果的影响.
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免疫组化染色中表面活性剂的应用
组织经福尔马林液固定,大量抗原决定簇被封闭,为了获得满意的结果,常用的方法是对组织切片进行抗原修复.而表面活性剂Tween-20和TritonX-100的合理应用,可以提高免疫组化阳性率以及背景的清晰度,现报道如下.
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微观形态实验教学手段的改革与创新
众所周知,过去很长的一段时间,微观形态实验教学的手段不外乎学生人手一台普通光学显微镜,按实验指导要求,逐一观察实验所需观察的组织切片、一些重点难点的内容则采取设示教镜的常规做法.然而,随着当今信息时代的推进,传统的微观形态实验教学手段的劣势日益凸显,主要表现有:1.学生自行观察组织切片时,老师无法进行实时指导,难于掌握到学生的课堂学习情况.2.尽管老师在课堂上不断巡回,只要学生不主动向老师提问,老师并不知道学生的观察情况.3.虽然通过设示教镜来解决重点难点问题,但很难保证学生不移动所示教的视野内容,一旦发生类似的情况,随后观察示教的学生也不提出任何疑问,从而造成学生对示教内容认识上的错误.4.形态学科在学习中本来就显得枯燥,看片时间过长,视力容易疲劳而导致怨倦,出现学习折扣.总之,在实验课的教与学过程中,难于实现师生间的实时交流,仅寄希望于学生的自觉和主动,很难达到理想的教学效果.
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主动脉壁中弹力纤维空间分布的实验研究
弹力蛋白不仅是动脉壁的重要组成成分,还与主动脉夹层瘤等疾病相关.通过动物实验,图像测量白兔主动脉壁中弹力纤维的空间分布.统计学结果表明:从升主动脉、主动脉弓到降主动脉的轴向变化中,弹力纤维含量存在明显的减少,高达40%左右.而主动脉弓部位弹力纤维分布不存在特异性,可以认为是均匀的.主动脉壁弹力纤维的周向分布是均匀的,四个典型周向位置上弹力纤维的轴向变化满足相同的分布趋势,无显著性差异.弹力纤维沿主动脉壁的径向分布不均匀,且内层相对于中层和外层存在弹力纤维含量显著性减少的特点.因此,从某种角度上讲,血管壁可合理简化为轴向分段、径向分层的三维轴对称复合材料.
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快速制作石蜡切片体会
病理检查结果对指导临床诊疗工作有极其重要的意义.制作一张优质的病理组织切片对病理诊断医生的重要性不言而喻,这也是对从事病理技术工作者的基本的技能要求.特别是在急诊等情况(如手术中快速石蜡切片或其它原因需加快制片)下,需快速制作出优质的组织切片供病理医生做出较准确的诊断以满足临床医生和病人的要求.我科在1996年引进湖北孝感生产的"超声快速组织处理仪"至今,累计急诊或需要快速作出病理诊断的患者计300余例.通过反复实践,总结出较完整的快速制作组织切片的操作规程和经验体会,报告如下,以供同行参考.
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介绍一种骨块组织染色方法
在脱钙骨组织切片HE染色中,可以看到紫蓝色的成骨细胞和骨细胞存在于骨组织中,但陷窝的小管很不清楚,尤其是骨细胞的突起,根本不着色.我们采用未脱钙的骨组织块染色法,先染色,后脱钙,制成石蜡切片.结果,骨细胞的排列与形态非常清晰.介绍如下.
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骨组织对两种根管倒充填材料的反应
根管倒充填是根尖切除术成功的一个重要步骤,要求充填材料无毒,不能吸收,性质稳定,具有X线阻射性,易成形,且封闭性能好.目前已有多种材料用于根管倒充填,常用的有SuperEBA,IRM,银粉玻璃离子.本文目的是评价银粉玻璃离子植入体与SuperEBA粘固粉行根管倒充填时的骨组织反应.材料和方法16只几内亚猪,平均分为两组,实验期分别为4周和12周.局麻下将实验猪下颌骨联合远中部分暴露,钻骨孔,并将实验材料放置在骨孔内.倒充填材料为Ketac Silver和SuperEBA,均放置在Teflon放置器内.在设计的实验期内,处死动物并制备组织切片,经Brown和Brenn染色,进行组织学检查.结果和讨论4周后,Ketac Silver植入体周围仅有轻微炎症,破碎的小Ketac Silver颗粒周围有局限的异体反应,而SuperEBA周围则有轻度至中度的炎症反应.12周后,两种材料均无炎症反应.且1例Ketac Silver植入体与骨组织直接接合.本研究结果表明:Ketac Silver和SuperEBA具有同样好的生物特性,在动物实验条件下,两种材料均能安全、有效地用于根管倒充填术.但Ketac Silver对潮湿比较敏感,尽管其生物性能好,也可能禁用于根端充填.因临床上,根端手术时很难保证术区完全干燥.在这种情况下,SuperEBA可能更合适.[王学侠 李汝英摘 徐宝琪校]
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釉蛋白和成釉蛋白在完全形成鼠磨牙上皮根鞘残余上的表达
Hertwig's上皮根鞘(ERS)及其残余在牙根形成中的作用仍存在争议.需要解决的一个关键问题是釉蛋白(amelin)在ERS上的存在及它们是否参与了牙骨质的形成.已有实验证实釉基质诱导剂能促进无细胞性牙骨质再生,但它们对完全形成牙根牙骨质的再生是否有作用仍不清楚,本文进行了研究.材料和方法12只Sprague-Dawley鼠,年龄分别为50,65和85 d.麻醉状态下切除其上颌骨,经上颌第一磨牙根中部制作矢状组织切片,厚度为7μm.应用釉蛋白和成釉蛋白(amelogenin)mRNAS位点杂交技术和免疫组织化学方法检测ERS上皮细胞中是否存在釉蛋白和成釉蛋白,同时应用抗表皮角蛋白抗体确定上皮根鞘残余.结果和讨论所有鼠磨牙根颈1/2为无细胞性牙骨质,根尖部位为细胞性牙骨质.牙本质和细胞性牙骨质接界处有一层上皮细胞,含有并能合成釉蛋白,但不能合成成釉蛋白.另有一类细胞,它们全部或部分包含在细胞性牙骨质中,形成岛状或束状,同时含有并能合成釉蛋白和成釉蛋白.还有一类上皮细胞,位于细胞性牙骨质的周围和无细胞性牙骨质的表面,不存在也不能合成釉蛋白和成釉蛋白.本研究结果表明,鼠磨牙某些ERS残余的上皮细胞存在并能合成釉蛋白或成釉蛋白,但它们有明显的区域性差异和种类差异.它们均参与了牙根的形成和发育,但釉蛋白和成釉蛋白在鼠牙根部硬组织形成和牙周组织维持中的作用尚需进一步研究.[赵光华摘 王学侠校]
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正畸力作用下牙周膜中Ⅰ型胶原的表达及意义
I型胶原是构成牙周膜固有胶原纤维的主要成分。牙移动过程中，它对于牙周膜与牙槽骨的改建有重要作用。本文以半定量的方法探讨受力兔牙在不同时间、不同力值状态下作倾斜运动时，牙周膜I型胶原的改建情况及其对牙槽骨改建的作用。1 材料和方法 选择健康雄性4月龄日本大耳种家兔30只，体重1.5～2.0 kg, 随机分成3组,两实验组各12只，对照组6只。各组按施力后第1、5、9、14天分为4组［1］。对照组1 d组1只,5 d组2只,9 d组1只,14 d 组2只。2%戊巴比妥钠1 ml/kg静脉注射麻醉。在下颌前牙近龈缘处制备1 mm×1 mm小洞。将闭隙镍钛螺簧安装在下颌切牙洞和第一磨牙之间，拉伸螺簧与口底平行，测力(图1)。两实验组分别加力50 g和100 g。分别于加力后第1、5、9、14天将相应组的动物处死，取受力切牙、相邻切牙及其牙周组织标本，常规制作组织切片,行HE染色及鼠抗兔I型胶原单克隆抗体免疫组化染色(购自北京中山公司，工作浓度1∶100)。行组织学观察。
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丰城鸡血藤的生药学鉴定
目的 鉴别丰城鸡血藤药材.方法 采集江西不同地区的丰城鸡血藤药材,对药材的组织切片进行描述并鉴别;对药材粉末进行显微鉴别;采用薄层方法进行薄层鉴别.结果 多批药材粉末中均有淀粉粒、石细胞、木栓细胞、分泌细胞、木纤维、具缘纹孔导管、网纹导管及螺纹导管;薄层鉴别显示多批药材在对照品对应位置上,显示相同颜色的斑点.结论 所用方法适用丰城鸡血藤药材的鉴别及质量控制.
