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肝组织学检查常用的特殊染色及免疫组化染色
在肝脏疾病的临床病理诊断中,恰当选择特殊染色或免疫组化染色对明确病变性质、判断病变程度有着重要意义[1,2].现将我科十几年来在肝脏病研究及临床病理诊断中所常用的特殊染色及免疫组织化学染色方法作一简介.
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套细胞淋巴瘤组织细胞周期蛋白D1免疫组织化学染色方法的优化及其在病理诊断中的意义
目前,利用常规染色方法,大部分实验室使用的细胞周期蛋白(cyclin) D1抗体虽然能在许多肿瘤(如乳腺癌)中准确地标记出相应的蛋白,但套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma,MCL)肿瘤细胞的显色多位于胞质和胞膜,而事实上cyclin D1应位于核内.为了解决MCL诊断中的难题,我们参考倪灿荣介绍的方法[1,2],对美国 Neomarker公司生产的cyclin D1抗体的染色方法进行了探索,发现在不同的情况下有不同的着染方式,进而摸索出了一套稳定且简单易行, 针对MCL肿瘤细胞的cyclin D1免疫组织化学染色方法.使其在MCL的诊断和鉴别诊断中发挥出应有的作用.
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Dukes B期大肠癌淋巴结微转移与临床病理关系
目的:探讨80例Dukes B期大肠癌淋巴结微转移状态及其与临床病理因素与预后的关系.方法:对80例Dukes B期大肠癌淋巴结行间断连续切片结合细胞角蛋白20抗体免疫组织化学染色方法检测淋巴结微转移,并对全部患者进行随访.结果:大肠癌淋巴结微转移与性别、年龄、肿瘤部位、大体分型、以及肿瘤大径长无关,而与肿瘤的分化程度和肿瘤侵犯肠周径有关;微转移阳性组5 a生存率为36.7%,微转移阴性组5 a生存率为72.2%,经Log-Rank检验差异有统计学意义(P<0.01),微转移阳性组与阴性组复发率分别为75%和28.8%,差异有统计学意义(P<0.01).结论:间断切片法结合CK20免疫组织化学方法有助于检出Dukes B期大肠癌淋巴结微转移,增加每个淋巴结的切片数量有助于提高微转移的检出率;低分化及癌肿侵犯肠周径>3/4者易发生淋巴结微转移;淋巴结微转移阳性组与阴性组的生存率与复发率有显著差异.
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胆囊癌微血管密度的测定及其生物学意义
微血管密度(microvessel density, MVD)与胆囊癌的报道尚少.我们采用免疫组织化学染色方法,对58例胆囊癌标本间质内微血管进行标记,并作定量计数和分析,探讨其与该肿瘤浸润、转移及预后的关系.
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喉癌中尿激酶型纤溶酶原激活剂的表达与肿瘤侵袭转移的关系
尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA)和它的细胞表面特异受体(urokinase-type plasminogen activator receptor,uPAR)相结合,提高细胞表面范围纤溶酶的活动,在肿瘤侵袭和转移过程中起着关键作用,Ⅰ型纤溶酶原激活剂抑制剂(plasminogen activator inhibitor type-1,PAI-1)是uPA的主要抑制剂,调节uPA的活动[1].本实验应用免疫组织化学染色方法分析uPA系统各成分在声门上型喉癌组织中的表达和分布.
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温阳散结中药对裸鼠移植性肝癌生长及微血管密度的影响
本实验将传代的人BEL-7402肝癌细胞接种于裸鼠腋下,观察温阳散结中药不同浓度及不同给药途径对裸鼠肿瘤生长影响.并采用免疫组织化学染色方法,对肿瘤间质内微血管标记后定量计数,探讨中医药在抑制肝癌微血管方面的作用.
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乳腺癌血管内皮生长因子表达与血管生成及预后相关性研究
研究表明,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,vegf)在肿瘤的间质形成和新生血管形成中起关键作用。本研究采用免疫组织化学染色方法,检测 47例原发性乳腺癌中vegf表达与微血管密度(microvessel density, mvd),探讨乳腺癌vegf表达强度与肿瘤血管生成、预后的相关性。
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基质金属蛋白酶及金属蛋白酶组织抑制因子与大肠癌转移的相关性研究
侵袭和转移是恶性肿瘤患者死亡的主要原因,在此过程中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)参与肿瘤细胞对基底膜(basement membrane,BM)和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的降解,金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitors of matrix metalloproteinases,TIMPs)对MMPs的活性起抑制性调节作用.MMPs和TIMPs的平衡是影响肿瘤演进的重要因素.本研究应用免疫组织化学染色方法对大肠癌进行MMP-2、MMP-9和TIMP-1、TIMP-2染色,以探讨MMPs和TIMPs与大肠癌转移的关系.
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儿童肾母细胞瘤中CD99的表达及其临床意义
本文通过免疫组织化学染色方法检测CD99在肾母细胞瘤(WT)中的表达情况,探讨CD99在肾母细胞瘤的诊断和鉴别诊断中的应用价值,并进一步探讨肾母细胞瘤的发生机制及起源问题.1资料与方法1.1临床资料:收集山西省儿童医院泌尿外科2005年5月至2012年8月经治肾母细胞瘤病例32例,所有患者均不伴有综合征和其他泌尿生殖道畸形,其中肿瘤组织和瘤旁正常肾组织各取一块,其中瘤旁组织标本取自远离肿瘤组织约0.5~1.0 cm处有正常肾脏结构的组织.另取正常肾组织10例作为对照,标本来自因外伤切除的有正常组织结构的肾组织,每块组织大小约为1.5 cm×1.5 cm×0.5 cm,均用4%中性甲醛固定,分别进行苏木素-伊红(HE)染色和SP法免疫组织化学染色.
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通天草提取物对Aβ损伤SAMP8小鼠原代海马神经元细胞的保护作用及代谢组学研究
目的:采用代谢足迹技术探讨通天草提取物对Aβ损伤SAMP8小鼠原代海马神经元细胞的保护作用及其代谢机制.方法:采用MTT法测定细胞增值率测定A3损伤SAMP8小鼠原代海马神经元细胞的细胞增殖情况,在此基础上首次采用代谢足迹技术评价通天草提取物的疗效.聚焦关键代谢通路及相关代谢靶标,阐明其Aβ损伤SAMP8小鼠原代海马神经元细胞的发病机制和通天草提取物的作用机制.结果:MTT法测定细胞增值率结果Aβ损伤SAMP8小鼠的原代海马神经元细胞的细胞活力明显减少,经代谢足迹技术研究发现,与同窝野生小鼠相比,Aβ损伤SAMP8小鼠的原代海马神经元细胞代谢异常主要集中在与神经细胞相关的叶酸代谢和牛磺酸代谢上,经高通量质谱解析及文献数据库检索确定了3个差异代谢物,分别是L-磺基丙氨酸(L-Cysteic acid)、二氢叶酸(Dihydrofolate)、分支酸(Chorismate),这些小分子代谢产物经通天草提取物干预后有明显的回调趋势.结论:通天草提取物对Aβ损伤SAMP8小鼠的原代海马神经元细胞具有一定程度的治疗作用,本次发现的3个生物标记物可能是Aβ损伤SAMP8小鼠的原代海马神经元细胞发病机制的潜在靶点,给予通天草提取物后这些标记物呈不同程度的回调趋势,为通天草提取物治疗阿尔兹海默病提供实验依据.
关键词: 通天草 SAMP8小鼠 免疫组织化学染色方法 代谢足迹 潜在靶点 -
慢性鼻窦炎嗅粘膜P物质的观察
慢性鼻窦炎是鼻科常见疾病,其发病往往与感染、变态反应相关,这类患者常伴有嗅觉障碍。为进一步研究慢性鼻窦炎、嗅觉障碍与变态反应的相关性,我们对慢性鼻窦炎患者嗅粘膜进行了P物质(substance P)的观察。材料和方法1 标本来源患者组:选自1997年4~8月北京同仁医院耳鼻咽喉科因慢性鼻窦炎入院行鼻窦内窥镜手术患者55例,男性31例,女性24例,年龄范围1 6~65岁,平均年龄42.6岁。术前经鼻窦CT检查,并根据1996年郑州耳鼻咽喉科学会研究的慢性鼻窦炎分型、分期标准进行诊断。术中取患者嗅粘膜。对照组:选用单纯鼻中隔偏曲行鼻中隔矫正术的病人11例,取其嗅粘膜作对照。2 嗅粘膜P物质免疫组化检测标本用10%的中性福尔马林液固定,固定时间约24小时。标本按石蜡切片常规脱水、浸蜡、包埋,用轮转式石蜡切片机切片,采用SLAB免疫组织化学染色方法试剂:一抗采用兔抗多克隆SP抗体,二抗为生物素性山羊抗兔IgG,辣根酶标记链霉素亲和。显色剂:底物二氨基联苯胺(DAB)。同时设有阳性对照和阴性对照。P物质阳性标准:同阳性对照比较,胞核或胞浆着棕色,胞核颜色较深,胞浆内有棕色、粗大颗粒的细胞为P物质阳性细胞,并由阴性对照排除非特异性染色,根据阳性细胞的计数分为阴性,全片未见P物质阳性细胞;P物质阳性1分,全片少量散在P物质阳性细胞;P物质阳性2分,较多呈阳性细胞(一个视野内>5个阳性细胞)。
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Bcl-2反义寡核苷酸抑制视网膜色素上皮细胞增生的实验研究
目的探讨不同浓度的Bcl-2反义寡核苷酸(bcl-2 AS-ODN)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞增生活性的影响.方法使用不同浓度(0、15、30、45、60μmol/L)的bcl-2 AS-ODN和bcl-2 S-ODN处理人RPE细胞24h后,使用MTT、氚-标记脱氧胸苷掺入试验(3H-TdR)测定RPE细胞增生的抑制率及DNA合成抑制率;使用流式细胞仪检测其对RPE细胞周期的影响;使用免疫组织化学染色法检测不同浓度bcl-2 AS-ODN作用下的RPE细胞bcl-2的表达.结果不同浓度bcl-2 AS-ODN处理过的RPE细胞的抑制率和DNA合成抑制率随bcl-2 AS-ODN浓度的增高而升高,bcl-2 AS-ODN将RPE细胞阻滞在G0/G1期,免疫组化结果显示:bcl-2 AS-ODN可抑制RPE细胞bcl-2的表达.结论bcl-2 AS-ODN对RPE细胞的增生有抑制作用且呈浓度依赖性,这一结果有可能成为增生性玻璃体视网膜病变(PVR)基因治疗的一个新靶点.
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抗人型H抗原单克隆抗体在大肠癌大肠息肉中表达
大肠癌是我国发病率较高的恶性肿瘤之一,其早期诊断是大肠癌防治研究的重要课题,本文采用免疫组织化学染色方法分析了H抗原单克隆抗体在人体大肠癌和大肠息肉组织中表达,现将结果报告如下.
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mTOR抑制剂AZD8055抑制喉癌细胞增殖并促进凋亡
目的:哺乳动物雷帕霉素靶蛋白( mammalian target of rapamycin, mTOR )可调节细胞的生长、生存和自噬。本研究观察mTOR在人喉癌组织中的表达,明确其对喉癌发生与发展的关系;以mTOR抑制剂AZD8055处理人喉癌细胞系Hep-2,观察其抑瘤作用并探讨其作用机制。方法:免疫组织化学染色方法检测喉癌组织中mTOR的表达;分别以0.8、2.6、8、26和80μg/L的AZD8055处理Hep-2细胞24、48或72 h,MTT方法检测细胞增殖, TUNEL染色检测细胞凋亡,罗丹明123染色检测线粒体膜电位,Western blot和免疫荧光染色检测蛋白表达。结果:人喉癌组织中mTOR表达上调,并且其分化程度越低,mTOR表达水平越高。以AZD8055处理后, Hep-2细胞增殖减少,凋亡增加,线粒体膜电位下降;caspase-3表达上调, Bcl-2表达下调, BH3-only蛋白如Bim、Bid和Bad表达上调。结论:mTOR表达上调可参与喉癌的发生与发展,抑制mTOR活性可抑制喉癌细胞增殖,促进喉癌细胞凋亡,mTOR可作为喉癌治疗的潜在靶标。
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乳腺癌患者ER、PR、C-erbB-2基因蛋白表达的研究
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,乳腺癌预后与多种因素相关,其中与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、C-erbB-2基因蛋白表达较密切.我们采用免疫组织化学染色方法检测ER、PR、C-erbB-2,探讨它们在乳腺癌中的表达情况及与预后的关系.
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Ⅰ抗孵育时间对免疫组织化学实验结果的影响
众所周知,抗原与抗体之间的结合具有高度的特异性,免疫组织化学技术应用这一原理,对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究.在神经科学领域,此项技术是不可缺少的.免疫组织化学染色方法有多种类型,但在染色过程中都需要采取一些基本的技术方法,以增强抗原、抗体的特异性反应,降低或消除非特异性反应,使染色达到佳效果.其中增强特异性染色的方法有多种,调整I抗孵肓时间是其中之一.本文探讨了不同的I抗时间对免疫组织化学实验结果的影响.
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肝细胞癌P53蛋白的表达及临床意义的研究
目的与方法:为了阐明P53蛋白在人肝癌细胞中表达及临床意义,应用了免疫组织化学染色方法检测肝细胞癌P53蛋白表达情况.结果:49%(36/74)的病例显示有P53蛋白的表达,低分化癌的P53蛋白表达率显著高于高、中分化癌(X2检验P<0.05).结论:这些资料显示:导致P53蛋白异常表达的P53基因突变是肝细胞癌的一种常见的分子结构改变,是评价肝细胞癌预后有价值的一个生物学指标.关建词:P53基因;突变;免疫组织化学;肝细胞癌