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通天草醇提物对阿尔茨海默病小鼠血脑屏障的影响
目的 研究通天草( WH)醇提物对淀粉样蛋白前体蛋白／早老基因1 (APP／PS1)双转基因小鼠炎症反应和血脑屏障的影响及作用机制.方法 将C57BL／6小鼠作为正常组( n=6).按照体重将APP／PS1双转基因小鼠分成4组:模型组、对照组和高、低2个剂量实验组,每组6只.低、高2个剂量实验组分别给予WH醇提物1.32,5.54 g· kg-1;对照组给予吡拉西坦0.6 g· kg-1;正常组和模型组给予量0.9%NaCl,均每天灌胃1次,连续灌胃28 d.用Morris水迷宫检测WH醇提物对小鼠学习和记忆能力的影响,用伊文思蓝染色检测血脑屏障,用逆转录-聚合酶链式反应和免疫印迹法检测紧密连接蛋白(ZO-1)、Claudin-5和Occludin的mRNA与蛋白表达水平,用酶联免疫吸附法检测小鼠血清炎性因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量.结果正常组、模型组、对照组和高、低2 个剂量实验组的逃避潜伏时间分别为(18.68 ±3.75 ), ( 41.09 ±7.57 ), ( 23.55 ±3.07 ), ( 29.98 ±5.66 )和(34.50 ±6.10)s;这5组的伊文思蓝含量分别为(4.03 ±0.55),(10.57 ±1.66), (5.94 ±1.00),(6.93 ±1.13)和(9.13 ±1.59)μg· g-1;这5组的ZO-1 mRNA的相对表达量分别为1.00 ±0.07,0.25 ±0.01,0.95 ±0.04,0.75 ±0.01 和0.37 ±0.01(蛋白表达水平与基因的趋势一致);这5组的IL-6的含量分别为(178.05 ±26.17),(611.46 ±63.96),(308.05 ±47.44 ),(386.70 ±76.51)和(538.00 ±46.86 )pg· mL-1;这5组的TNF-α的含量分别为(39.05 ±5.78 ), (325.55 ±61.44),(124.37 ±18.14),(200.10 ±38.18)和(250.80 ±29.64) pg· mL-1,高、低2个剂量实验组与模型组比较,以上指标差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).其中高剂量实验组效果更好.结论 WH醇提物能改善APP／PS1双转基因小鼠的学习能力和记忆障碍,降低炎症反应并缓解血脑屏障损伤,其保护作用机制可能与升高血脑屏障中紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-5和Occludin表达水平有关.
关键词： 通天草 APP/PS1双转基因小鼠 炎性因子 血脑屏障 阿尔茨海默病 -
通天草醇提物对阿尔茨海默病小鼠行为学及海马炎症介质的影响
目的 探讨通天草醇提物对阿尔茨海默病小鼠学习能力、记忆能力、学习记忆保持能力等行为学及海马炎症介质白细胞介素(IL)-lβ、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量的影响.方法 根据随机数字表法将48只雄性C57BL/6小鼠分为六组:模型组、正常组、多奈哌齐组和通天草醇提物高、中、低剂量组,每组8只.采用Aβ1-42(80 pmol/μL)双侧脑室注射的方法诱导阿尔茨海默病模型,各组实验开始每天灌胃1次,多奈哌齐组小鼠给予0.000 92 g/(kg·d)灌胃,通天草醇提物高、中、低剂量组小鼠分别给予3.96、1.98、0.99 g/(kg·d)灌胃,而正常组和模型组小鼠给予生理盐水灌胃,连续治疗35 d.采用Morris水迷宫检测阿尔茨海默病小鼠行为学的改变,酶联免疫吸附法检测阿尔茨海默病小鼠海马IL-1β、TNF-α含量.结果模型组小鼠的逃避潜伏期及游泳距离增加,同时伴有目标停留时间缩短和跨平台次数减少,寻找到水迷宫系统水下平台所需要的时间较长,与正常组比较,模型组小鼠行为学出现明显异常(P＜0.05);与正常组比较,模型组海马炎症介质IL-1β、TNF-α水平明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,通天草醇提物高、中剂量组小鼠行为学明显改善,海马IL-1β、TNF-α水平明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 通天草醇提物能够改善小鼠的学习能力和记忆障碍,降低炎性反应并缓解血脑屏障损伤,在阿尔茨海默病治疗中发挥重要作用.
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通天草提取物对阿尔茨海默氏病转基因小鼠认知功能的改善作用
目的：探讨通天草提取物对阿尔茨海默氏病（ Alzheimer’ s disease，AD）转基因小鼠的治疗作用。方法：每天2次使用灌胃器，将通天草提取物（0．3mL／10g· W）由小鼠口腔直接注入到小鼠胃中。通过Morris水迷宫和开场实验检测小鼠的学习记忆和探索能力。通过HE染色检测小鼠海马齿状回面积和细胞密度改变。结果：给予通天草提取物治疗28天后，在Morris水迷宫实验中，治疗组小鼠的逃避潜伏期明显缩短（P＜0．01），经过平台次数明显多于对照组（P＜0．01），停留在目标象限的时间明显延长（P＜0．01）；在开场实验中，治疗组小鼠穿经格子数和前肢抬起次数均显著多于对照组（P＜0．01）。 HE染色结果显示，经通天草提取物治疗28天后，与对照组小鼠相比，治疗组小鼠海马齿状回面积明显增大（P＜0．05），细胞密度显著增高（P＜0．05）。结论：通天草提取物治疗可有效改善AD转基因小鼠学习记忆能力和空间探索能力。
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通天草乙醇提取物对Aβ1-40所致的AD大鼠海马区细胞形态学的影响
目的:探讨通天草乙醇提取物对Aβ1-40所致的AD大鼠海马区细胞形态学的影响.方法:使用脑立体定位仪确定大鼠单侧海马Ca1区的颅骨投影位置,注射定量Aβ1-40聚合片段,从而复制得到AD动物模型.利用HE染色法将大鼠脑切片染色,在光学显微镜下观察并比较海马区结构和神经细胞的变化.结果与结论:通天草提取物能够改善AD模型大鼠海马区细胞带紊乱、变稀、散在分布等异常结构,维持神经元和锥体细胞数量,防止小胶质细胞的增生,从而对神经元细胞起到保护作用,通天草乙醇提取物对Aβ1-40所致AD大鼠具有治疗作用.
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通天草治疗阿尔茨海默症的药效物质研究
目的:初步阐明通天草治疗阿尔茨海默症(Alzheimer's disease, AD)的药效物质.方法:采用硅胶柱色谱、HPLC等方法对通天草进行提取和分离,并利用核磁共振技术鉴定所得到的单体化合物结构.结果:从通天草的水提取物分离了5个单体化合物,通过核磁共振波谱学方法鉴定这5个化合物分别为amyrisin A (1), amyrisin B (2), 3″-3″-dimethylpyrano[3′,4′]2,4,2′-trihydroxychalcone (3), morusyunnansin D (4)和morusyunnansin E (5).结论:化合物1~5首次从通天草中分离得到,可能是通天草抗AD的药效物质.
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通天草提取物对AD大鼠海马区5-HT蛋白表达的影响
目的:阐明通天草提取物对AD模型大鼠海马区5-HT蛋白表达的影响,探讨通天草提取物在拮抗AD中的作用机制.方法:将经过Morris水迷宫筛选的80只大鼠按体质量随机分为空白对照组、假手术组、模型组、阳性药治疗组、通天草提取物组(共4组,分为水提物高剂量组和低剂量组;醇提物高剂量组和低剂量组).采用脑内注射Aβ1-40复制AD大鼠模型.连续给药28天后,用免疫组化法观察海马区5-HT蛋白表达的变化.结果:5-HT的阳性表达颗粒主要出现在细胞质中,呈黄色或黄棕色深染颗粒.在阳性对照组、两个水提组和两个醇提组大鼠的大脑海马及皮质内5-HT阳性染色较深,接近于空白对照组和假手术组,与模型组相比,阳性对照组、两个水提组和两个醇提组的阳性细胞数量明显增多(P＜0.01).结论:通天草提取物能增强AD大鼠海马组织中5-HT的蛋白表达,对Aβ1-40所致的AD具有拮抗作用.
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通天草提取物对Aβ损伤SAMP8小鼠原代海马神经元细胞的保护作用及代谢组学研究
目的:采用代谢足迹技术探讨通天草提取物对Aβ损伤SAMP8小鼠原代海马神经元细胞的保护作用及其代谢机制.方法:采用MTT法测定细胞增值率测定A3损伤SAMP8小鼠原代海马神经元细胞的细胞增殖情况,在此基础上首次采用代谢足迹技术评价通天草提取物的疗效.聚焦关键代谢通路及相关代谢靶标,阐明其Aβ损伤SAMP8小鼠原代海马神经元细胞的发病机制和通天草提取物的作用机制.结果:MTT法测定细胞增值率结果Aβ损伤SAMP8小鼠的原代海马神经元细胞的细胞活力明显减少,经代谢足迹技术研究发现,与同窝野生小鼠相比,Aβ损伤SAMP8小鼠的原代海马神经元细胞代谢异常主要集中在与神经细胞相关的叶酸代谢和牛磺酸代谢上,经高通量质谱解析及文献数据库检索确定了3个差异代谢物,分别是L-磺基丙氨酸(L-Cysteic acid)、二氢叶酸(Dihydrofolate)、分支酸(Chorismate),这些小分子代谢产物经通天草提取物干预后有明显的回调趋势.结论:通天草提取物对Aβ损伤SAMP8小鼠的原代海马神经元细胞具有一定程度的治疗作用,本次发现的3个生物标记物可能是Aβ损伤SAMP8小鼠的原代海马神经元细胞发病机制的潜在靶点,给予通天草提取物后这些标记物呈不同程度的回调趋势,为通天草提取物治疗阿尔兹海默病提供实验依据.
关键词： 通天草 SAMP8小鼠 免疫组织化学染色方法 代谢足迹 潜在靶点
