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眼部抗过敏药物对人结膜肥大细胞的作用比较
近期的研究表明,过敏性结膜炎影响了约1/4的普通人群.治疗过敏性结膜炎的主要药物有抗组胺药联合血管收缩剂和抗过敏药物.这些抗过敏药物可阻止肥大细胞脱颗粒.早期的肥大细胞稳定剂是色苷酸钠(0pticrom),此药物初发明用于治疗哮喘,但其抑制肥大细胞活性的研究中使用的是非人类的肥大细胞.
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过氧化氢对体外培养的人晶状体上皮细胞形态、活性、移行及凋亡的影响
目的 研究过氧化氢(H2O2)对体外培养的人晶状体上皮细胞形态、存活率、移行及凋亡情况的影响.方法 实验研究.体外培养晶状体上皮细胞株HLECs-B3,用不同浓度(0～1000 μmol/L)H2O2处理晶状体上皮细胞,CCK-8法检测30 min、3、6、12及24 h细胞存活率;光学显微镜下观察H2O2处理24 h后细胞形态及移行的情况;用annexinV/PI试剂盒在流式细胞仪上检测细胞凋亡的情况.实验数据采用两因素方差分析.结果 H2O2处理人晶状体上皮细胞24 h后,对照组细胞形态正常,细胞间连接紧密.随着H2O2浓度的增高,100、300 μmol/L浓度组中,死亡细胞不多,而500、700及1000 μmol/L浓度组死亡的细胞数增多.死亡细胞不再贴壁,悬浮于培养基中,失去原固有形态,呈圆形,折光性明显增高.存余的贴壁细胞变得皱缩,轮廓增强,边缘僵硬.在H2O2处理人晶状体上皮细胞30 min及3 h组中,随着H2O2浓度的升高,细胞存活率有所降低,差异有统计学意义(F30 min=21.45,P30 min＜0.05;F3 h=64.31,P3 h＜0.05).随着处理时间延长,当H2O2处理6 h时,细胞总体存活率降低,差异有统计学意义(F6 h=124.14,P6 h＜0.05).处理12 h时,细胞总体存活率显著降低,差异有统计学意义(F12 h=337.61,P2 h＜0.05).处理24 h时,细胞存活率显著降低,差异有统计学意义(F24 h=268.25,P24 h＜0.05).在无血清情况下用不同浓度的H2O2培养人晶状体上皮细胞24 h,发现各组细胞移行速度有所不同,具体分析发现,前12 h细胞移行速度较快,而后12 h细胞移行速度相对减慢,差异有统计学意义(F=82.21,P＜0.05).选择对照组、100和1000 μmol/L 3个浓度组处理人晶状体上皮细胞24 h后,通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况,结果显示3个浓度组的细胞凋亡率总体差异有显著意义(F=7.49,P=0.02),进一步流式分析结果显示,细胞总体死亡率显著高于对照组,差异有统计学意义(F=24.85,P＜0.05).细胞总体存活率则显著低于对照组,差异有统计学意义(F=14.73,P＜0.05).结论 H2O2可以影响体外培养的人晶状体上皮细胞形态,减少其存活率、加速其凋亡,并对其移行速度具有双向的调节作用.
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耳穴按摩治疗耳鸣疗效观察
目前,对耳鸣多采取改善微循环、神经营养及增强细胞活性等治疗,疗效欠佳.为此,我们采用王不留行耳穴按摩结合西药治疗此病93例,并与常规治疗方法进行比较,前者效果较好.
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运动与γ-干扰素反应及其影响因素
适量运动可提高机体抗病能力,而过度训练则使机体免疫功能下降.γ-干扰素(IFN-γ)在机体免疫防御机制中发挥相当重要的作用.IFN-γ可诱导单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞等MHCⅡ类抗原的表达,使其参与抗原提呈和特异性免疫的识别过程;促进巨噬细胞杀伤病原微生物;协同IL-2诱导LAK活性,促进T细胞IL-2R表达;诱导急性期蛋白合成,诱导髓样细胞分化;增强NK细胞活性等.运动和IFN-γ的关系正日益受到体育科学工作者的重视.本文对这一领域的研究现状做一综述.
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基于神经细胞活性评价高功率微波照射安全性研究
目的 研究平均功率密度5 mW/cm2的高功率微波(HPM)对神经细胞活性的影响,为制定微波照射的安全标准提供参考数据.方法 出生后12 h内Wistar大鼠乳鼠皮层神经细胞常规培养7 d后,进行HPM照射.采用细胞内ATP酶活性测定法,检测HPM对原代培养神经细胞总ATP酶、钙镁ATP酶和钠钾ATP酶活性的影响,并用MTT法检测照射后细胞琥珀酸脱氢酶(SDH)活性的变化,观察时间点分别为HPM照射后1和6 h,1、3和7 d.结果 原代培养神经细胞经平均功率密度5 mW/cm2的HPM连续照射6 min后,同一时间点内HPM照射组和对照组之间细胞SDH活性和各ATP酶活性均无显著差异.结论 平均功率密度为5 mW/cm2的HPM照射对原代神经细胞的活性无显著影响,提示就神经细胞活性而言,该功率密度的HPM照射是安全的.
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有关干扰素治疗慢性乙型肝炎的推荐意见解读
目前国内外用于抗乙肝病毒的干扰素主要为α亚型,其作用机制除通过诱导一些抗病毒蛋白(例如2,5-寡腺苷酸合成酶可降解病毒mRNA,蛋白激酶K可阻断病毒蛋白翻译)而起到直接抗病毒作用外,还可通过免疫调节(例如促进受感染的肝细胞表达HLA-I类抗原、增加NK细胞活性等)间接起到抗病毒作用.
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羟基喜树碱对病理性瘢痕成纤维细胞活性和凋亡的影响
DNA拓扑异构酶广泛存在于生物体细胞核内,能调节核酸空间结构动态变化,是控制核酸生理功能的关键酶,包括I型拓扑酶和Ⅱ型拓扑酶.羟基喜树碱是一种DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂,目前已用于小细胞肺癌[1],卵巢癌[2],多发性骨髓瘤[3]等恶性肿瘤的治疗.有观点认为病理性瘢痕是一种皮肤良性肿瘤[4],而病理性瘢痕形成的重要细胞是成纤维细胞,笔者体外培养了病理性瘢痕成纤维细胞,研究了羟基喜树碱对其增殖活性及凋亡的影响,现报告如下.
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6-三氮唑-4-氨基喹唑啉类新型抗肿瘤药物的合成及活性研究
目的:找到活性更好的的新结构抗肿瘤药物.方法:以氨基苯甲酸为原料,经碘代、合环、氯代、亲核反应、Sonogashira偶联并脱掉三甲基硅基,与叠氮化合物反应6步反应得三氮唑中间体,后Suzuki偶联得到18个目标化合物,其结构均经1H-NMR和LC-MS确证.用MTT法评价了其对EGFR高表达的乳腺癌细胞株SKBR3和非小细胞肺癌细胞株A549的抑制活性.结果与结论:大多数化合物对A549细胞株的抑制能力均比拉帕替尼强,其中化合物7对SKBR3和A549细胞株均表现出强于对照药拉帕替尼的细胞活性,IC50分别是4.7,0.025 mol· L-1,小鼠体内代谢优异,并且对A549细胞有一定的治疗作用,有可能弥补拉帕替尼在非小细胞肺癌治疗方面的不足.
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依托泊苷的高载药量纳米化制备及其体外血脑屏障穿透性
目的 为改善依托泊苷(VP-16)水溶性差和活性较低的问题,将VP-16制备成纳米颗粒(NP)悬浊液(VP-16 NP),以提高其对肿瘤细胞的杀伤作用,并通过体外血脑屏障(BBB)模型评价其穿透性.方法 利用反溶液交换法将VP-16制备为VP-16 NP,扫描电镜(SEM)观察形态,透射电镜(TEM)观察内部结构,动态光散射(DLS)测定粒径大小.通过测定VP-16粉末和VP-16 NP的药物释放曲线比较两者的释放率.采用MTT比色法检测VP-16 NP对KB细胞存活的影响.采用2周龄SD大鼠的第1~2代原代脑微血管内皮细胞构建体外BBB模型.依据经典的4 h渗漏实验、跨内皮电阻(TEER)实验和荧光素钠(FLU)穿透性实验,验证体外BBB模型,评价VP-16 NP的BBB穿透性.结果 TEM,SEM和DLS观察可见,制备的VP-16 NP为实心结构的球形,粒径约为140 nm.药物释放曲线结果显示,VP-16 NP的药物累积释放率是VP-16粉末的3倍.MTT比色法检测结果表明,VP-16粉末对KB细胞存活无抑制作用,而VP-16 NP能有效地抑制KB细胞存活.4 h渗漏实验中,Transwell细胞模型上室与下室能维持>0.5 cm的液面差,说明体外BBB模型初步形成.TEER实验有效电阻值为223 Ω·cm2,表明体外BBB模型基本建成.FLU穿透性实验结果显示,在15,30和60 min时,穿透系数分别为(0.33±0.04)×10-3,(0.42±0.07)×10-3和(0.52± 0.06)×10-3cm·min-1,说明模型的通透性低.体外BBB模型VP-16 NP穿透性结果显示,其在30 min的穿透系数为(1.87±0.03)×10-3cm·min-1,显示出较高的穿透性,表明VP-16 NP对BBB有较好的穿透效果.结论 VP-16 NP可提高药物的释放率,并有较好的BBB穿透性.
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艾烟冷凝物对肺泡Ⅱ型上皮细胞A549活性及凋亡的影响
目的 观察艾烟冷凝物(PM10采取人体可吸入的艾烟部分)对肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)活性及凋亡的影响.方法 体外培养A549细胞,加入不同浓度的艾烟冷凝物,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、荧光显微镜来观察其对A549的细胞活性以及细胞凋亡的影响.结果 MTT法结果显示:与对照组相比,A549的细胞存活率随浓度和时间发生改变,具有明显的时间浓度依赖性；0.12g/L浓度的艾烟冷凝物作用于细胞12h后可显著提高细胞存活率(P=0.005＜0.01);荧光显微镜下观察发现艾烟冷凝物可以引起细胞发生凋亡,且具有浓度依赖性.结论 A549细胞随着艾烟冷凝物浓度的增加、刺激时间的增加而引起细胞活力逐渐下降,表明一定浓度的艾烟冷凝物和一定的刺激时间对细胞具有毒性作用；一定浓度的艾烟冷凝物在较短刺激时间内具有细胞增殖作用,故认为艾烟对细胞的增殖作用可能是艾烟发挥有效作用的重要因素之一；能够引起细胞的凋亡可能是毒性作用的重要因素之一.
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艾烟冷凝物对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383活性和吞噬功能的影响
目的 观察不同浓度的艾烟冷凝物对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383活性和吞噬功能的影响.方法 在细胞增殖实验中,将艾烟冷凝物染毒浓度分别设计为:0、0.004、0.008、0.012、0.016、0.020 g/L,以上述不同浓度的艾烟冷凝物对NR8383进行细胞染毒,染毒时间分别为12、24、36、48h,然后采用CCK-8法对细胞增殖情况进行检测；吞噬功能实验中,艾烟冷凝物染毒浓度设计同上,对NR8383进行细胞染毒24 h后,采用流式细胞仪检测吞噬率.结果 艾烟冷凝物对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383细胞进行染毒12 h后,各实验组的细胞存活率虽都高于空白对照组,但各实验组与空白对照组差异无统计学意义(P＞0.05).染毒24、36 h后,实验组浓度为0.004、0.008、0.012、0.016 g/L时,各组细胞存活率不仅高于空白对照组,且各实验组与空白对照组差异有统计学意义(P＜0.05),实验组浓度为0.020g/L时,其存活率虽低于空白对照组,但与空白对照组差异无统计学意义(P＞0.05).染毒48 h后,除浓度为0.008g/L的实验组外,其余各组细胞存活率与空白对照组差异有统计学意义(P＜0.05).艾烟冷凝物对NR8383细胞分别进行染毒12、24、36、48 h后,NR8383细胞存活率随着艾烟冷凝物浓度的升高均呈现先增加后降低的趋势,且随着作用时间的延长,细胞存活率亦随着艾烟冷凝物浓度的增高而先增加后降低.艾烟冷凝物对NR8383细胞分别进行染毒24 h后,NR8383细胞的吞噬功能随着艾烟冷凝物浓度的升高而增强.除浓度为0.004g/L的实验组外,其他各组与空白对照组差异均有统计学意义(P＜0.005,校正卡方值).结论 在一定浓度范围内,艾烟冷凝物可提高大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的活性和吞噬功能,并呈现一定的浓度及时间依赖性.
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艾烟冷凝物对肺泡Ⅱ型上皮细胞A549形态及活性的影响
目的 观察艾烟冷凝物对肺泡Ⅱ型上皮细胞A549形态及活性的影响.方法 体外培养A549细胞,加入不同浓度的艾烟冷凝物,刺激24 h后,应用荧光显微镜、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法来观察其对A549的细胞形态以及细胞活性的影响.结果 显微镜下观察发现艾烟冷凝物在0.05 g/L时细胞形态基本无变化,在高于0.05 g/L时细胞形态逐渐改变、细胞数量逐渐下降,具有明显的浓度依赖性.MTT法结果显示与对照组相比,A549的细胞活性在0.09 g/L浓度时P=0.985,无统计学差异;在0.06,0.12 g/L浓度时统计结果分别为P=0.036和0.013,有明显差异,但差异不大;在高于0.12 g/L时,P值均小于0.01,具有极显著性差异,细胞活性呈逐渐下降趋势,具有浓度依赖性.结论 在24 h刺激时间内,低浓度的艾烟冷凝物有可能对A549细胞无影响,高浓度的艾烟冷凝物对细胞有一定毒性作用,这种毒性作用具有明显的浓度依赖性.
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海马神经细胞的无血清原代培养方法
海马细胞的原代培养方法文献报道不一,但总体可以分为有血清培养和无血清培养2种,有血清培养血清可以提供细胞生长所必需的营养成分,可以促进细胞的增生和DNA的合成,但由于血清成分复杂,对于要求较高的实验研究结果影响较大.无血清培养步骤简便,培养的细胞活性及生理特性保持良好,具有较大的优越性.
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围手术期输血对肺癌病人免疫功能及预后的影响
输血是外科临床普遍采用的治疗方法，但直到70年代由输血而诱发的对受血者的免疫抑制反应才逐渐引起人们的普遍关注。20多年来，国内外学者在这方面进行了大量的研究，取得了一定的共识，认为输血可缩短癌症患者的术后生存期及使复发时间提前。本文就围手术期输血对肺癌患者免疫功能及预后的影响做一综述，以引起国内同道的注意。 一、输血对免疫系统的抑制作用 1973年，Opelz等发现输血能提高尸体肾移植患者的存活率，其机制可能与输血所导致的非特异性免疫功能抑制有关，主要包括：输血可抑制巨噬细胞对细菌和异物的清除能力，显著抑制淋巴细胞功能；输血后淋巴细胞减少，淋巴细胞对抗原或有丝分裂原反应受到抑制，外周血T淋巴细胞的辅助/抑制细胞比率下降；另外，杀伤细胞(NK细胞)活性降低及混合淋巴细胞反应性下降。同种异体血作为外源性组织相容性抗原可引起：异体反应克隆细胞的失活；诱导产生抑制细胞；诱导产生抗独特型抗体等。动物实验还发现，当输入异体血时，体内血栓素和前列腺素产生增加。前列腺素E2(PGE2)具有广泛的免疫抑制效应，通过抑制T辅助细胞活性，并增加T抑制细胞活性，从而抑制淋巴细胞转化和淋巴因子的产生，进而影响混和淋巴细胞反应和吞噬细胞功能［1～5］。进一步研究证明，输血能使脾细胞和T辅助细胞合成白细胞介素-2(IL-2)的能力降低，使高度依赖于IL-2的NK细胞活性降低［6］。Fischer等［7］检查了输血对肾移植前行透析疗法病人的细胞免疫功能的影响。监测指标为淋巴细胞对有丝分裂原和抗原的反应，以及混合淋巴细胞反应。输血后1周即发现明显的抑制作用，4周后恢复正常，再次输血后抑制作用更强且持续时间更长。提示反复输血对细胞免疫的抑制强于单次输血。
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调节性T细胞的研究进展及临床应用
人体调节性T细胞(Regulatory T cell,Treg)的主要作用为维持自身免疫耐受,调节机体对病原体和肿瘤的免疫应答,占正常人外周CD4+T细胞的5%～10%,广泛存在于淋巴器官及非淋巴器官中[1].调节性T细胞数量和功能的降低导致自身免疫耐受消失从而产生自身免疫病,相反,调节性T细胞活性的增加会抑制内源性抗肿瘤反应而导致恶性肿瘤的发生.
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射频能量对关节软骨细胞活性的实验研究
目的 研究射频能量对关节软骨细胞活性的影响效果,进而验证该方法临床可行性.方法 选取10对牛关节软骨中的5对作为射频能量的实验对象,每对两侧分为4个单元格,其中3个单元格作为研究组,分别对应SCULPTOR单极射频头、SAPHYRE双极射频头、TAC-CⅡ软骨温控头,处理的时间设定为1 min,剩余1个单元格作为对照组,不做射频处理.取剩下的5对牛关节软骨作为处理时间的实验对象,分别使用SAPHYRE双极射频头以5、10、20、30 s进行射频处理,其中4组作为研究组,剩余1组不作处理,作为对照组.观察研究组与对照组苏木精-伊红染色(简称HE染色)、荧光染色和GAG释出率测定数值的差异,分析其细胞活性和组织受损情况的差异.结果 SCULPTOR单极射频头组、SAPHYRE双极射频头组、TAC-CⅡ软骨温控头组的细胞HE染色、荧光染色的空泡率和死亡率均显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);第1天,SCULPTOR单极射频头组、SAPHYRE双极射频头组、TAC-CⅡ软骨温控头组的软组织GAG释出率显著低于对照组,第2、3天,SAPHYRE双极射频头组、TAC-CⅡ软骨温控头组的软组织GAG释出率显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);采用5、10、20、30 s时间处理组的细胞HE染色、荧光染色的空泡率和死亡率均显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);第1、2、3天,采用5、10、20、30 s时间处理组的软组织GAG释出率均显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 射频能量和处理时间的增加都会导致关节软组织受损,且与增加数值成正相关,因此需要适当降低射频能量和处理时间,避免治疗时对患者形成组织损伤.
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子宫肌瘤的病因学研究进展
子宫肌瘤在生育期妇女发病率约为25%.尽管多年来许多学者对子宫肌瘤的病因进行了研究,但是确切地发病因素至今尚不明了.有人认为子宫肌瘤的发病与饮食有关;也有报道子宫肌瘤病人存在NK细胞活性低下;近Vanni[1]研究发现7号染色体长臂的缺失与细胞的发生密切相关;Rein[2]则认为体细胞突变是肿瘤发生的起因.近年来许多学者对子宫肌瘤的细胞遗传学异常和肌瘤发生发展的抑制及促进因素进行了探讨,阐明了肌瘤的部分病因学特征,本文就子宫肌瘤病因学研究进展作一介绍.
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HLA-E、HLA-F及HLA-G与母胎免疫耐受研究进展
母胎免疫耐受现象是一个多系统、多因素的母胎界面免疫活化和抑制的平衡过程,其中以胎儿滋养层细胞HLA Ⅰ类分子表达及子宫NK细胞活性的调节引人注目.早在1953年,Billingham等[1]就已提出"母胎免疫耐受"维持机制假说,认为子宫内形成一个对胎儿有利的免疫豁免环境是妊娠成功的关键.且Thellin等[2]提出了维持胎儿发育的10个方面,其中母胎界面表达HLA Ⅰ类分子的表达在维持母胎免疫耐受的过程中起到至关重要的作用.
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程序降温羟乙基淀粉冷冻保存自体造血干细胞移植治疗恶性血液病
1.目的:6%羟乙基淀粉(HES)、4%白蛋白和5%二甲亚砜(DMSO)构成的保护剂的毒性较单纯的10%DMSO冷冻保护剂低,但前者用于造血干细胞非程序降温-80℃冰箱冷冻保存.该课题旨在将含羟乙基淀粉的低浓度DMSO冷冻保护剂用于程序降温冷冻保存,探讨冷冻保护剂对造血干细胞活性的影响,改进冷冻保护剂的临床应用.
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MiR-30c-2-3p对足细胞活力及Nephrin和Podocin蛋白表达的影响
目的 探讨MiR-30c-2-3p对足细胞活力及Nephrin和Podocin蛋白的表达影响.方法 采用嘌呤霉素(PAN)诱导的足细胞体外模型,将足细胞分成4组,即空白组、PAN组、阴性质粒+PAN组、阳性质粒+PAN组.通过LipofectamineTM 2000瞬时转染MiR-30c-2-3p mimic.通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞活力、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中MiR-30c-2-3p表达、Western blot检测Nephrin和Podocin蛋白的表达.结果 ①CCK-8结果提示PAN组足细胞活力明显低于空白组,差异有高度统计学意义(P＜0.01),阴性质粒+PAN组较PAN组差异无统计学意义(P＞0.05),阳性质粒+PAN组足细胞活力与PAN组和阴性质粒+PAN组相比均有所提高,差异有统计学意义(P＜ 0.05或P＜0.01).②qRT-PCR显示PAN组MiR-30c-2-3p的表达较空白组明显下降,差异有高度统计学意义(P＜0.01);阴性质粒+PAN组较PAN组表达差异无统计学意义(P＞0.05),而阳性质粒+PAN组MiR-30c-2-3p的表达较PAN组和阴性质粒+PAN组均提高,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).③Western blot提示PAN组Nephrin和Podocin蛋白的表达较空白组明显下降,差异有高度统计学意义(P＜0.01);与PAN组相比,阴性质粒+PAN组两者蛋白的表达差异无统计学意义(P＞0.05),而阳性质粒+PAN组Nephrin和Podocin蛋白的表达较单纯PAN组和阴性质粒+PAN组均增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PAN对足细胞的活力,MiR-30c-2-3p含量及Nephrin和Podocin蛋白的表达有抑制作用,而通过外源性增加MiR-30c-2-3p表达后可提高足细胞的活力,同时可增加Nephrin和Podocin蛋白的表达.
