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MiR-30c-2-3p对足细胞活力及Nephrin和Podocin蛋白表达的影响
目的 探讨MiR-30c-2-3p对足细胞活力及Nephrin和Podocin蛋白的表达影响.方法 采用嘌呤霉素(PAN)诱导的足细胞体外模型,将足细胞分成4组,即空白组、PAN组、阴性质粒+PAN组、阳性质粒+PAN组.通过LipofectamineTM 2000瞬时转染MiR-30c-2-3p mimic.通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞活力、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中MiR-30c-2-3p表达、Western blot检测Nephrin和Podocin蛋白的表达.结果 ①CCK-8结果提示PAN组足细胞活力明显低于空白组,差异有高度统计学意义(P＜0.01),阴性质粒+PAN组较PAN组差异无统计学意义(P＞0.05),阳性质粒+PAN组足细胞活力与PAN组和阴性质粒+PAN组相比均有所提高,差异有统计学意义(P＜ 0.05或P＜0.01).②qRT-PCR显示PAN组MiR-30c-2-3p的表达较空白组明显下降,差异有高度统计学意义(P＜0.01);阴性质粒+PAN组较PAN组表达差异无统计学意义(P＞0.05),而阳性质粒+PAN组MiR-30c-2-3p的表达较PAN组和阴性质粒+PAN组均提高,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).③Western blot提示PAN组Nephrin和Podocin蛋白的表达较空白组明显下降,差异有高度统计学意义(P＜0.01);与PAN组相比,阴性质粒+PAN组两者蛋白的表达差异无统计学意义(P＞0.05),而阳性质粒+PAN组Nephrin和Podocin蛋白的表达较单纯PAN组和阴性质粒+PAN组均增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PAN对足细胞的活力,MiR-30c-2-3p含量及Nephrin和Podocin蛋白的表达有抑制作用,而通过外源性增加MiR-30c-2-3p表达后可提高足细胞的活力,同时可增加Nephrin和Podocin蛋白的表达.
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MiR-30c-2-3p对足细胞Nephrin、 Podocin保护作用及雷公藤甲素干预作用研究
目的:探讨miR-30c-2-3p对小鼠足细胞Nephrin、Podocin保护作用及雷公藤甲素(TP)干预作用.方法:采用嘌呤霉素(PAN)致小鼠足细胞损伤的体外模型,将足细胞分成5组:空白组、转染阴性质粒组(阴性质粒组)、转染阴性质粒+ PAN组(阴性质粒+PAN组)、转染miR-30c-2-3p+ PAN组(阳性质粒+PAN组)、转染miR-30c-2-3p+ PAN+TP组(阳性质粒+PAN+ TP组).瞬时转染miR-30c-2-3p mimics,质粒终浓度均为50 nmol/L,转染6h后进行药物干预,PAN干预浓度均为45 mg/L,TP干预浓度均为1 ng/ml,药物干预时间均为48 h.CCK-8法检测足细胞活力;实时荧光定量PCR检测细胞中miR-30c-2-3p表达;Western Blot检测足细胞Nephrin、Podocin蛋白表达.结果:(1)阴性质粒+PAN组足细胞活力明显低于空白组及阴性质粒组(P＜0.01),阳性质粒+ PAN组较阴性质粒+PAN组足细胞活力提高(P＜0.05),使用TP干预后其活力进一步提高(P＜0.05).(2)与空白组、阴性质粒组比较,阴性质粒+PAN组miR-30c-2-3p表达减少,差异有统计学意义(P＜0.01);与阴性质粒+PAN组相比,阳性质粒+PAN组、阳性质粒+PAN +TP组miR-30c-2-3p表达均增加(P＜0.05);但与阳性质粒+PAN组相比,雷公藤甲素干预组未见统计学意义(P＞0.05).(3)与空白组及阴性质粒组比较,阴性质粒+ PAN组Nephrin、Podocin两者表达均减少,差异有统计学意义(P＜0.01);与阴性质粒+PAN组相比,阳性质粒+ PAN组Nephrin、Podocin蛋白表达增加(P＜0.05);在使用了TP干预后两者表达进一步增加(P＜0.05).结论:PAN能降低足细胞活力,降低miR-30c-2-3p表达,而增加其表达可以上调足细胞活力以及Nephrin、Podocin的表达.TP可以减轻PAN诱导的足细胞损伤以及Nephrin、Podocin的表达下降,但其作用机制似乎与miR-30c-2-3p无关.
