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Toll样受体4基因多态性和内毒素在哮喘发病中的交互作用
哮喘是以树突细胞(DC)介导的Ⅱ型辅助性T细胞(Th2)优势免疫为特征的慢性气道炎症性疾病[1].全球哮喘和变应性疾病的发病率逐年增高,而发达国家尤为突出.该现象部分归咎于卫生假说,即环境愈干净则生命早期的细菌内毒素的主要活性成分脂多糖(LPS)环境暴露就愈少,而LPS可以驱动宿主免疫应答由Th2向Th1型发生免疫偏移[2].然而,不同个体对环境暴露的反应存在易感性,目前认为这种易感性取决于个体的遗传因素.作为识别LPS的主要受体,Toll样受体4(TLR4)介导天然免疫并连接获得性免疫,与变应性哮喘密切相关[3].本文就TLR4跨膜信号转导、Th2优势免疫以及TLR4基因多态性-免疫-环境交互作用与哮喘发病的关系进行简要综述.
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内毒素对血管内皮细胞损伤作用的研究进展
内毒素(LPS)是革兰氏阴性杆菌的主要致病因子,目前研究多、为明确的相关疾病是脓毒症和感染性休克.尽管不断有新抗菌药物的成功研制和日益健全的医疗保健体系,但是革兰氏阴性杆菌性脓毒症仍然是一种严重威胁人类生命的疾病.
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1,25(OH)_2D_3缺乏对小鼠脂多糖诱导的应激反应的影响
自发现一些免疫细胞上存在维生素D受体(vitamin D receptor,VDR),维生素D(VD)对免疫调节的研究成为热点~([1]).巨噬细胞是一类重要的免疫细胞,受刺激后可产生炎性细胞因子,如肿瘤坏死因子(tumor necrosiS factor-alpha,TNF-α)、一氧化氮(nitric oxide,NO)等~([2]).脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是革兰阴性细菌细胞壁外膜上的主要结构成分,是其主要的致病因子,可刺激内皮细胞、巨噬细胞、成纤维细胞产生大量的炎性细胞因子(TNF-α、NO、IL-6等)~([3]).
关键词： 1 25(OH)_2D_3 1α羟化酶基因敲除小鼠 LPS NO TNF-α -
清解活血灵体外对巨噬细胞产生TNFα的影响
[目的]观察清解活血灵对体外培养的腹腔巨噬细胞(MФ)分泌肿瘤坏死因子α(TNFα)的影响.[方法]用预先确定的浓度的细菌脂多糖(LPS)刺激腹腔巨噬细胞分泌TNFα,然后加入中药清解活血灵观察其对TNFα产生的影响,TNFα活性用四甲基偶氮唑(MTT)法检测.[结果]不同浓度的中药清解活血灵对LPS刺激MФ分泌TNFα有明显得抑制作用,在给药后不同时间点,与单纯LPS组相比中药组TNFα活性明显下降(P＜0.05),[结论]中药清解活血灵能有效抑制LPS刺激MФ对TNFα的分泌.
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保存全血中泛素对人外周血单个核细胞分泌细胞因子的影响
同种异体输血产生的免疫调节不良作用,称为输血相关免疫调节(Transfusion-Related Immunomodulation,TRIM)[1].我们通过体外观察保存全血血浆中泛素对LPS刺激的人外周血单个核细胞(PBMNC)分泌细胞因子的影响,探讨其在TRIM中的作用.
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Toll样受体4的研究进展
天然免疫(innate immunity)是生物体在漫长的生物进化过程中获得的具有普遍性的防御机制,是宿主的第一道防线,在获得性免疫(adaptive immunity)系统被活化前发挥抗感染作用.
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CCK-8对LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞p38 MAPK、STAT3表达及TNF-α活性的影响
目的 本实验在细胞水平,观察了八肽胆囊收缩素(CCK-8)及其受体非特异性抑制剂丙谷胺(proglumide,Pro)对LPS引起的大鼠肺泡巨噬细胞(AM)分泌TNF-α的影响,并进一步观察了p38 MAPK和STAT3的表达.方法 分离正常大鼠肺泡巨噬细胞,调节细胞浓度为1×106/ml,分组如下:①对照组;②LPS组:LPS终浓度5 μg/ml;③CCK-8+LPS组:CCK-8终浓度10-10 mol/L、10-8 mol/L或10-6 mol/L,LPS 剂量同前;④CCK-8组:10-10 、10-8 和10-6 mol/L;⑤Pro+LPS+CCK-8组:2 μg/ml丙谷胺,10 min后加入5 μg/ml LPS及10-8 mol/L CCK-8.收集刺激4 h的细胞培养上清,应用L929细胞株进行TNF-α活性的生物学检测.刺激30 min后,采用免疫细胞化学法观察p38 MAPK和STAT3表达的变化.结果 与对照组(6.76±1.39) pg/ml相比,LPS组TNF-α活性显著增加(1091.14±67.35) pg/ml(P＜0.01).10-10 mol/L、10-8 mol/L和10-6 mol/L的CCK-8均显著抑制LPS诱导的AM释放TNF-α,且呈剂量依赖性,依次为(970.67±111.53) pg/ml、(583.48±62.03) pg/ml和(484.24±72.01) pg/ml(P均＜0.01).CCK-8本身不影响TNF-α产生.CCK受体非特异性拮抗剂丙谷胺可逆转CCK-8的抑制作用.免疫细胞化学结果显示CCK-8可增强LPS引起的AM中磷酸化的p38 MAPK和STAT3的表达.结论 p38 MAPK为多种信号转导途径的交汇点.CCK-8可能通过激活p38 MAPK途径及激活STAT3来调节AM的功能.
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中药黄芩苷对脂多糖刺激人牙周膜成纤维细胞分泌肿瘤坏死因子-α的影响
目的 研究中药黄芩苷对脂多糖(LPS)刺激人牙周膜成纤维细胞(HPLFs)分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法 采用原代培养HPLFs技术和酶联免疫检测方法(ELISA),检测培养上清液中TNF-α的水平.结果 0.001～10μg/ml黄芩苷和2μg/ml地塞米松均可显著抑制LPS刺激 HPLFs分泌TNF-α的活性(P＜0.01),而不同浓度组之间比较,抑制作用无显著性差异(P＞0.05).结论 黄芩苷对LPS刺激 HPLFs合成和分泌TNF-α有显著抑制作用,与地塞米松抗炎效果相近,作用机制与抑制TNF-α等炎性细胞因子过度产生有关,揭示了黄芩苷可能的抗炎作用机制.
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肿瘤坏死因子α与牙周炎的关系
细胞因子在牙周炎的发生、发展过程中扮演着重要的角色,作为细胞因子网络中的关键成员,肿瘤坏死因子α(tumor necriosis factor-α,TNF-α)在体内具有广泛的生物学作用.
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牛磺酸、镁离子及其联合用药对脂多糖诱导小鼠肝损伤的保护作用及机制
目的:研究牛磺酸、镁离子及其联合用药对脂多糖(LPS)诱导小鼠肝损伤的保护作用,并从氧化应激和炎性反应两方面探讨其机制.方法:腹腔注射LPS诱导小鼠肝损伤模型,假手术组注射同等剂量生理盐水;实验组分别接受牛磺酸(Tau)、镁离子(Mg)和两者联合用药治疗[实验分组如下:(1)sham组;(2)LPS组;(3)LPS+Tau组;(4)LPS+Mg组;(5)LPS+Tau+Mg组];用试剂盒检测血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力;用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测肝组织匀浆液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)含量;用苏木精—伊红(HE)染色法观察肝组织形态,并计算肝系数.结果:LPS引起小鼠血清中AST、ALT含量上升,同时肝细胞结构破坏,肝系数增加肝功能受损;牛磺酸、镁离子和联合用药可改善肝功能和肝组织结构,联合用药效果更佳.LPS引起血清中SOD活力下降、GSH含量下降、MDA含量上升,氧化应激指标增加;牛磺酸、镁离子和联合用药明显抑制氧化应激反应,且联合用药效果优于单独给药;LPS引起肝组织炎性因子IL-1β表达增加,牛磺酸、镁离子和联合用药明显降低IL-1β,抑制炎性因子表达.结论:牛磺酸、镁离子和联合用药通过抑制氧化应激和炎性反应治疗LPS引起的肝损伤,联合用药效果优于单独给药.
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LPS诱导的炎症反应对脑动脉瘤形成和破裂引起出血的影响
目的:研究LPS诱导的炎症反应对脑动脉瘤形成和破裂引起出血的作用.方法:通过肾性高血压大鼠脑动脉瘤模型法建立大鼠动脉瘤模型进行如下处理:正常大鼠:A组注射生理盐水;B组注射LPS;大鼠动脉瘤模型鼠:C组注射生理盐水;D注射LPS.RT-PCR的方法检测动脉炎症因子NF-κB、MCP-1、IL1、IL6、TNF-α的表达水平.组织化学的方法检测SMA染色检测动脉壁的厚度,Ig染色检测动脉瘤破裂后出血面积.结果:LPS诱导动脉组织中炎症因子NF-κB、MCP-1、IL1、IL6、TNF-α的表达水平明显增加.LPS能够导致动脉瘤破裂的增多,出血量增加.通过A组和B组比较LPS本身虽然能够明显诱导炎症反应但并没有明显的影响脑动脉瘤形成和破裂引起出血.结论:LPS诱导的炎症反应,炎症细胞的血管浸润进一步加剧脑动脉瘤形成和破裂引起的出血.
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Beclin-1在LPS/GalN诱导的肝损伤中的表达及意义
目的:探讨LPS/GalN诱导的肝损伤中Beclin-1的表达情况及意义.方法:雄性昆明种小鼠随机分为正常对照组和肝损伤模型组,肝损伤模型组又分为1h,3h,6h组；采用LPS+GalN腹腔注射制作肝损伤小鼠模型,分别于注药后1h,3h,6h取材.定量比较血清肝功能指标的变化；通过Western blot法检测小鼠肝中Beclin-1蛋白的表达情况.结果:1h,3h组与正常组ALT活性差异无统计学意义(P＞0.05),6h组ALT活性明显高于正常组(P＜0.001)；Beelin-1在3h组表达强(P＜0.05),6h组表达较3h组减弱(P＜0.05).结论:Beelin-1在损伤肝表达由弱转强,但在严重肝功能障碍时表达少.自噬现象在肝损伤的发生发展中起一定的保护作用,晚期下调可能参与肝功能衰竭的发生.
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免疫源性IgAN大鼠模型的建立与评价
目的:免疫原牛血清白蛋白(bovineserumalbumin,BSA)免疫诱导IgA肾病大鼠模型是国内常用模型,本实验对以往的制作方法加以改良,观察模型效果.方法:雄性SD大鼠20只,质量180～200 g,按随机数字表随机分为正常组、模型组.模型组造模方法:BSA,600 mg/kg,隔天1次灌胃,皮下注射蓖麻油0.3 ml+CCL40.10 ml,每周1次持续8周,第6周、第8周脂多糖(lypopolysaccharide,LPS)0.05 mg尾静脉注射.对照组用注射用水等剂量刺激.第8周末大鼠,留取血、尿、肾组织标本检测.观察大鼠一般情况、蛋白尿、血尿以及肾组织病理.结果:型组与正常组相比,大鼠24 h尿蛋白定量、尿红细胞计数明显增多(P<0.01),病理形态学改变明显,肾组织IgA免疫荧光染色增强,荧光阳性面积和平均光密度值升高(P<0.01).结论:运用改良的造模方法BSA+LPS+CCl4建立IgA肾病模型效果良好,病理、临床指标均与人类IgA肾病较为相似.
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LPS诱导RAW264.7细胞内HMGB1转位及释放实验研究
目的:观察LPS诱导RAW264.7细胞内HMGBl转位及其释放.方法:用不同浓度的LPS处理小鼠RAW264.7细胞20 h,用荧光显微镜观察LPS诱导RAW264.7细胞HMGB1的分布情况.用West-ern blot方法检测HMGB1在胞核及培养上清中的水平.结果:LPS处理小鼠RAW264.7细胞20 h后,培养上清中的HMGB1水平明显增加,胞核HMGBl含量减少,并存在剂量依赖关系.结论:LPS能诱导RAW264.7细胞释放HMGB1,存在剂量依赖关系.
关键词： LPS RAW264.7细胞 HMGB1转位和释放 -
重组HMGB1A-box蛋白对HMGB1抗炎作用的观察
目的:观察重组HMGB1 A-box蛋白对HMGB1的特异性拮抗作用.方法:复苏的RAW264.7细胞培养至对数生长期,用于以下实验:实验分为六组,rHMGB1组:加500 ng/mLrHMGB1；LPS组:加100 ng/mL LPS;A-box干预1组:加500 ng/mL rHMGB1和100 ng/mL A-box;A-box干预2组:加500 ng/mL rHMGB1和200 ng/mL A-box；A-box干预3组:加500 ng/mLrHMGB1和500 ng/mL A-box；A-box干预4组；加100 ng/mL LPS和500 ng/mL A-box.培养6h后,收集上清液,待测.各组上清液采用ELISA盒检测TNF-α的含量.结果:200 ng/mL、500 ng/mL重组A-box蛋白能明显抑制HMGB1诱导培养细胞释放TNF-α的水平(P＜0.05),但对LPS的无明显作用.结论:rHMGB1 A-box蛋白可能有特异性拮抗HMGB1的致炎作用.
关键词： rHMGB1 A-box蛋白 HMGB1 LPS TNF-α -
LPS等丝裂原所致THP-1细胞活化增殖的优化因素
目的 探讨LPS等丝裂原所致THP-1细胞增殖分化的优化因素.方法 利用MTT法及改良WST-8法测定,THP-1细胞的增殖情况,并对THP-1细胞生长特性及其曲线进行测定,同时测定成熟THP-1细胞的吞噬功能.由此探讨LPS、PHA、ConA对PMA诱导成熟的THP-1细胞活化增殖的佳浓度及作用时间曲线.结果 WST-8法测定THP-1细胞增殖活性优于MTT法,比较敏感;THP-1细胞增殖测定表明LPS比PHA、ConA效果好;LPS浓度在1μg/ml、作用24 h可充分诱导活化巨噬细胞,同时巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力.结论 LPS可使巨噬细胞活化增殖,并且吞噬功能明显增强.
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降钙素原检测的临床应用
降钙素原(procalcitonin,PCT)对全身细菌感染的诊断、鉴别诊断、治疗效果及预后的判断,比C反应蛋白(CRP)、各种炎症反应因子[细菌内毒素(LPS),肿瘤坏死因子(TNF)-α.
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CD14的生物学特性及其与酒精性肝炎的关系
CD14是一种单核细胞,巨噬细胞,多形核中性粒细胞表面上的糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白,是脂多糖(LPS)在细胞膜上的一种受体[1],属于细胞表面糖蛋白家族成员之一.在机体免疫、防御系统引起的一系列反应中介导细胞识别LPS并引起细胞酪氨酸磷酸化、核因子(NF-κB)转位、触发细胞因子释放和氧自由基产生.在酒精性肝炎的发病过程中,产生的肠源性内毒素(LPS)与血浆中的脂多糖结合蛋白(LBP)两者的复合物,同肝脏Kuppfer细胞细胞膜上的mCD14结合,进入细胞内介导一系列炎症反应,终导致肝炎的发生,因而对于CD14结构、功能及其与酒精性肝炎关系的研究有着重要的临床意义.
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LPS炎性刺激对SAF基因编码区外显子e4B保留和剪切的影响
目的 探讨LPS刺激对血清淀粉样蛋白A转录激活因子 (SAF) 外显子e4B保留和剪切的影响.方法 LPS刺激不同时间THP-1细胞和去除刺激后放线菌素D处理THP-1细胞的cDNA作模板进行半定量和定量聚合酶链式反应.结果 LPS刺激2h SAF基因外显子e4B保留的转录子表达下降、e4B剪切的转录子表达增高, 延长刺激至24h, 二者的表达呈下降趋势.LPS刺激12h和24h后去除刺激给予放线菌素D初始, 上述转录子表达增高;延长放线菌素D作用至2h, 二者表达下降.结论 延长LPS刺激SAF基因外显子e4B保留和剪切的转录子表达下降可能和RNA降解有关.
关键词： 血清淀粉样蛋白A转录激活因子 外显子e4B RNA降解 LPS THP-1细胞 -
丁酸钠诱导人单核细胞源性未成熟树突状细胞的形态及免疫功能变化
背景:未成熟树突状细胞(dendritic cells,DC)可以诱导免疫耐受形成,在器官移植领域具有广阔应用前景.目前采用的诱导未成熟树突状细胞的方法仍存在一些不足,寻求新的诱导方法十分必要.目的:观察丁酸钠对人外周血来源的树突状细胞的成熟状态和免疫学功能的影响.设计:观察对比,体外细胞学实验.单位:中山大学附属第二医院肝胆外科.材料:人外周血样品取自中山大学身体健康的大学生志愿捐献者(年龄20～23岁),共5份,每份100 mL,均在献血后2 h内进行外周血单个核细胞和淋巴细胞分离.方法:实验于2006-09/2007-03在中山大学附属第二医院医学研究中心完成.①人外周血单个核细胞采用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素4诱导成为未成熟树突状细胞.②诱导6 d后,加入组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠1 mmol/L诱导,以促成熟因子脂多糖1 mg/L为对照;设不加促成熟因子为空白对照组.③在诱导0 d时加入丁酸钠,6 d时加入脂多糖再次刺激.主要观察指标:动态观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测DC表型,FITC标记的Dextran检测DC内吞能力,采用酶联免疫吸附法检测白细胞介素12分泌,混合淋巴细胞反应检测DC刺激淋巴细胞增殖能力.结果:①DC形态:在丁酸钠作用下,DC聚集现象明显减少.②细胞表型检测结果:丁酸钠促成熟组常规方法诱导的未成熟DC的CD80,CD83,HLA-DR表达均低于脂多糖组,差异有显著性意义(P＜0.01).采用丁酸钠法诱导的未成熟DC,在第6天时加入促成熟因子脂多糖后CD80,CD83,HLA-DR表达仍处于低水平.③DC内吞能力:常规方法诱导的未成熟DC,用LPS诱导成熟后,其内吞能力均低于空白对照组和丁酸钠促成熟组,差异有非常显著性意义(P＜0.01);而采用丁酸钠法诱导的DC,其内吞能力强,高于其他各组,差异有非常显著性意义(P＜0.01).④DC分泌白细胞介素12:常规诱导法用LPS诱导DC成熟后的白细胞介素12分泌水平高于对照组、丁酸钠促成熟组及丁酸钠诱导法,差异有非常显著性意义(P＜0.01).⑤DC诱导的MLR:常规诱导法用LPS诱导的成熟DC刺激淋巴细胞的增殖能力显著高于对照组、丁酸钠促成熟组及丁酸钠诱导法,差异有非常显著性意义(P＜0.01).结论:丁酸钠可以抑制DC成熟,稳定诱导未成熟DC生成,该DC不能被促成熟因子激活,在诱导移植免疫耐受方面具有潜在应用前景.
