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吡格列酮对脂多糖所致大鼠学习记忆障碍的改善作用及其机制
目的 研究吡格列酮(Pioglitazone,Pio)对脂多糖引起的大鼠学习记忆障碍和海马CA1区锥体神经元损伤的保护作用.方法 大鼠灌胃给予Pio(40、80 mg/kg)3周,脑室内注射LPS(5、30 μg),2 d后进行Morris水速宫定位航行实验,连续训练5 d,第6天进行空间探索实验.行为学实验后,取脑组织,制成石蜡切片,进行尼氏(Nissl)染色和胶质纤维酸蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫组织化学染色,研究海马CA1区锥体神经元形态学改变和星型胶质细胞的活化浸润情况.结果 脑内注射LPS可以引起大鼠学习和记忆障碍,表现为大鼠逃避潜伏期较对照组明显延长,大鼠在平台所在象限游泳距离百分比明显较对照组低,这些行为学改变伴随海马CA1区星型胶质细胞和锥体神经元的损伤.治疗组LPS所致的学习记忆损伤减轻,Pio能明显减轻海马CA1区锥体神经元的损伤和星型胶质细胞的浸润.结论 吡格列酮能对抗LPS引起的锥体神经元的损伤和星型胶质细胞的活化浸润,从而改善大鼠的学习记忆能力.
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LPS对PC12细胞NF-κB的激活时程
[目的]了解脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对PC12细胞中核转录因子(NF-κB)激活过程.[方法] 采用LPS(200 ng/mL)刺激培养的PC12细胞0.5～4 h后,以免疫细胞化学染色和Western blot方法检测不同时间点NF-κB的激活和表达水平.[结果] LPS刺激PC12细胞0.5 h后,NF-κB开始激活表达,1 h时NF-κB激活表达水平增加,2 h时NF-κB激活表达水平达到高峰,4 h时NF-κB激活表达水平有所降低,LPS各组与正常对照组比较差异有显著性意义(P<0.01).[结论] LPS可诱导培养的PC12细胞中NF-κB一过性激活高表达.
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参芪扶正注射液对慢性肾衰患者ADM、BNP和LPS影响研究
目的:探讨参芪扶正注射液对慢性肾衰患者ADM、BNP和LPS的影响.方法:收集我院收治的慢性肾衰竭患者60例,根据用药不同分为对照组和实验组,每组各30例,对照组患者予以常规治疗,实验组患者在对照组的基础上予以参芪扶正注射液.治疗结束后,对所有患者的外周血ADM、BNP、TGF-β1和LPS水平进行检测并比较.结果:①与对照组相比实验组患者ADM水平下降较为显著(P＜0.05);②与对照组相比实验组患者BNP水平下降较为显著(P＜0.05);③与对照组相比实验组患者TGF-β1水平下降较为显著(P＜0.05);④与对照组相比实验组患者LPS水平下降较为显著(P＜0.05).结论:参芪扶正注射液能显著降低慢性肾衰患者血清ADM、BNP、TGF-β1和LPS水平,对临床有指导意义.
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秦皮素抑制NF-κB/COX-2信号通路改善PC12细胞损伤
目的 研究秦皮素(fraxetin)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致大鼠嗜铬细胞瘤细胞株(PC12细胞)损伤的作用并考察炎症反应中相关蛋白的变化.方法 采用MTT法研究秦皮素对PC12细胞活力的作用,筛选合适给药浓度.试验共分为3组即对照组(Control组)、LPS模型组和秦皮素保护组(fraxetin+ LPS组).采用四甲基偶氮唑盐比色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞活性变化;采用倒置显微镜和4',6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI)荧光核染色法观察细胞形态学变化;采用real-time PCR法检测细胞因子IL-1、IL-6、TNF-α及环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)mRNA水平;采用western blot法检测COX-2和NF-κB-p65蛋白表达水平.结果 与模型组比较秦皮素保护组细胞存活率显著升高(P＜0.01).LPS模型组炎症因子IL-1、IL-6和TNF-α mRNA水平,NF-κB-p65和COX-2蛋白表达水平相对于对照组均明显升高(P＜0.01).与此同时秦皮素治疗组其炎症细胞因子mRNA水平,NF-κB和COX-2蛋白的表达水平均显著下调.结论 秦皮素对LPS所致PC12细胞损伤有保护作用,其效应可能与抑制NF-κB/COX-2信号通路,降低炎症反应有关.
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Annexin V-FITC/PI法检测脂多糖诱导滋养细胞的凋亡
目的:通过流式细胞术测定法检测脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对滋养细胞凋亡的影响,明确LPS与滋养细胞凋亡的关系,为预防和治疗由滋养细胞凋亡导致的病理妊娠提供新的思路.方法:利用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测不同浓度的LPS处理培养的JEG-3细胞系滋养细胞的凋亡率分析.结果:流式细胞检测结果显示LPS组凋亡指数分别为(2.05±0.33)%、(7.43±0.68)%、(13.43±0.90)%显著高于对照组(0.80±0.15)%,且P均＜0.01.结论:Annexin V-FITC/PI法能特异地、准确地检出早期凋亡的细胞、继发性坏死的细胞;LPS能够诱导滋养细胞过度凋亡,且凋亡率随着LPS浓度的增加而增加.
关键词： LPS 凋亡 流式细胞术 Annexin V-FITC/PI -
LPS介导的树突状细胞成熟过程中的表型变化
目的:探讨树突状细胞成熟过程中,DC表面MHC 分子和共刺激分子的表达变化及MHC Ⅱ的胞内分布变化.方法:制备小鼠骨髓来源的树突状细胞,LPS分别刺激0、3、6、12和24小时,荧光抗体标记后,用流式细胞仪检测MHCⅠ、MHC Ⅱ分子和CD86、CD80、CD40等共刺激分子在细胞表面的表达,同时以激光共聚焦显微镜观察MHC Ⅱ的胞内分布变化.结果:在LPS刺激后,DC细胞表面的不同表型分子,其表达水平随时间延长有不同的上升趋势.同时在未成熟DC中,MHC Ⅱ主要集中在细胞核附近,LPS刺激后,MHC Ⅱ朝细胞外围扩散,到刺激12小时,有较多的MHC Ⅱ出现在细胞表面.结论:LPS介导的树突状细胞成熟过程中的表型分子有不同的变化趋势.
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痢疾菌的毒力相关抗原及其表型的分析
目的:分析研究该室保存或构建的各类痢疾菌毒株、减毒突变株、菌苗株的毒力及其生物表型的相互关系,探讨与致病有关的成分,为改进现有菌苗和构建新型菌苗提供参考依据.方法:采用刚果红结合试验、接触性溶血试验、HeLa细胞入侵试验及豚鼠角结合膜炎试验,对不同痢疾菌的毒力表型进行检测,并对大质粒及其侵袭相关的基因(4 . 1 kb)进行遗传背景分析.用BA-immunoblot法,对痢疾杆菌和侵袭性大肠杆菌等进行毒力相关抗原的分析.结果:有侵袭毒力的痢疾菌株均与刚果红染料结合、有接触性溶血活性 ,可侵入HeLa细胞,豚鼠角结合膜试验阳性,并都含有大质粒(120～140 MD),与4.1 kb侵袭探针杂交也均呈阳性反应;而无毒力的痢疾菌株上述生物表型均为阴性.有毒痢疾菌和侵袭性大肠杆菌均表达4种主要毒力相关抗原Ipa(A,B,C,D),而无毒株不表达这些抗原 .痢疾菌的毒力不仅与Ipa有关,而且还与LPS抗原有关.结论:细菌的毒力与生物表型密切相关.并且Ipa与LPS这两类抗原均表达时细菌才有毒力.
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内毒素休克猕猴白细胞介素18mRNA变化规律的研究
目的:研究猕猴实验性内毒素休克过程中,白细胞介素18(IL-18)在外周血单个核细胞(PBMC)、肝脏及脾脏中mRNA表达水平的变化规律.方法:静脉注射细菌内毒素(LPS)2.8mg/kg制成内毒素休克模型,利用源自人细胞因子基因序列的引物,建立荧光半定量reverse transcription(RT)-PCR方法,检测PBMCs、肝脏及脾脏中IL-18mRNA表达水平的改变,并与TNF-α、IL-1β相对照.结果:LPS注射后120分钟PBMC中IL-18的表达有显著增加,此时肝脏及脾脏中的mRNA表达水平也有增高;TNF-α在PBMCs中mRNA水平于LPS注射后60分钟即出现峰值,120分钟时肝脏和脾脏中的表达均显著增高;IL-1β在PBMCs中mRNA表达峰值出现在60分钟,但120分钟时在肝脏和脾脏中mRNA表达水平增高不明显.结论:在猕猴实验性内毒素休克过程中IL-18的表达显著增高,但峰值晚于TNF-α、IL-1β.IL-18可以由PBMCs和肝脏枯否细胞产生(也许还有脾脏巨噬细胞);TNF-α可能有广泛的细胞来源;IL-1β主要由PBMCs在LPS刺激活化后产生并分泌至血浆.
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沙棘多糖提取物对 LPS／D-GalN诱导的小鼠肝损伤的保护作用及其对TLR4，SOCS3表达的调控
目的：研究沙棘多糖提取物对LPS联合D-GalN诱导的肝损伤的保护作用以及对肝脏TLR4，SOCS3蛋白表达的调控。方法：将C57BL／6系雄性小鼠随机分为6组，即空白对照组、模型组、地塞米松阳性对照组、沙棘多糖低、中、高剂量组；沙棘多糖低、中、高剂量组分别以50、100和200 mg／kg沙棘多糖溶液连续灌胃14 d。通过腹腔注射LPS（10μg／kg）和D-GalN（700 mg／kg）建立急性肝损伤模型，阳性药物组在建模前腹腔注射地塞米松（10 mg／kg）。建模4 h后采集血清和肝脏组织，检测血清ALT和AST水平，HE染色观察沙棘多糖提取物对肝损伤的影响。 Western blot检测TLR4，SOCS3的表达情况。结果：沙棘多糖提取物显著降低了LPS／D-GalN诱导的小鼠血清中ALT和AST水平（ P＜0.01，P＜0.05）；HE染色观察显示，沙棘多糖明显减轻了肝细胞损伤和炎性细胞浸润。 Western blot检测表明，沙棘多糖提取物抑制了LPS／D-GalN诱导的TLR4的表达，但是对SOCS3的表达影响不明显。结论：沙棘多糖提取物有效抑制了LPS／D-GalN诱导的肝损伤，这种保护作用可能是通过抑制TLR4的表达来发挥作用的，而非通过调控SOCS3来实现的。
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MCP-1对LPS致炎小鼠子宫巨噬细胞迁移和功能活性的调节
目的:探讨LPS诱导的炎症小鼠子宫巨噬细胞迁移和功能活性的调节因素.方法:将150只雌性昆明种小鼠随机分为对照组(A组)、LPS模型组(B组)、MCP-1阻断组(C组),于末次注射后的1、3、6、12、24 h取子宫.运用免疫组织化学方法检测CD14+巨噬细胞数量与CD14表达的变化,ELISA方法检测TNF-α、MCP-1的表达量.结果:①与 A 组相比,B 组内膜、肌层、外膜的CD14+巨噬细胞数目及CD14表达量在各时间点均极显著增加(P<0.01),C 组内膜和肌层在1、3、6 h时恢复至正常水平;与B组相比,C组外膜在1、3、6 h时以及C组的内膜和肌层在各时间点时CD14+巨噬细胞数目及CD14表达量均极显著减少(P<0.01).②与A组相比,B组在各时间点以及C组在12、24 h时TNF-α和MCP-1的含量极显著增多(P<0.01);与B组相比,C组各时间点的TNF-α和MCP-1的含量极显著减少(P<0.01).结论:LPS诱导的小鼠子宫炎症反应中巨噬细胞的迁移及CD14、TNF-α等关键分子的表达均受MCP-1的调节.
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Rab5 a促进LPS活化的巨噬细胞中细胞因子的表达
目的：建立稳定表达Rab5a及其失活突变体Rab5aN133I巨噬细胞系，并分析Rab5a对LPS刺激的RAW264．7巨噬细胞中iNOS、TNF-α和IL-6表达的影响。方法：将Rab5a及其失活突变载体Rab5a N133I转染RAW264．7细胞，通过G418筛选稳定表达细胞系。通过Real-time PCR鉴定稳定表达细胞系。 MTT法分析其生长特性，LPS刺激稳定表达细胞系不同时间，检测iNOS、TNF-α和IL-6的表达水平。结果：转染Rab5a／Rab5aN133I细胞Rab5a mRNA 水平显著高于对照（ P＜0.05）。 Rab5a过表达促进RAW264．7细胞增殖，而过表达Rab5aN133I细胞增殖显著慢于对照（ P＜0．05）。 Rab5a过表达后， LPS诱导的RAW264．7细胞中iNOS、 TNF-α和IL-6的表达显著增高（P＜0．01）。然而，过表达Rab5aN133I对LPS诱导的iNOS、TNF-α和IL-6的表达没有显著影响。结论：Rab5a过表达显著促进了LPS活化的RAW264．7细胞中iNOS、 TNF-α和IL-6的表达，这种促进作用依赖于其结合GTP的能力。
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激活的人外周血及脐血树突状细胞对肿瘤细胞直接杀伤作用的比较
目的:探索人外周血或脐带血树突状细胞在干扰素-γ(IFN-γ)或细菌脂多糖(LPS)激活前后对肿瘤细胞杀伤活性的影响.方法:分离健康供者外周血或脐血单核细胞,用重组粒单细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)或联合肿瘤坏死因子(TNF-α)将其分别诱导为外周血树突状细胞(PbDC)及脐血树突状细胞(CbDC),二者分别于诱导第7天或第11天在合成培养基中加入LPS或IFN-γ继续培养12小时,将其激活.用流式细胞仪检测DC表面共刺激分子的改变;同时,以Jurkat、HL60及Daudi为靶细胞,以不同效靶比与DC共同培养18小时,采用51Cr释放实验检测DC激活前后抗肿瘤活性的差异.结果:①LPS及IFN-γ可上调外周血及脐带血DC表面CD86、CD83的表达,以LPS刺激组更明显,但对CD1a的表达影响较小.②以PbDC为效应细胞,LPS或IFN-γ可分别增强DC对Daudi或HL60的杀伤活性,在效靶比为20:1时与未加刺激因子对照组(Medium-DC)相比差异有显著意义(P＜0.01).然而,LPS-DC对Hk60、IFN-DC对Daudi则无明显杀伤活性;但二者对Jurkat却均有杀伤作用.③以CbDC为效应细胞,LPS及IFN-γ对其杀伤活性的调节作用与对PbDC的相似.但在未加刺激因子前,CbDC可有效杀伤Jurkat细胞,而Medium-PbDC对Jurkat细胞未见杀伤作用.结论:LPS或IFN-γ激活的外周血及脐血DC具有相似的肿瘤相对特异性杀伤活性,但有不同的组织特异性.该结果为不同组织的肿瘤治疗选择合适的DC提供了一定的实验依据.
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瘦素对LPS诱导的小鼠胸腺细胞凋亡的保护作用
目的:观察瘦素对小鼠胸腺细胞凋亡的保护作用,探讨其作用机制.方法:取出小鼠胸腺细胞,用MTT法检测瘦素对胸腺细胞的毒性作用,采用Annexin V/PI双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡,以RT-PCR检测caspase3 mRNA的表达.结果:瘦素可呈剂量依赖性的减少LPS对胸腺细胞的毒性作用,流式细胞仪检测表明瘦素可抑制LPS诱导的细胞凋亡,其浓度>100 ng/ml时有统计学意义.RT-PCR表明加入瘦素后caspase3的表达下降,且呈剂量依赖性.结论:瘦素对LPS诱导的胸腺细胞凋亡有一定的抑制作用.
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雷公藤新碱对LPS诱导小鼠骨髓树突状细胞成熟分化过程及炎症因子分泌的影响
目的:探讨雷公藤新碱对LPS诱导小鼠树突状细胞(DCs)分化、成熟过程及其分泌细胞因子的影响.方法:体外培养的C57BL/6小鼠骨髓DCs在LPS诱导成熟过程中,加入雷公藤新碱处理,流式细胞术检测DCs细胞表面MHCⅡ、CD80、CD86分子表达水平及DCs抗原吞噬能力,抗体芯片检测细胞因子的分泌情况.结果:与对照组相比,雷公藤新碱干预后DCs细胞表面分子MHCⅡ、CD80、CD86的表达水平明显降低,而抗原吞噬能力增强,培养上清中细胞因子分泌减少.结论:雷公藤新碱抑制LPS诱导的DCs成熟与分化,增加DCs抗原吞噬能力,并抑制其细胞因子分泌.提示雷公藤新碱可减轻DCs介导的炎症反应,为阐明雷公藤新碱在炎症性疾病治疗机制上提供理论与实践基础.
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条斑紫菜多糖PY-D2对小鼠脾淋巴细胞生长的影响
目的:研究条斑紫菜多糖体外提高机体免疫力的作用.方法:应用生化技术分离和纯化条斑紫菜多糖,获得条斑紫菜多糖2个组分,分别为PY-D1和PY-D2.体外培养条件下分别用不同浓度的PY-D2以及PY-D2与ConA或LPS协同处理小鼠脾淋巴细胞,通过MTT法观察条斑紫菜多糖对小鼠脾淋巴细胞生长的影响.采用流式细胞仪检测小鼠脾淋巴细胞的细胞周期变化.结果:PY-D2处理小鼠脾淋巴细胞72小时后对其生长有明显促进作用,且呈剂量依赖效应,0.25,0.5和1mg/ml条斑紫菜多糖处理小鼠脾淋巴细胞后,小鼠脾淋巴细胞的存活率分别为157.5%,162.1%和173.4%(P＜0.01).PY-D2与ConA或LPS共同处理小鼠脾淋巴细胞时,小鼠脾淋巴细胞的存活率高于ConA和LPS单独的作用,表现出明显的协同效应.流式细胞仪检测表明PY-D2可以促进小鼠脾淋巴细胞从G1期进入S期.结论:PY-D2可以促进小鼠脾淋巴细胞生长,为今后研究多糖提高机体免疫力的作用机理奠定了坚实的基础.
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香菇茯苓银耳复合多糖对小鼠巨噬细胞功能的作用研究
目的:研究香菇茯苓银耳复合多糖对不同状态下巨噬细胞功能的调节作用.方法:将巨噬细胞株RAW264.7细胞分别与复合多糖(CP)、复合多糖联合LPS (CP+LPS)、复合多糖预孵育后联合LPS(Pre-CP+ LPS)共孵育,采用荧光显微镜和流式细胞仪检测RAW264.7细胞吞噬荧光微球情况;采用Griess试剂检测RAW264.7细胞分泌NO水平;采用流式细胞术检测巨噬细胞表面活化标志物CD40、CD80和CD86的表达水平.结果:RAW264.7细胞与复合多糖共孵育条件下,复合多糖可以增强RAW264.7细胞对荧光微球的吞噬作用,且随着时间的延长愈加明显;复合多糖低浓度对RAW264.7细胞分泌NO无影响,当浓度达1 000 μg/ml时才能促进其显著分泌NO;复合多糖可以提高RAW264.7细胞CD40、CD80和CD86分子表达水平.在LPS刺激条件下,复合多糖联合LPS与复合多糖预孵育后联合LPS两种处理都可以减轻LPS导致的CD40、CD80和CD86活化标志过表达现象.结论:复合多糖对不同状态下巨噬细胞功能具有调节作用,即可以促进静息状态下巨噬细胞活化和吞噬作用,而对活化状态的巨噬细胞功能具有抑制作用.
关键词： 复合多糖 RAW264.7细胞 流式细胞术 LPS -
LPS对寻常型银屑病患者外周血单核细胞合成和分泌TNF-α的影响
TNF-α主要由单核/巨噬细胞合成和分泌,分为分泌型TNF-α(secretory tumor necrosis factor-α,sTNF-α)和膜相关型TNF-α,其中sTNF-α可与MC膜受体结合而成为膜结合型TNF-α.本文对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激前、后寻常型银屑病患者外周血单核细胞(Monocytes,MCs)合成和分泌各型的变化进行了检测,进一步探讨它们在寻常型银屑病发病机制中的作用.
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LPS诱发sAPP-α转基因鼠神经细胞损伤机制的初步探讨
目的:探讨微生物感染所造成的损伤是否与小儿孤独症的发病相关.方法:我们使用C57BL/6为背景的sAPP-α转基因小鼠和同源对照小鼠,给予低剂量(50 μg)的LPS腹腔注射,于不同时间点12、24、48、72、96、120小时以及14周处死小鼠,收集相应的样本,进行不同时间点外周血细胞计数、72小时 ELISA 方法检测大脑内炎症因子表达水平以及14周大脑免疫细胞化学等检测.结果:实验结果表明,与同源对照小鼠比较,sAPP-α转基因幼鼠在低剂量的LPS作用下,表现为体重减轻,12、24、48、72小时外周血红细胞数和HCT降低、14周大脑海马区存在着广泛的损伤修复区,但外周血血小板计数并无明显改变.对损伤区进行进一步Nissl染色,表明损伤区为不同于任何神经细胞的一种活细胞,推测为出血损伤后的纤维细胞修复.结论:小儿孤独症患者体内高表达sAPP-α是小儿感染后引起神经系统损伤的重要因素,源于高表达于血小板上sAPP-α导致组织出血.
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低剂量LPS对PC12细胞抗氧化能力的影响
目的:探讨低剂量脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对PC12细胞抗氧化能力的影响.方法:分别以浓度为0、0.01、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5、1 μg/μl 的LPS刺激PC12细胞24小时,MTT法检测细胞活性确立对细胞没有毒性作用的安全剂量;采用安全剂量刺激PC12细胞24小时,收集培养基上清和细胞,采用试剂盒检测上清中的总抗氧化能力(T-AOC),细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的表达,Western blot检测细胞内Bcl-2蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)、钙离子(Ca2+)的平均荧光强度.结果:LPS浓度小于0.1 μg/μl对细胞没有明显毒性作用(P＞0.05);采用0、0.01、0.025、0.05、0.1 μg/μl LPS分别刺激PC12细胞24小时,培养上清中T-AOC呈下降趋势,以0.05、0.1 μg/μl组明显(P＜0.01),细胞内SOD呈上升趋势(0.05 μg/μl组,P＜0.05;0.1 μg/μl组,P＜0.01),细胞内Bcl-2表达逐渐升高(0.025～0.1 μg /μl组,P＜0.01),细胞内ROS呈下降趋势(0.1 μg/μl组,P＜0.01),钙离子未见明显变化(P＞0.05).结论:低剂量LPS处理PC12 24小时具有剂量依赖性增强细胞抗氧化能力,并可能藉此参与应激耐受.
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LPS对人胚胎胰岛分泌IL-6的调控效应
目的:为了探讨免疫介质LPS对胚胎胰岛分泌IL-6以及对胰岛功能的影响,以便为研究免疫系统与内分泌系统的内在联系提供依据.方法:采用常规消化方法分离人胚胎胰岛并对其进行原代培养,加入浓度为10 mg/L LPS,经不同时相收获上清,测定IL-6、胰岛素、胰高血糖素含量和IL-6 McAb中和试验,对LPS刺激和对照组胰岛RNA进行IL-6 RNA 斑点杂交.结果:人胚胎胰岛经LPS刺激分泌IL-6的能力明显加强,在体外培养8 d,IL-6含量达高峰,为对照组的145倍;人胚胎胰岛在换新鲜培养液后用LPS二次刺激,仍可继续分泌高效价的IL-6,高峰时相为对照组的25倍;IL-6 McAb对胰岛培养上清中IL-6有很强的中和效应;斑点杂交结果显示LPS刺激后胰岛RNA中IL-6 mRNA含量明显高于对照组;人胚胎胰岛受LPS刺激后胰岛素分泌能力加强,胰高血糖素分泌能力明显降低.结论:免疫介质LPS可能影响胰岛的分泌功能及产生IL-6的能力.
