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LPS诱导B淋巴细胞分化过程中部分基因表达的改变
LPS为1型T非依赖性抗原,可以在没有其他细胞辅助的情况下直接刺激成熟B淋巴细胞的增殖和分化并产生抗体.为了研究LPS诱导B淋巴细胞增殖和分化的调控机制,本研究检测了一些关键蛋白分子及转录因子表达的改变.LPS诱导的原代B淋巴细胞的分化伴随着B淋巴细胞抗原受体(BCR)信号转导相关分子表达的显著降低,说明BCR的功能在浆细胞阶段已处于次要的地位.我们的结果还证明,LPS可以在原代B淋巴细胞有效地诱导被称为"B淋巴细胞终极分化主调控子"的转录因子Blimp-1的表达,并抑制转录因子Bcl-6和BSAP的表达,这一变化同B淋巴细胞的发育同步,可能在诱导增殖与分化的调控中起着关键作用.
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激活的脐血树突状细胞对肿瘤细胞的直接杀伤作用
探索脐血树突状细胞(DC)在γ干扰素(IFN-γ)及细菌脂多糖(LPS)激活前后对肿瘤细胞杀伤活性的差异.分离健康脐血单核细胞,用重组粒单细胞集落刺激因子(CM-CSF)、白介素4(IL-4)和α肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导为DC.于诱导第11天在合成培养基中加入LIS或IFN-γ继续培养12 h,将其激活.用流式细胞仪检测DC表面共刺激分子的改变,以明确LIS或IFN-γ对DC的不同刺激作用;同时,以恶性血液病细胞株Jurkat及Daudi为靶细胞,以不同效靶比(E:T)与DC共同培养18 h,采用51Cr释放试验检测DC激活前后抗肿瘤活性的差异.结果(1)1PS及IFN-γ可不同程度地上调DC表面CD86、CD80、CD83及CD1a的表达,尤以LPS刺激组明显;(2)DC在未加刺激因子前能有效杀伤Jurkat细胞,在效靶比为20:1时,LPS或IFN-γ可使其杀伤活性进一步提高至50.0%、36.9%,均与未加刺激因子前有显著差异(P＜0.001,P＜0.025);(3)在效靶比为20:1时,LPS可使DC对Daudi的杀伤率提高至l9.8%(P＜0.025),而未加刺激因子组及IFN-γ刺激组DC对Daudi在任何效靶比均未显示明显的杀伤作用.LPS或IFN-γ激活的脐血DC对Jurkat及Daudi细胞具有选择性杀伤作用.
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抗菌膜单克隆抗体对志贺菌入侵HeLa细胞的影响
采用HeLa细胞入侵及其阻断试验,观察抗志贺菌菌膜蛋白和LPS的单抗对志贺菌入侵HeLa细胞的影响.并用免疫印迹法初步分析了感染细胞及其培养上清中的蛋白成分.结果抗菌膜蛋白的单抗26C3不但没有阻断反而促进了细菌的入侵,在HeLa细胞胞浆内出现成堆的F2a菌,其绝对菌数远远超过未经该单抗处理的F2a菌感染的HeLa细胞组.免疫印迹显示单抗处理组细胞培养液中IpaB、IpaC蛋白明显比未经单抗处理组多.抗LPS的单抗对细菌入侵具有一定的阻断作用.提示抗菌膜蛋白单抗所识别的IpaB表位,具有调节F2a菌进入HeLa细胞的能力.其作用机制可能是通过细菌分泌器,使分泌IpaB、IpaC蛋白增多.
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大蒜对老龄BALB/c小鼠血浆IL-1β、IL-6水平影响的研究
本文研究大蒜对老年小鼠血浆IL-1β、IL-6水平变化的影响.小鼠经饮用大蒜液后2周,继用5μgLPS/鼠腹腔注射4h后,取血用ELISA测血浆中细胞因子水平.老年小鼠血浆IL-1β基础水平明显高于青年小鼠(P<0.05),经LPS刺激后,老年小鼠血浆IL-1β、IL-6水平无明显增高,而饮用大蒜液后,老年小鼠的IL-1β、IL-6血浆基础水平有所降低,但在LPS刺激下,血浆IL-1β、IL-6较基础水平明显上升(P<0.05),提示大蒜能明显改善老年小鼠的细胞因子紊乱状况.
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慢性重型肝炎患者血中LPS、sCD14变化的临床意义
我们检测24例慢性重型肝炎(慢重肝)患者血中内毒素(lipopolysaccharide, LPS)及可溶性CD14(sCD14)的水平,现将结果报告如下.1 材料和方法1.1 检测对象临床确诊慢重肝患者24例(分期例数见表1),健康献血员对照组10例.慢性乙型肝炎(慢乙肝)患者16例.
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细菌内毒素对成纤维细胞合成IL-6、IL-8的诱导作用
我们曾证明,LPS可促进成纤维细胞生长增殖,并可促过胞内诱导型一氧化氮合酶的表达[1].为探讨成纤维细胞在抗感染免疫中的作用机制,本文观察了LPS对NIH3T3细胞分泌IL-6和IL-8的诱导作用.
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肝硬化肠源性内毒素血症临床研究现状
内毒素是革兰氏阴性菌(G-)菌胞壁的脂多糖(LPS),其主要来源于肠道菌群,通常在细菌死亡后由胞壁崩解自溶时释放,也可在细菌代谢过程中以发疱方式产生.临床上约有79%～92%的肝硬化患者发生肠源性内毒素血症(IETM)[1-3].现已证实IETM与肝硬化病变密切相关.
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内毒素耐受的研究进展
内毒素(endotoxin)或脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)是革兰阴性细菌细胞壁外膜的重要组成部分,能刺激多种炎性介质释放.在革兰阴性细菌感染及其疾病发生、发展过程中有着重要作用.
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小干扰RNA沉默TLR4表达对脂多糖促进人肺癌SPCA1细胞增殖的影响
目的:探讨Toll样受体4(TLR4)对脂多糖(LPS)促进人肺癌SPCA1细胞增殖的影响.方法:采用LPS(10 μg/ml)刺激细胞,模拟慢性炎症的细胞微环境.将靶向TLR4基因的小干扰RNA(TLR4-siRNA)或阴性对照(NC-siRNA)通过脂质体介导转染人肺癌SPCA1细胞,.24h后加入10μg/mlLPS.按转染siRNA和加入LPS情况,实验分为不做任何处理的Control组、NC+ 10LPS组以及TLR4-siRNA+ 10LPS组.采用Real-time PCR和流式细胞术检测SPCA1细胞中TLR4 mRNA及蛋白的表达情况;采用CCK-8法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测分析细胞周期分布情况.结果:与NC+ 10LPS组相比较,TLR4-siRNA+ 10LPS组细胞中TLR4 mRNA及蛋白的表达水平显著下降(P＜0.01);与Control组和NC+ 10LPS组相比较,TLR4-siRNA+ 10LPS组SPCA1细胞的增殖明显减缓(P＜0.01),TLR4-siRNA+ 10LPS组细胞克隆形成能力明显降低[(4.50± 1.89)vs (13.33 ±1.81)、(15.75±1.25)个,P＜0.01];TLR4-siRNA+ 10LPS组细胞周期阻滞于Go/G1期[(61.55±0.55)％vs (53.59±1.59)％、(51.72±0.77)％,P＜0.01].结论:TLR4-siRNA能有效沉默SPCA1细胞中TLR4的表达,能够阻滞细胞的生长,抑制细胞的增殖.
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腹腔内毒素刺激后的大鼠脑功能磁共振成像研究
大鼠腹腔内给予内毒素脂多糖(LPS)后,应用无创性、可连续观察的功能磁共振成像(fMRI)技术观察前脑部分脑区局部血氧水平的变化.结果显示,视前区、下丘脑室旁核、扣带回和海马/脉络组织区的fMRI信号强度在腹腔注射LPS后不同时间点呈现不规则的上升状态,提示这些区域参与了对外周注射LPS的反应.本研究说明fMRI可用于在神经免疫调节领域的研究中对实验动物脑内活动的无创性、可连续性观察.
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LPS刺激单核巨噬细胞培养上清对成骨细胞OPG/RANKL的影响
目的:观察经牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)刺激的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7培养上清对小鼠成骨细胞MC3T3-E1 OPG/RANKL表达的影响.方法:收集经100 ng/mL Pg-LPS刺激的单核巨噬细胞RAW264.7培养24 h后的上清,以不同稀释浓度(10％、20％、30％、40％和50％)的培养上清作用于MC3T3-E1 24h,分别通过RT-PCR、免疫印迹法(Western blotting)检测细胞OPG/RANKL基因和蛋白水平表达的变化,采用SPSS17.0软件包对数据进行单因素方差分析.结果:MC3T3-E1经不同稀释浓度的培养上清刺激后,其OPGmRNA及蛋白表达随浓度的增加而显著减少(P＜0.05),而RANKLmRNA及蛋白表达随浓度的增加显著增加(P＜0.05).结论:Pg-LPS刺激的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7培养上清可通过抑制成骨细胞OPGmRNA及蛋白的表达,增加RANKLmRNA及蛋白的表达而抑制其成骨能力,且与浓度呈一定的正相关.
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LPS和IL-10对低密度脂蛋白诱导泡沫细胞形成的影响
目的 探讨动脉粥样硬化早期泡沫细胞形成与致炎症因子脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和抗炎因子白介素-10(interleukin-10,IL- 10)的相互作用关系.方法 以佛波醇酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导单核细胞株THP-1细胞分化为巨噬细胞,再以氧化型低密度脂蛋白刺激巨噬细胞形成泡沫细胞,采用油红O染色法同时观察致炎症因子LPS及抗炎因子IL-10在这一过程中对泡沫细胞形成的干预作用.结果 氧化型低密度脂蛋白单独刺激巨噬细胞24 h后泡沫细胞的形成率由对照组的(9.77±1.70)%增加到刺激组的(16.27±2.27)%,且随时间延长增加更明显 ;LPS的协同作用能增加到40%以上,并随浓度升高而增多;IL-10能有效地抑制泡沫细胞形成 ,拮抗氧化型低密度脂蛋白和LPS的作用,且与浓度呈正相关.结论 氧化型低密度脂蛋白能诱导泡沫细胞形成,LPS能明显加快泡沫细胞的转化,而抗炎因子IL-10能显著抑制这一过程.揭示血管炎症能加速泡沫细胞形成 ,而IL-10能抑制泡沫细胞的形成,这对延缓动脉粥样硬化进程具有重要作用.
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坎地沙坦抑制脂多糖诱导的toll样受体4及下游炎症因子的表达增加——不依赖血管紧张素Ⅱ1型受体
本文旨在离体培养人肾小管上皮细胞株(human renal tubular epithelial cells,HKCs)上研究血管紧张素Ⅱ 1型受体阻断剂(angiotensin Ⅱ type l receptor blocker,ARB)坎地沙坦抗炎效应的机制.用流式细胞仪、Westem blot、RT-PCR和ELISA技术分别检测HKCs的toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)蛋白水平、血管紧张素Ⅱ 1型受体(angiotensin Ⅱ type 1 receptor,AT1R)和磷酸化核因子-κB (nuclear factor-kappa B,NF-κB) p65蛋白、巨噬细胞趋化蛋白-1 (macrophage chemoattractant protein-1,MCP-1)和RANTES的mRNA水平,以及MCP-1和RANTES在培养液中的蛋白浓度.结果显示,在离体培养的HKCs中,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)上调TLR4蛋白表达水平,增强NF-κB活化和下游炎症因子(包括MCP-1和RANTES)释放;坎地沙坦逆转LPS引起的TLR4表达的上调、NF-κB活化及MCP-1和RANTES的释放,但用siRNA下调AT1R表达并不改变坎地沙坦的这些效应.以上结果提示,坎地沙坦通过一条新的不依赖于ATlR的途径发挥抗炎效应.
关键词： TLR4 LPS 血管紧张素Ⅱ 1型受体阻断剂 NF-κB 炎症 -
氯胺酮对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激的影响
目的 研究氯胺酮对脂多糖(LPS)刺激的大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激的影响.方法 体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383经氯胺酮(10、100和1000 umol/L)预处理.LPS刺激24 h后,应用试剂盒检测细胞培养上清液中丙二醛(MDA)及超氧化物岐化酶(SOD)的水平.结果 与PBS组比较,LPS组培养上清液中MDA水平均明显增加,而SOD水平显著下降,而氯胺酮预处理组(100和1000 umol/L)对此具有抑制作用.结论 氯胺酮对LPS所致的NR8383细胞的氧化应激损伤具有一定的保护作用.
关键词： 氯胺酮 LPS 大鼠肺泡巨噬细胞系NR8383 丙二醛 超氧化物岐化酶 -
一氧化氮在中性粒细胞与激活的内皮细胞间黏附中介导的作用
目的 研究一氧化氮(NO)在大鼠中性粒细胞(PMN)与激活的大鼠肺微血管内皮细胞(PMEC)黏附中的介导作用.方法 分离和培养大鼠中性粒细胞(PMN)和大鼠肺微血管内皮细胞(PMEC),测定PMEC与PMN间黏附率,并测定一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-NMMA孵育的PMEC经烧伤血清或LPS激活后,与PMN间黏附率.结果 L-NMMA能增加烧伤血清或LPS激活后的PMEC与PMN间黏附率.结论 NO介导了PMN与激活的PMEC间黏附.
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LPS的直接诱导对肺微血管内皮细胞ICAM-1的表达及对PMN黏附作用影响的研究
目的探讨内素毒(Endotoxin LPS)的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(PMVEC)ICAM-1表达的影响及诱导发生的PMVEC对多形核中性粒细胞(PMN)黏附作用的影响.方法100ng/ml LPS刺激PMVEC 0、2、4、6、8 h或10、50、100ng/ml LPS刺激6 h,同时检测PMVEC ICAM-1的表达(免疫细胞化学法)、PMVEC-PMN黏附率及抗ICAM-1抗体对黏附作用的影响,并进行PMVEC与PMN黏附作用的扫描电镜观察.结果LPS的直接刺激可诱导PMVEC ICAM-1的表达增加,且表现为随LPS刺激的时间、剂量增加而增加;同时LPS直接刺激也促进了PMVEC对PMN的黏附率增加,其变化在时间与方式上几乎与ICAM-1的表达增加同步.Anti-ICAM-1抗体可以显著地抑制LPS诱导的PMVEC-PMN黏附(P<0.01).扫描电镜可以直观地显示PMVEC-PMN黏附的超微结构表现,并且首次通过这种方式观察到了"间接系链"现象的存在.结论表明细菌致病因子LPS的直接诱导可以促进PMVEC表达ICAM-1,从而为PMVEC-PMN的黏附提供物质基础,而"间接系链"的发生更扩大和巩固了黏附效果.
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LPS的直接诱导对肺微血管内皮细胞IL-8的表达及对PMN趋化作用影响的研究
目的探讨 LPS的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞 (PMVEC)IL- 8表达的影响及诱导发生的 PMVEC对多形核中性粒细胞( PMN)趋化作用的影响.方法 100 ng/ml LPS刺激 PMVEC 0、 1、 2、 4、 6、 8 h或 1、 10、 100 ng/ml LPS刺激 6 h, ELISA和原位杂交试验分别检测培养液上清中分泌的 IL- 8及 PMVEC内 IL- 8 mRNA的表达,同时琼脂糖平板法检测对 PMN的趋化作用,并通过抗 IL- 8的抗体抑制试验观察对趋化作用的影响.结果 LPS能显著促进 PMVEC表达 IL- 8,包括促进 IL- 8 mRNA的表达及 IL- 8的分泌.在时间上 mRNA的表达先于 IL- 8分泌. LPS能促进 PMVEC对 PMN的趋化,随刺激作用的持续,诱导的 PMVEC对 PMN的趋化作用加强.抗 IL- 8抗体能显著抑制对 PMN的趋化作用 (P<0.01).结论表明细菌致病因子 LPS的直接诱导确能促进 PMVEC高效表达和分泌 IL- 8,从而为 PMN的迁移提供必需的物质条件 ,发挥对 PMN的趋化作用而参与导致肺损伤.
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LPS诱导肺微血管内皮细胞ICAM-1的表达及 NF-κ B作用的实验研究
目的研究 LPS诱导的肺微血管内皮细胞( PWVEC) ICAM- 1的表达及调控机制.方法 100ng/ml LPS刺激 PMVEC 0h、2h、4h、6h、8h或 10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml LPS刺激 6h,免疫细胞化学检测 PMVEC ICAM- 1的表达.凝胶电泳迁移率变化分析检测 NF- κ B的活化.并通过加入活化阻断剂 PDTC观察对 PMVEC ICAM- 1表达的影响.结果 PMVEC ICAM- 1的表达与 LPS的刺激呈时相 - 剂量依赖方式.LPS的刺激迅速活化 NF- κ B,60min达到高峰,后逐渐下降.PDTC能显著降低 ICAM- 1的表达( P<0. 01).结论 LPS刺激诱导 NF- κ B的活化,启动 ICAM- 1的合成表达.
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LPS对机体内源性纤溶的抑制作用及其机制研究
目的研究细菌内毒素(LPS)对机体内源性纤溶的直接影响并探讨其作用机制.方法以125I-纤维蛋白原进行示踪,建立大鼠肺纤维蛋白沉积模型,研究LPS对大鼠内源性纤溶的作用;同时检测LPS作用后大鼠血浆中PAI-1的水平及活性的变化.结果 Batroxobin能导致纤维蛋白在大鼠肺组织沉积,表现为5min肺组织放射性记数显著升高,而30min由于内源性纤溶系统的激活,肺组织放射性记数降低;给予LPS后,抑制了30min肺同位素量的降低,与重组PAI-1的作用类似,同时测得血浆中PAI-1的水平及活性增高.结论直接证实LPS通过PAI-1途径抑制机体内源性纤溶,提示抑制PAI-1可能有助于治疗G-菌引起的脓毒血症.
关键词： LPS PAI-1 Batroxobin 纤溶 -
体内输注CD4+CD25+调节性T细胞对MRL/lps小鼠肾脏损伤的影响
目的 探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)对MRL/lps小鼠病情进展的影响.方法 实验小鼠分为实验组1、实验组2、对照组共3组,每组8只.采用磁珠分选法分选出MRL/lps小鼠及近交系BALB/c小鼠脾脏中的Treg细胞,浓缩后分别输注入实验组MRL/lps小鼠体内,空白组输注等体积生理氯化钠溶液,3周后测量小鼠尿蛋白、抗-dsDNA抗体的含量,并取肾脏行组织病理及免疫病理检查,比较结果.结果 输注MRL/lps小鼠Treg细胞的实验组1,尿蛋白评分显著低于输注正常小鼠Treg细胞组(实验组2)及对照组,分别为10.63±4.17、20.00±5.35、18.75±8.34;P<0.05.-dsDNA抗体的含量显著低于实验组2及对照组,分别为(5.36±2.40)pg/ml、(9.57±1.97)pg/ml、(10.75±3.98)pg/ml;P<0.05.肾小球硬化指数3组分别为(32.00±12.09)%、(45.50±13.68)%、(47.50±10.78)%;P<0.05.肾脏中IgG复合物的免疫荧光评分,3组分别为1.88±0.99、2.88±0.64、2.75±0.71;P<0.05,实验1组均显著轻于另外两组.肾小管间质损害指数三组间差异无统计学意义,3组分别为4.63±1.92、6.00±1.07、5.75±1.28:P>0.05).结论 输注同系小鼠的Treg细胞可显著降低尿蛋白及抗dsDNA抗体的含量,降低肾小球硬化指数及肾脏中IgG免疫复合物的含量,从而延缓MRL/lps小鼠肾脏损伤的进展.
