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氨基胍对内毒素性肺损伤炎症反应和NF-κB信号通路的影响
目的 观察选择性一氧化氮合酶抑制剂氨基胍(aminogunidine,AG)对大鼠内毒素性肺损伤(acute lung injury,ALI)NF-κB相关信号通路和炎症反应的影响,探讨AG对肺损伤组织的保护作用及其机制.方法 健康♂SD大鼠随机分为对照组、模型组和AG治疗组.模型组、AG治疗组静脉注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)复制内毒素性肺损伤模型.各组按治疗时间又分为给LPS 3 h后治疗3 h(3 h+3 h)组和给LPS 6 h后治疗3 h(6 h+3 h)组,分别于给LPS 3 h和6 h后腹腔注射生理盐水(对照组及LPS组)和AG(100 mg·kg-1,AG治疗组).每组8只动物.免疫组化染色分析肺组织中核因子-κB(NF-κB)的核移位和粘附分子-1(ICAM-1)表达;放射免疫法分别测定肺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)的含量;光镜、电镜观察肺组织病理变化.结果 与对照组比较,大鼠肺损伤后NF-κB活化,明显从细胞质移位于细胞核,表达量也明显增加;ICAM-1蛋白表达增加;肺组织中TNF-α、IL-6含量明显升高.肺损伤3 h用AG治疗3 h后, NF-κB从细胞质向细胞核的移位被明显限制,NF-κB的表达量、ICAM-1蛋白表达和肺组织中TNF-α、IL-6含量明显低于相应的LPS组,肺组织病理改变减轻;肺损伤6 h用AG治疗3 h后,治疗效果较差.结论 AG于LPS 3 h后给药可减轻内毒素性肺损伤,可能与减弱诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA表达、抑制核因子的活化,在一定程度上阻断NF-κB相关信号通路的传导,下调炎症因子和ICAM-1的表达有关.
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CCK-8对LPS作用下巨噬细胞B7.1和B7.2表达及其协同刺激功能的影响
目的 探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)对LPS活化的巨噬细胞B7.1和B7.2表达及其协同刺激功能的影响.方法 用CCK-8(10-12～10-6)mol·L-1和(或)脂多糖(LPS)孵育小鼠腹腔巨噬细胞,采用流式细胞术分析细胞表面B7.1和B7.2含量的变化,用免疫磁珠从小鼠脾细胞分离CD4+T细胞,按4∶1数量比与腹腔巨噬细胞[预先用LPS、CCK-8和(或)抗B7.1抗体、抗B7.2抗体、CCK1R拮抗剂CR1409、CCK2R拮抗剂CR2945孵育24h]共同体外培养,同时加入ConA 5 mg·L-1,采用3H参入法测定CD4+T细胞增殖反映巨噬细胞的协同刺激活性.结果 CCK-8可以下调LPS诱导的巨噬细胞的B7.1和B7.2表达,抑制LPS活化的巨噬细胞的协同刺激活性.CCK-8的作用呈剂量依赖性,大效应剂量在(10-7～10-9)mol·L-1之间.CR1409及CR2945均能逆转CCK-8的上述作用,且CR1409的作用较CR2945更明显.抗B7.1抗体和抗B7.2抗体可减轻LPS活化的巨噬细胞协同刺激活性.结论 CCK-8通过下调LPS诱导的巨噬细胞B7.1和B7.2表达而抑制其协同刺激活性,该作用由CCK1R及CCK2R介导,其中CCK1R起主要介导作用.
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氨基胍对内毒素性肺损伤细胞凋亡的影响
目的 观察选择性一氧化氮合酶抑制剂氨基胍(AG)对大鼠内毒素性肺损伤(ALI)细胞凋亡的影响,探讨AG对肺损伤组织的保护作用及其机制.方法 健康♂SD大鼠,随机分为:①对照组;②模型组(LPS组);③AG治疗组.其中LPS组和AG治疗组按治疗时间又分为给LPS 3 h后治疗3 h(3 h+3 h)组和给LPS 6 h后治疗3 h(6 h+3 h)组,AG治疗组分别于给LPS 3 h和6 h后给AG(100 mg·kg-1),ip给药,LPS组给等量的生理盐水;(3 h+3 h)组于注射LPS 6 h后处死大鼠; (6 h+3 h)组于注射LPS 9 h后处死大鼠,每组8只动物.模型组、AG治疗组iv注射LPS复制内毒素性肺损伤大鼠模型, 对照组给等量生理盐水.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定肺组织中NOS mRNA表达变化;电镜、流式细胞术(FCM)检测肺细胞凋亡率;Western blot法检测Caspase-3蛋白的表达;免疫组化法测定Bcl-2和Bax蛋白的表达;光镜、电镜观察肺组织病理变化.结果 与对照组比较,大鼠肺损伤后,iNOSmRNA表达增强,eNOSmRNA表达减弱,nNOSmRNA表达没有明显变化;细胞凋亡率、Caspase-3和Bax蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达下降,Bcl-2/Bax降低;肺损伤3 h用AG治疗3 h后,iNOSmRNA表达、细胞凋亡率、Caspase-3和Bax蛋白表达低于对照组,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax高于对照组,肺组织病理改变减轻;肺损伤6 h用AG治疗3 h后,治疗效果较差.结论 AG在较早时候给药可减轻内毒素性肺损伤,可能与减弱iNOSmRNA和Caspase-3表达、增强Bcl-2蛋白表达、减弱Bax蛋白表达、调节Bcl-2蛋白/Bax蛋白平衡有关.
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虎杖苷对LPS作用下心肌细胞β-肾上腺素能受体的调节作用
目的探讨LPS对心肌细胞β肾上腺素能受体(β-AR)功能的影响以及虎杖苷(PD)的防治效果.方法体外培养心肌细胞,利用放射配体竞争结合法检测β-AR数量和亲和力,同时应用流式细胞术检测β-AR数量.结果正常心肌细胞膜上的β-AR大结合容量(Bmax)为(4.14±1.41)fmol·1×105cells-1,解离常数Kd值为(4.02±0.59)nmol·L-1;LPS刺激后,受体Bmax减小为1.78±0.12 fmol·(1×105cells)-1,亲和力下降为(23.88±2.34)nmol·L-1;当用PD处理后,大结合容量和亲和常数都恢复至接近正常,分别为(3.37±0.36)fmol·(1×105cells)-1和(3.44±0.44)nmol·L-1;单纯用PD处理细胞Bmax和Kd都与正常组差异无显著性,分别为(2.76±0.32)fmol·1×105cells)-1和(4.63±1.54)nmol·L-1.流式细胞术检测β-AR数量变化与放射配体结合法检测结果一致.结论 LPS可直接引起心肌细胞β-AR数量下调、亲和力降低,虎杖苷可调节β-AR的功能,使其维持正常水平.
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培菲康对硫代乙酰胺诱导的大鼠肝性脑病的保护作用
目的探讨培菲康对硫代乙酰胺（TAA）引起的大鼠肝性脑病（HE）模型的作用及其机制。方法利用大鼠TAA HE模型，观察活菌制剂培菲康对HE大鼠神经反射，血清氨浓度，血清氨基酸支/芳比值，肝门静脉LPS浓度和肝脏病理损伤的影响。结果培菲康能降低大鼠的HE等级，改善HE大鼠的神经反射；显著降低血氨和门静脉LPS浓度，升高氨基酸的支/芳比值，减轻肝脏的病理损伤。结论培菲康对TAA引起的大鼠HE有明显的保护作用，其作用机制与降低血氨、门静脉LPS浓度和升高血清氨基酸支/芳比值有关。
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白藜芦醇对于小鼠败血症休克的保护作用及其作用机制的研究
目的：从动物休克模型和细胞水平上研究白藜芦醇（resveratrol，Res）对败血症的调节作用及其分子药理学作用机制。方法通过建立小鼠盲肠结扎穿孔诱导的败血症休克模型（CLP），研究白藜芦醇给药后的小鼠的存活率。然后利用体外培养的心肌细胞建立 LPS 损伤模型，采用反转录PCR（RT-PCR）、Real-time PCR 检测细胞内源性 TNF-α、SIRT1等的 mRNA 的表达水平，Western blot 分析 NF-κB 重要亚基的蛋白表达水平。结果与单纯休克模型组相比较，腹腔注射白藜芦醇（1和5 mg·kg －1·d －1）治疗明显增加败血症休克小鼠的存活率；白藜芦醇处理明显促进 SIRT1、SIRT6和 SIRT7的 mRNA 表达，抑制 LPS 诱导的 NF-κB 核转位。结论适当剂量的白藜芦醇可能通过上调 SIRT 家族成员，并抑制 NF-κB 炎症反应通路，对败血症休克具有潜在的药理学保护作用。
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LPS诱导大鼠肺泡上皮细胞RLE-6 TN内质网应激及凋亡研究
目的：利用脂多糖( LPS)刺激大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞株RLE-6TN建立内毒素性急性肺损伤( ALI)体外细胞模型,观察RLE-6TN是否发生内质网应激( ERS)及相关凋亡,为进一步研究内毒素性ALI提供依据,同时为临床ALI新药研发提供新的思路。方法以LPS刺激大鼠肺泡上皮细胞株 RLE-6TN, Western blot 法检测 ERS 相关蛋白 GRP78、CHOP、c-Caspase-12以及 c-Caspase-3的表达, DAPI 染色及流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 LPS刺激大鼠肺泡上皮细胞株RLE-6TN 24 h,GRP78蛋白表达增多,并且ERS特异性凋亡蛋白CHOP及c-Caspase-12的表达均增多,DAPI染色及流式细胞术结果均表明RLE-6TN凋亡增强。结论LPS可诱导大鼠肺泡上皮细胞RLE-6TN发生ERS,并发ERS相关凋亡,这可能是LPS致ALI的重要病理生理机制。
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急性细菌脂多糖暴露对小鼠血糖的影响
目的 探讨禁食条件下急性细菌脂多糖(LPS)暴露对小鼠血糖的影响.方法 雄性成年ICR健康小鼠随机分为对照组和LPS组,LPS组单次腹腔注射2 mg/kg LPS,对照组单次腹腔注射相同体积的生理盐水.注射12 h后剖杀小鼠,取血清检查生化指标;用实时定量PCR检测肝脏糖代谢相关基因葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCK)mRNA水平.结果 LPS注射后24 h内血糖水平持续降低;葡萄糖耐量(GTT)实验显示,LPS引起小鼠对葡萄糖耐量降低;胰岛素耐量(ITT)实验显示,LPS引起小鼠胰岛素敏感性降低;实时定量PCR结果显示,单次给予LPS显著下调g-6-pase、pepck mRNA水平.结论单次LPS抑制肝脏糖异生,导致持续性低血糖.
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早期应用艾司洛尔对 LPS 诱导脓毒症大鼠心功能的影响
目的：探讨早期应用艾司洛尔对脓毒症大鼠心功能的影响。方法随机将雄性 SD 大鼠分为：脓毒症组（LPS 组）10只， LPS 建立大鼠模型，司洛尔组（ESM组）40只，LPS 建立大鼠模型，按艾司洛尔不同给药时机及剂量分4个亚组：A1组；A2组；B1组；B2组以及空白组（X 组）各10只。大鼠气体全麻后超声心动图法测心脏射血分数（EF％）及左室短轴缩短率（FS％）；ELISA 法检测血清儿茶酚胺、肌钙蛋白（TN-I）、N 端脑钠肽前体（NT-proBNP）浓度；心肌细胞匀浆提取蛋白后 ELISA 法检测β1、β2、β3受体亚型含量；观察心肌病理形态学改变以及电镜观察心肌线粒体超微结构的变化。结果ESM组较 LPS 组在超声心动图中心脏射血分数（EF％）及左室短轴缩短率（FS％）均有改善（P ＜0．001）；在儿茶酚胺浓度上 ESM组与 LPS 组没有差别（P ＞0．05）。在 TN-I 及 NT-proBNP 浓度上 A 组低于 B 组、A2组低于 A1组（P ＜0．01）；在β受体亚型含量上：β1受体含量 A 组高于 B 组、A2组高于 A1组（P ＜0．01），β2受体含量各组（P ＞0．05），β3受体含量在 ESM四亚组组间（P ＞0．05），但ESM四亚组较 LPS 组均有减少（P ＜0．01）；免疫组化也得到结果与心肌组织 ELISA 法测得β受体亚型的含量的结果相一致；在心肌线粒体的超微结构观察中发现，早期应用艾司洛尔可以减轻心肌线粒体的损伤。结论对于脓毒症大鼠早期应用艾司洛尔，可以上调了心肌β1受体含量，改变β肾上腺素能受体各亚型的比例；减轻心肌线粒体的损伤，改善心肌的能量代谢，提高心功能。
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肠出血性大肠杆菌O157 LPS单克隆抗体的制备与鉴定
目的 建立能够分泌针对肠出血性大肠杆菌O157:H7表面抗原的特异性单克隆抗体,以期用于该病原菌的检测.方法 以敲除毒力基因的O157突变株F25全菌免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,分别以全菌抗原和热酚水法纯化的O157 LPS抗原用间接ELISA筛选能够分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,纯化抗体并鉴定.结果 建立了稳定分泌抗O157 LPS抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株3D6,分泌抗体属IgG3亚类,轻链为κ型.腹水抗体ELISA效价达1:3.2×106.以辛酸/饱和硫酸铵法纯化后抗体效价为1:1.6×106,亲和常数Ka大于6.14×10-11mol/L.用于协同凝集和间接荧光抗体试验具有良好的特异性.结论 该单克隆抗体针对O157的LPS抗原,特异性强,亲和力高,可用于O157的检测或分离鉴定.
关键词： 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 LPS 单克隆抗体 免疫荧光 协同凝集 -
钩体LPS生物合成与装配途径及相关基因分析
目的预测问号钩体黄疸出血型赖株脂多糖(LPS)合成、装配途径,并对其中几个关键基因的特征进行深入分析.方法使用NCBI/BlastX,ProDom/Blast,Jpred2,TMHMM对问号钩体黄疸出血型赖株全基因组ORF基因所编码蛋白进行在线分析,并使用Bioedit,Pep Tool软件进行蛋白质一、二级结构分析.结果确定了脂质A和核心多糖生物合成基因lpxA、lpxB、lpxC、lpxD、lpxK、kdsA、kdsB、kdtA、lnt、htrB和O-抗原生物合成基因簇rfb locus 等以及装配、跨膜转运中的基因rfbP、rfbX、rfc、rfaL、rfe绘制了LPS合成及装配途径示意图.并对合成和装配途径中几个关键的基因编码蛋白(LpxA、 Rfc、 RfbX、 RfaL)的二级结构、跨膜区域、结构域等进行了分析.结论问号钩体黄疸出血型赖株LPS合成、装配途径与典型的革兰阴性菌,如大肠埃希菌K-12相似,主要差异在于钩体特殊的脂肪酸代谢途径和O-抗原多糖结构.该研究为进一步探讨钩体LPS基因功能及其与致病性关系奠定基础.
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桑辛素对LPS诱导急性肺损伤小鼠保护作用机制研究
目的 探讨桑辛素对LPS诱导急性肺损伤模型小鼠的保护作用.方法 小鼠腹腔注射LPS建立急性肺损伤动物模型.将小鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组(地塞米松2mg·kg-1)、桑辛素低剂量组(10mg·kg-1)、桑辛素高剂量组(20mg·kg-1).观察各组小鼠肺组织病理学变化,测量肺W/D,计数支气管肺泡灌洗液总细胞及NL、肺组织中SOD,MDA、IL-6、TNF-α含量及NFκB p65蛋白表达水平.结果桑辛素低剂量组(10mg·kg-1)、桑辛素高剂量组(20mg·kg-1)可有效减轻LPS导致的肺组织病理学变化,明显降低肺泡灌洗液中炎症细胞的数目,显著降低肺湿/干重比重,提高肺组织中SOD活力,降低MDA、IL-6、TNF-α的含量,抑制NFκB p65蛋白的表达.结论 桑辛素可以有效保护LPS诱导的急性肺损伤.
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机体免疫应答内毒素的分子机制
天然免疫处在机体防御微生物病原体的第一线[1],其面临的主要挑战是如何识别病原体、快速做出防御应答以及激活获得性免疫应答[2].许多细菌成分能够激活天然免疫,其中包括LPS、肽聚糖、磷脂酸、脂肽和细菌DNA.
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可溶性CD14和可溶性TNFR-p55与创伤MODS诊断和干预
可溶性白细胞分化抗原14(sCD14)和可溶性肿瘤坏死因子受体p55(sTNFR-p55)通过分别与内毒素(LPS)和肿瘤坏死因子α(TNFα)无效结合,拮抗LPS和TNFα的病理作用.sCD14和sTNFR-p55在诊断和干预刨伤MODS中发挥重要作用.
关键词： 可溶性白细胞分化抗原14 可溶性肿瘤坏死因子受体p55 LPS TNFα 比值 MODS -
LPS对CCI大鼠触诱发痛和热痛敏影响的实验研究
目的:研究免疫激动剂脂多糖(LPS)对大鼠神经性慢性病理性疼痛的影响.方法:16只Wistar大鼠随机分为LPS组和生理盐水(NS)组,每组8只.结扎大鼠右侧坐骨神经建立坐骨神经压榨性损伤(CCI)模型,建模术后第3天,LPS组大鼠腹腔注射LPS(1 mg/kg),NS组注射等量生理盐水,均1次/d,连续给药4周.在CCI术前(当天)和术后3、7、10、14、21、28天测量2组大鼠手术侧(右侧)及对侧触诱发痛针剌-缩足强度和热刺激-缩足时间.结果:成功建立CCI大鼠模型.2组在术后3天手术侧针刺-缩足强度和热刺激-缩足时间与术前比较均明显降低或缩短(P均＜0.05).LPS组大鼠手术侧热刺激-缩足时间在术后7、10、14、28天持续下降,且明显低于NS组.结论:LPS能增强CCI大鼠的热痛敏,可能是刺激了CCI大鼠持续产生免疫应激状态,导致大鼠热高敏,但其与触诱发痛敏无关.
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胰腺癌患者检测TSGF、CA199、CA242、AMS及LPS的临床意义
目的 探讨检测恶性肿瘤特异性生长因子(TSGF)、糖类抗原199(CA199)、糖类抗原242(CA242)、淀粉酶(AMS)和脂肪酶(LPS)对诊断胰腺癌的临床意义.方法 采用生化比色法检测26例胰腺癌患者、29例胰腺炎和33例正常对照组TSGF水平、酶免法(ELISA)检测CAl99、GA242水平及采用酶法检测AMS和LPS水平.结果 胰腺癌患者组TSGF、CAl99、CA242水平明显高于胰腺炎组和正常对照组(P＜0.05),AMS和LPS含量与胰腺炎组无显著性差异(P＞0.05),正常对照组AMS和LPS含量与胰腺炎组有显著性差异(P＜0.05).结论 TSGF、CAl99、CA242、AMS和LPS联合检测对诊治胰腺癌及判断预后具有重要的指导意义.
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烧伤患者早期血浆内毒素水平检测及结果分析
内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁外膜的外层脂多糖(LPS)成分,由O-特异性侧链、核心多糖和类脂A组成,其中类脂A是内毒素的主要毒性成分.内毒素多在细菌死亡.
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含与不含朱砂、雄黄的安宫牛黄丸对内毒素脑损伤大鼠皮层脑电图的影响
目的:观察含与不含朱砂、雄黄的安官牛黄丸(简称全方与简方)对内毒素脑损伤大鼠皮层脑电图作用的差异,探讨两者对脑功能影响的区别,评估朱砂、雄黄在安宫牛黄丸"醒脑开窍"中发挥的作用.方法:以内毒素尾静脉注射复制内毒素脑损伤模型,观察含与不含朱砂雄黄的安宫牛黄丸对内毒素脑损伤4h、6h大鼠脑电图δ波、β波功率及相对功率的影响.结果:LPS尾静脉注射4h、6h时,β波功率持续降低,6h降至低点.δ波功率无明显改变.β波相对功率则在6h时降低明显,δ波相对功率则持续升高,在4h、6h升高明显,即LPS引起脑电的抑制作用.全方、筒方均可降低内毒素损伤后4h、6h δ波相对功率,全方则可提高内毒素损伤后6h β波功率及相对功率,以全方高剂量作用明显;简方无明显作用,简方低剂量和全方高剂量比较差异显著.结论:全方和简方对慢波的作用相似,使慢波(δ波)的活动减少,全方高剂量可使快波(β波)活动增加,对内毒素脑损伤有明显的脑电激活作用,简方的作用不明显.这一差异的产生可能是朱砂、雄黄的去留所致.
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热休克蛋白70对内毒素诱导的肝脏NF-κB信号转导通路的影响
目的 探讨热休克蛋白70对内毒素(LPS)诱导的肝脏NF-κB信号转导通路的影响.方法 雄性昆明种小鼠70只随机分为3组,对照组(n=10)、LPS诱导组(n=30)、亚砷酸钠(SA)预处理组(n=30),分别于处理后0.5 h、1.5 h和6 h在麻醉下开腹取肝脏,Western blot方法检测肝脏NF-κB P65、NF-κB P50和IκB的表达.结果 SA预处理可抑制NF-κB P65和NF-κB P50蛋白的表达,增强肝脏IκB蛋白的表达.结论 亚砷酸钠(SA)刺激机体产生HSP70,可通过影响肝脏信号转导,从而抑制相关炎症通路,减轻LPS所致的急性肝损伤.
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TLR4-P38MAPK信号通路在LPS诱导BV2细胞中的表达及意义
目的 观察LPS诱导小胶质细胞后信号通路Toll样受体4(TLR4)-p38蛋白激酶(p38MAPK)的表达及意义.方法 体外培养BV2小胶质细胞,分为对照组、LPS诱导组(LPS刺激12 h及24 h)及SB203580干预组(LPS+SB203580诱导12 h及24 h),应用ELISA法检测各组TNF-α、IL-6水平,RT-PCR法检测各组TLR4 mRNA和p38MAPK mRNA的表达变化.结果 LPS诱导组细胞分泌TNF-α、IL-6水平显著提高,诱导24 h后细胞上清液含量分别为 (513.67±14.05) pg/mg和(396.84±15.41) pg/mg.给予 SB203580 抑制剂后TLR4 mRNA和p38MAPK mRNA 表达明显减弱,细胞分泌TNF-α、IL-6含量表达与感染组比较也明显降低.结论 LPS刺激小胶质细胞可引起TLR4-p38 MAPK信号通路的活化并释放炎性细胞因子,而SB203580则对其有明显的抑制作用,证明TLR4-p38MAPK信号通路与小胶质细胞的炎性活化密切相关.
关键词： TLR4-p38MAPK信号通路 小胶质细胞 LPS SB203580
