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虎杖苷对颈动脉粥样硬化斑块稳定性的干预研究
目的 观察虎杖有效成分虎杖苷对颈动脉粥样硬化及其斑块稳定性的干预作用.方法 将64例颈动脉粥样硬化患者按随机数字表法分为治疗组32例和对照组32例.治疗组给予虎杖苷胶囊口服,每次1粒,每日2次;对照组给予洛伐他汀片口服,每次20mg,每日1次.两组患者均连续治疗6个月.采用高分辨率超声技术观察治疗前后颈动脉内膜-中膜厚度(IMT)、斑块Crouse积分及颈动脉斑块超声病理分型改变;同时检测治疗前后血清基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及其抑制物(TIMP-1)水平变化.结果 与治疗前比较,治疗组颈动脉IMT与斑块积分显著减小(P＜0.05,P＜0.01),血清MMP-1、MMP-1/TIMP-1水平显著降低,不稳定斑块的软斑数量有减少趋势,但无统计学意义(P＞0.05).治疗组对上述指标的作用与对照组比较,差异无统计学意义.结论 虎杖有效成分虎杖苷具有抗动脉粥样硬化作用,并有助于稳定斑块,值得进一步研究.
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虎杖苷对脑缺血再灌注大鼠海马凋亡相关蛋白表达的影响
目的 观察虎杖苷对脑缺血再灌注大鼠海马caspase-8、Fas相关死亡域样白细胞介素1β转化酶抑制蛋白(Fas-associated death domain-like IL-1 beta converting enzyme inhibitory protein,FLIP)表达的影响,探讨虎杖苷对脑缺血再灌注损伤的保护机制.方法 将30只大鼠随机分为假手术组、模型组、虎杖苷组,每组10只.适应性喂养后7 d开始给药,虎杖苷组大鼠灌胃虎杖苷溶液15 mg/kg,假手术组、模型组灌胃等体积生理盐水,1次/d.连续给药后7 d,采用线栓法建立大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血模型.造模后继续给药3 d.脑缺血再灌注后72 h,采用TUNEL法观察各组大鼠脑组织神经细胞凋亡情况;采用免疫组化染色法观察各组大鼠海马caspase-8、FLIP蛋白表达.结果 缺血再灌注72 h,与模型组比较,虎杖苷组海马CA1区凋亡细胞[(23.87±3.14)个比(56.69±9.21)个]减少(P<0.01);caspase-8蛋白[平均灰度值为(148.78±6.82)比(89.61±7.76)]表达降低、FLIP蛋白[平均灰度值为(127.60±8.52)比(150.22±8.53)]表达增高(P<0.01).结论 虎杖苷可减少脑缺血再灌注大鼠海马神经细胞凋亡,其机制可能与抑制caspase-8蛋白表达,促进FLIP蛋白表达有关.
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虎杖苷对幽门螺旋杆菌脂多糖诱导的胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞凋亡及TNF-α 水平影响
目的 研究虎杖苷对幽门螺旋杆菌脂多糖诱导的胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞凋亡及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)水平影响.方法 用脂多糖灌胃构建胃黏膜损伤大鼠模型,给予虎杖苷灌胃处理,对各组大鼠对胃黏膜损伤指数进行评分.取各组大鼠胃黏膜组织,用ELISA法测定TNF-α、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)水平,用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(mal-onaldehyde,MDA)含量,用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(supev oxide dismutase,SOD)含量,TUNEL测定细胞凋亡,Western blot法测定剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved Caspase-9)蛋白水平.结果 脂多糖灌胃处理后的大鼠胃黏膜损伤指数增加,TNF-α、IL-8水平升高,SOD水平下降,MDA水平也升高,细胞凋亡率升高,Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平升高,与未用脂多糖处理的大鼠相比,差异具有统计学意义(P<0.05).虎杖苷处理后的胃黏膜损伤大鼠的胃黏膜损伤指数降低,TNF-α、IL-8水平降低,SOD水平升高,MDA水平下降,细胞凋亡率降低,Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平降低,与胃黏膜损伤大鼠模型相比,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 虎杖苷可以减少幽门螺旋杆菌脂多糖诱导的胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞凋亡,减少炎症因子合成,降低氧化损伤.
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众生丸生产过程影响因素探讨(一)
目的:探讨众生丸生产工艺过程中所存在的问题及解决方法.方法:采用HPLC法测定众生丸提取工艺过程中芍药苷、虎杖苷、黄芩苷的转移率,分析众生丸生产过程中提取工艺的影响因素.结果:动态提取是保证实际生产、还原实验室工艺研究结果的重要条件.结论:有针对性地分析研究实际生产所产生的影响因素可保证有效成分的提取率,为众生丸实际生产提供了参考.
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响应面法优化十味盆安颗粒虎杖醋延胡索的提取工艺研究
目的:优选十味盆安颗粒虎杖、醋延胡索的佳提取工艺.方法:在单因素考察的基础上,选择乙醇浓度、提取时间、提取次数三个主要因素,以提取液中虎杖苷、延胡索乙素提取率及干膏得率的综合评分为响应值,采用响应面试验优选虎杖、醋延胡索的提取工艺,并对佳工艺进行工艺验证.结果:佳提取工艺为10倍量59％乙醇加热回流提取2次,每次95 min,经三批工艺验证,虎杖苷、延胡索乙素平均提取率分别为87.80％、94.11％,干膏的平均得膏率为15.00％,综合评分为94.71,RSD=0.49％.结论:该工艺采用响应面法优化后,稳定可行,有效成分转移率高,适合产业化生产.
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RP-HPLC同时测定不同根龄虎杖根中虎杖苷和白藜芦醇
目的:建立反相高效液相色谱法同时测定不同根龄虎杖根中虎杖苷和白藜芦醇含量.方法:采用Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,流动相甲醇-1.0％磷酸水溶液(50:50),流速0.8 mL·min-1,检测波长319 nm,柱温为30℃.结果:虎杖苷和白藜芦醇的进样量分别在0.716 ～7.160 μg (r- 0.999 6)和0.740 ～7.400μg(r=0.999 8)与峰面积呈良好的线性关系；平均回收率(n=6)分别为99.7％,98.5％.结论:本方法快速简便,重复性好,专属性强,可作为虎杖根的质量控制方法.
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一测多评法测定虎杖中虎杖苷、白藜芦醇、大黄素及大黄素甲醚的含量
目的:在建立虎杖中4种成分同步测定方法的基础上,建立一测多评法的方法学考察模式,验证该方法在虎杖中应用的可行性和技术适应性.方法:以虎杖为研究对象,建立大黄素与虎杖苷、白藜芦醇、大黄素甲醚的相对校正因子,并用该校正因子进行虎杖苷、白藜芦醇、大黄素甲醚的含量计算,实现一测多评；同时采用外标法测定饮片中虎杖苷、白藜芦醇、大黄素及大黄素甲醚的含量,并比较计算值与实测值的差异.结果:11批虎杖饮片中3种成分含量的计算值与实测值的RSD＜3％,表明两者无显著差异.结论:以虎杖苷、白藜芦醇、大黄素和大黄素甲醚同步测定的一测多评法控制虎杖饮片的质量是可行的、准确的.
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众生丸生产过程影响因素探讨(二)
目的:探讨众生丸提取工艺过程中所存在的问题及解决方法.方法:采用HPLC测定众生丸提取工艺过程中咖啡酸、芍药苷、虎杖苷、黄芩苷的提取率,分析众生丸生产过程中提取工艺的影响因素.结果:黄芩、虎杖、赤芍等致密结构的根茎类药材应做必要的前处理,同时采用沸水投料是保证苷类成分提取率的重要条件.结论:研究结果中为众生丸大生产推广提供参考.
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痛风消片提取工艺优选
目的:优选痛风消片的提取工艺.方法:以虎杖苷含量为指标,选择加水量、提取时间、提取次数为考察因素,采用L9(34)正交试验优选痛风消片的水提取工艺.结果:佳提取工艺为加10倍量水提取3次,每次2h.结论:优选的提取工艺方法简单、稳定可行.
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星点设计-效应面法优选妇雅净泡腾片提取工艺
目的:采用星点设计-效应面法优选妇雅净泡腾片的提取工艺.方法:以乙醇量、乙醇体积分数和提取时间为主要影响因素,以虎杖苷含量、蛇床子素含量和浸膏得率为评价指标,用星点设计-效应面法选择提取工艺的佳条件.结果:佳提取工艺为加入10倍量60%乙醇、提取2次、每次2 h.结论:星点设计-效应面法优选妇雅净泡腾片的提取工艺方法简便,预测性好.
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响应面法优化虎杖苷转化为白藜芦醇的工艺条件
目的:应用响应面优化虎杖苷转化为白藜芦醇的酶解工艺条件,提高活性成分白藜芦醇的含量,为虎杖药材的资源开发提供参考.方法:以白藜芦醇提取量为指标,在单因素试验基础上,通过响应面法考察酶用量、酶解温度、时间及pH对白藜芦醇提取量的影响.使用UV测定白藜芦醇含量,检测波长305 nm.结果:佳酶解工艺条件为酶用量463 μL,温度43℃,酶解pH5.0,酶解时间153 min;白藜芦醇平均提取量16.46 mg·g-1,与模型预测值16.52 mg·g-1偏差较小,是未经酶转化前样品中白藜芦醇含量的3.58倍,是酶水解工艺的1.66倍.结论:通过响应面分析法优选虎杖中虎杖苷转化为白藜芦醇的工艺可行性较好,为降低白藜芦醇的工业化生产成本提供参考.
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反相高效液相色谱法测定前列片中大黄素和虎杖苷的含量
目的:测定前列片中大黄素和虎杖苷的质量标准.方法:采用反相高效液相色谱法对制剂中大黄素和虎杖苷进行含量测定.结果:大黄素在(0.0848～0.848)μg·mL-1之间呈良好的线性关系;平均加样回收率为97.6%,RSD为1.9%.虎杖苷在(0.146～0.730)μg·mL-1之间呈良好的线性关系;平均加样回收率为97.5%,RSD为1.5%.结论:该方法灵敏、简便、准确和重复性好,可作为该制剂的质量控制标准.
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痹痛消膏的醇提工艺研究
目的:优选痹痛消膏佳提取工艺.方法:采用正交试验法,以虎杖苷含量为考察指标,采用高效液相色谱(HPLC)法测定不同工艺中虎杖苷含量,对痹痛消膏的提取工艺进行探讨.结果:提取次数、醇浓度、提取时间为显著性影响因素.优工艺为:虎杖、三七、天南星、川乌、续断、辣椒,用6倍量70%乙醇回流提取3次,每次1h,过滤,合并提取液,回收乙醇,浓缩至质量密度1.20(50℃),虎杖苷提取率可达90%以上.结论:本研究建立的虎杖苷测定方法简便可行、重复性好,可为本制剂建立质量控制方法提供参考.
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高效液相色谱法测定清肝胶囊中虎杖苷的含量
目的:采用反相高效液相色谱法(HPLC)测定清肝胶囊中虎杖苷的含量.方法:以乙腈.水(22∶78)为流动相,KromasiJC18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)为固定相,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为306 nm.结果:虎杖苷在(0.098～0.490)μg范围内呈线性关系.回收率为98.39%,RSD为0.73%.结论:该方法简单,灵敏度高,可用于清肝胶囊中虎杖苷的含量检测.
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虎杖苷联合生长因子诱导人脐带间充质干细胞向神经元样细胞分化的研究
目的:探讨虎杖苷联合生长因子诱导人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)向神经元样细胞分化的过程.方法:采用原代组织贴壁法,体外分离培养hUC-MSC,流式细胞术鉴定hUC-MSC表面标志物.不同剂量虎杖苷联合生长因子诱导后显微镜下观察细胞形态变化,应用荧光定量PCR方法检测神经元特异性标志物3型β微管蛋白(β-tubulin-Ⅲ)、微管相关蛋白2(MAP2)和孤束核受体相关因子1(Nurr1)的表达,细胞免疫荧光技术检测β-tubulin-Ⅲ的蛋白表达.结果:hUC-MSC高表达CD29、CD44、CD105,极低表达CD14、CD34、CD45、HLA-DR.诱导后部分hUC-MSC分化为典型的神经元样细胞,并且β-tubulin-Ⅲ、MAP2基因表达经诱导后显著上调.Nurr1 mRNA仅在高剂量虎杖苷联合生长因子组显著上调.不同剂量虎杖苷联合生长因子组均有部分细胞表达β-tubulin-Ⅲ,对照组几乎不表达.结论:虎杖苷能够诱导hUC-MSC分化为神经元样细胞,且存在剂量依赖性,为hUC-MSC移植治疗神经系统疾病提供了实验依据.
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一测多评法测定补心软脉颗粒中红景天苷、马钱苷和虎杖苷含量
目的：建立同时测定补心软脉颗粒中红景天苷、马钱苷和虎杖苷含量的一测多评分析方法，并验证此方法在该制剂中应用的准确性和可行性。方法以红景天苷为内标物，采用外标法测定补心软脉颗粒中红景天苷的含量，建立其与马钱苷和虎杖苷的相对校正因子，通过该校正因子对马钱苷和虎杖苷进行含量计算，从而实现一测多评。同时采用常规的外标法测定补心软脉颗粒中这3种成分的含量，并将一测多评法的计算值与外标法的实测值进行比较。结果10批补心软脉颗粒一测多评法的计算结果与外标法的实测值之间没有显著差异，表明试验所得的相对校正因子具有很好的重现性和可信度。结论一测多评法可用于补心软脉颗粒多指标质量评价研究。
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虎杖、当归醇提工艺研究
目的 确定虎杖、当归的佳醇提工艺条件.方法 以浸膏得率和虎杖苷浸出量为指标,对影响浸出的主要因素进行优化.结果 佳的提取工艺条件为:加60%的乙醇回流提取2次,加醇量分别为10,8倍,提取时间分别为1.5、1.0 h.结论 优选的提取_T-艺可为工业化生产提供实验依据.
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虎杖野生植株及组织培养物中白藜芦醇和虎杖苷含量的比较
目的:比较白藜芦醇和虎杖苷在不同来源的虎杖材料中含量积累的差异,以期筛选出适宜的培养材料用于进一步的代谢调控研究.方法:采用反相高效液相色谱法对不同样品中白藜芦醇及虎杖苷的含量同时进行检测.结果:在多年生野生植株和室内人工栽培幼苗中,白藜芦醇和虎杖苷均在植物根及根茎部特异性累积,其含量要远远高于叶片和茎段.其中,以室内人工栽培3个月的幼苗中有效成分含量较高,虎杖苷的积累量为1.27%,是野生植株的1.25倍,白藜芦醇含量(0.401%)则接近野生植株水平.从虎杖的各种组织培养物中也可检测到白藜芦醇和虎杖苷的存在,但是二者含量的高低与培养物的生长速度、生理状况及发育时期密切相关.在几种培养物中,以毛状根的培养具潜力,离体培养30d后,其干重增长率为8.29,分别是自然根和悬浮细胞的8.4倍和192.8倍,而且还可积累一定量的虎杖苷(0.037%)和白藜芦醇(0.007%).结论:所建立的分析检测方法,具有快速、简便和准确的特点,尤其适于大批量生物样品的同时测定.在几种不同来源的虎杖材料中,毛状根是适宜大规模培养并可持续收获有效成分的培养物.
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短萼仪花叶化学成分研究
目的:研究短萼仪花叶的化学成分.方法:利用正相和反相硅胶,Sephadex LH-20,HPLC等色谱技术分离纯化,通过现代谱学方法及其理化性质鉴定其化学结构.结果:从短萼仪花叶乙醇提取物的醋酸乙酯部分分离并鉴定了7个化合物,其结构分别鉴定为2-O-[1-(3-甲基丁酰基)间苯三酚]-β-D-吡喃葡萄糖苷(1),3-β-D-吡喃葡萄糖氧基-4,5-二甲氧基-苯甲酸(2),苯甲醇O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3),虎杖苷(4),槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(5),没食子酸乙酯(6),苯甲醇O-(6-β-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(7).结论:以上化合物均为从该植物中首次获得,其中化合物2,3,5～7为首次从仪花属植物中分离得到.
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虎杖苷对小鼠糖尿病心肌肥厚的保护作用及机制研究
观察虎杖苷(PD)对小鼠糖尿病心肌肥厚的保护作用,并探讨其可能机制.利用小剂量STZ连续5d腹腔注射建立小鼠糖尿病模型,以心肌肥厚指数(LVHI,左心室/右心室+室间隔)、左心室/体重(LV/BW)、组织学检查和心房利钠因子(ANF) mRNA表达为心肌肥厚指标;监测空腹血糖值(FBG),并检测血清胰岛素含量、血浆糖化血红蛋白(HbA1c)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOME.IR);分别用qRT-PCR和Western blot方法检测mRNA及蛋白表达.结果显示,模型组小鼠FBG持续超过11.1 mmol·L-,BW明显降低,胰岛素含量、HbA1c和HOME.IR明显升高,提示糖尿病模型建立且保持稳定;糖尿病小鼠LVHI,LV/BW及ANF mRNA均增加,细胞表面积增大,提示小鼠出现心肌肥厚.同时,模型组PPARβ mRNA和蛋白表达降低,NF-κB p65,COX-2及iNOS表达则明显增加.给予PD(50,100 mg·kg-1·d-1)治疗后,糖尿病小鼠BW增加,FBG,胰岛素及HbA1c含量降低,胰岛素抵抗改善,心肌肥厚指标亦明显好转,提示PD具有保护糖尿病心肌肥厚的作用.同时,PD使PPARβ的表达上调,并抑制NF-κB p65,COX-2及iNOS的表达,提示PD的保护作用可能与其激活PPARβ,抑制NF-κB及COX-2,iNOS信号通路有关.
