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左西孟旦对LPS诱导的乳鼠心肌细胞损伤的保护作用
目的:探讨左西孟旦对LPS诱导的乳鼠心肌细胞损伤的保护作用.方法:将原代培养的SD乳鼠的心肌细胞分为3组:对照组、模型组和左西孟旦干预组.模型组和左西孟旦干预组用10 mg/L的LPS处理6 h建模,其中左西孟旦干预组于造模前用终浓度为0.30 μmol/L的左西孟旦预处理24 h.全自动生化仪检测3组细胞培养液LDH、CK含量;ELISA检测培养液TNF-α、IL-6含量;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase-3及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达.结果:与对照组比较,模型组细胞培养液中LDH、CK、TNF-α和IL-6含量增加,细胞凋亡率升高,凋亡蛋白Cleaved-Caspase-3表达增高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(P<0.05);与模型组比较,左西孟旦干预组细胞培养液中LDH、CK、TNF-α、IL-6含量减少,细胞凋亡率降低,Cleaved-Caspase-3表达量降低,Bcl-2表达增高(P<0.05).结论:左西孟旦对LPS诱导的乳鼠心肌细胞损伤有保护作用,其机制可能与减少炎症因子释放,抑制Caspase-3蛋白的表达,促进Bcl-2蛋白的表达有关.
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LPS介导的炎症反应过程及作用机制
LPS是革兰氏阴性菌的细胞壁主要组成成分,细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来.其毒性成分主要为类脂质A,能够引起哺乳动物细胞发生免疫反应,从而导致促炎因子的释放.通过细胞表面的先天免疫分子受体识别LPS是感染性休克的重要过程.严重感染,如肺炎、脓毒血症等是进入重症监护室的主要原因.LPS受体的识别、信号转导机制的研究是解决感染引起的炎症反应的重要环节,理解类脂A的生化修饰过程及其在发病机理过程中的作用可为这类疾病的治疗提供新的治疗方法.
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中华绒螯蟹乙酰胆碱酯酶免疫调节作用的初步研究
目的:分析中华绒螯蟹乙酰胆碱酯酶的免疫调节作用.方法:利用LPS和TNF-α作为免疫激活因子,刺激中华绒螯蟹的免疫系统,然后检测被激活的免疫系统对中华绒螯蟹乙酰胆碱酯酶的表达水平和酶活力的影响.结果:LPS和TNF-α可显著提高中华绒螯蟹血淋巴细胞中AChE基因的表达水平和血淋巴上清液中ACh的浓度.结论:中华绒螯蟹乙酰胆碱酯酶在其免疫应答反应过程中发挥着重要的作用.
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黄芩苷对LPS刺激诱导的未成熟树突状细胞(DC2.4)的作用
目的 研究黄芩苷(BAI)对LPS刺激诱导的DC2.4细胞的增殖、成熟及抗原呈递功能的影响,为进一步揭示黄芩苷抗炎的免疫细胞分子机制提供基础.方法 ①采用CCK8法测定黄芩苷对LPS刺激的DC2.4增殖的影响;②采用流式细胞术检测BAI对LPS刺激的DC2.4细胞成熟标志分子CD86及抗原呈递分子MHCⅡ的影响.结果 ①CCK8实验结果显示,DC2.4细胞培养12至24h后增殖明显(P＜0.05),24h达到高峰,其后增殖速度降低;加入LPS作用48h后,DC2.4细胞仍有明显增殖(P＜0.05);单用BAI高、中浓度在12h、24h时明显抑制DC2.4细胞增殖(P＜0.05),单用BAI低浓度在3个时间点对DC2.4细胞增殖无明显抑制作用;在LPS+ BAI组中,高、中浓度在3个时点均可明显抑制DC2.4的增殖,低浓度的BAI使LPS诱导的细胞增殖水平接近对照组细胞;②流式细胞仪检测结果表明,LPS组的CD86和MHCⅡ分子表达显著增加(P＜0.01),BAI组的CD86和MHCⅡ分子表达有增加趋势(P＞0.05),而LPS+ BAI组的CD86和MHCⅡ表达显著下降(P＜0.05).结论 黄芩苷抗炎的免疫分子机制可能与其抑制病原体刺激未成熟树突状细胞的成熟及其抗原呈递分子MHCⅡ的过度表达相关.
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青赤散灌肠对溃疡性结肠炎大鼠血清LPS、TNF-α及结肠上皮细胞凋亡的影响
[目的]研究青赤散灌肠对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠血清内毒素(LPS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及结肠上皮细胞凋亡的影响,探讨青赤散灌肠治疗UC的可能作用机制.[方法]将40只大鼠随机分为正常组、模型组、中药组及西药组,每组10只.除正常组外,其他3组采用三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇诱导大鼠UC模型.造模后,正常组和模型组大鼠均给予0.9％ NaCl注射液5 ml/kg灌肠,中药组给予青赤散按生药量19 g/kg灌肠,西药组给予美沙拉秦灌肠液(莎尔福)按生药量0.4 g/kg灌肠,连续灌肠14 d.检测各组大鼠血清LPS、TNF-α含量及结肠上皮细胞凋亡情况.[结果]与正常组比较,给药后模型组大鼠血清LPS、TNF-α含量升高,结肠上皮细胞凋亡增加(P＜0.05);与模型组比较,中药组和西药组大鼠血清LPS、TNF-α含量降低,结肠上皮细胞凋亡减少(P＜0.05),中药组与西药组疗效相当.[结论]青赤散灌肠可能通过降低UC大鼠血清LPS、TNF-α含量,减少结肠上皮细胞凋亡而起到治疗UC的作用.
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感染性脑损伤中的细胞凋亡及凋亡诱导因子的表达及意义
目的:探讨凋亡在感染性脑损伤的发生发展以及caspase非依赖性途径在感染性脑损伤机制中的作用.方法:SD大鼠160只,随机分为NS组和LPS组各80只,LPS组颈内动脉注射LPS制作感染性脑损伤模型,NS组颈内动脉注射NS,2组均观察注射后6、12、24、48及72 h 5个时间点,检测各组不同时间点脑组织的EB含量,免疫组化检测脑组织NSE、GFAP蛋白及凋亡诱导因子(AIF)的表达,并应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)技术检测细胞凋亡数.结果:LPS组NSE、GFAP、AIF表达及细胞凋亡数均为6 h开始增加,12 h表达进一步增强,24 h达高峰,48-72 h时渐减少,但均明显高于NS组.结论:细胞凋亡参与感染性脑损伤细胞发展过程,Caspase非依赖性途径通过AIF的表达发挥重要作用.
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14-3-3蛋白在BV-2细胞中的表达及LPS对其表达的影响
目的 研究14-3-3蛋白在中枢神经系统小神经胶质细胞中的表达分布情况及LPS刺激后其表达变化;探讨14-3-3蛋白与小神经胶质细胞释放炎症因子的关系.方法 应用小鼠小神经胶质细胞株BV-2作为体外小神经胶质细胞的模型,以LPS刺激其活化,应用免疫荧光检测14-3-3蛋白ζεθγ亚型在BV-2细胞中的表达、免疫印迹技术检测14-3-3蛋白在LPS刺激后的表达变化,ELISA检测IL-1β的表达.结果 14-3-3ζεθγ蛋白亚型在BV-2细胞中均有表达,主要分布在细胞浆;LPS刺激BV-2细胞活化后释放IL-1β,同时14-3-3蛋白表达下降.结论 BV-2细胞高表达14-3-3蛋白,LPS刺激后表达下降,提示14-3-3蛋白参与了中枢神经系统免疫应答的调节.
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LPS对人牙周膜细胞Toll样受体4及下游炎症因子表达的影响
目的：观察革兰氏阴性菌外膜成分脂多糖（LPS）对牙周膜细胞（PDLCs）Toll样受体4（TLR4）及下游炎症因子表达的影响。方法：用浓度为10μg／mL的LPS对牙周膜细胞进行刺激，Western Blot检测牙周膜细胞上TLR4受体表达，同时ELISA检测培养基上清中炎症因子TNF－α、IL－1β的含量。结果：加入LPS后，牙周膜细胞上TLR4蛋白表达增强，炎症因子TNF－α、IL－1β含量增多，且随LPS的刺激时间增加而呈上升趋势。结论：LPS促进PDLCs的TLR4表达，并导致炎症因子分泌增加，TLR4信号通路在牙周炎发病过程中具有重要作用。
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TRPM7参与诱发心肌纤维化作用及药物干预
目的:研究脂多糖(LPS)引起的成纤维细胞上TRPM7通道的上调和细胞增殖间的关系,并利用黄芪甲苷进行干预.方法:分离大鼠乳鼠心脏成纤维细胞,分成7组,正常组、模型组(LPS 0.1μg·mL-1、1μg·mL-1)、TRPM7通道阻断剂组(carvacrol 500μmoL·L-1、2-APB 100μmoL·L-1)、黄芪甲苷(ASGⅣ)组(1 μmoL·L-1、10μmoL·L-1),后4组在加入1μg·mL-1 LPS的同时,分别给予500μmoL·L-1carvacrol、100μmoL·L-1 2-APB、1μmoL·L-1 ASGⅣ、10μmoL·L-1 ASG Ⅳ,孵育72h,通过全细胞膜片钳技术检测TRPM7电流的变化,利用RT-PCR和Western Blot方法分别测定TRPM7通道的基因和蛋白的表达,利用MTT方法测定成纤维细胞的增殖能力.结果:与正常组相比,LPS两个组的TR-PM7电流大小及基因、蛋白表达明显升高(P＜0.01);与模型组相比,carvacrol、2-APB通道阻断剂组的电流大小、基因和蛋白表达显著降低(P＜0.01);此外,ASG Ⅳ对电流、基因和蛋白表达也有不同程度的抑制作用(P＜0.05).模型组的成纤维细胞增殖能力明显强于其他组(P＜0.01),通道阻断剂组及黄芪甲苷组均能不同程度抑制细胞的异常增殖(P＜0.01).结论:脂多糖(LPS)能够使成纤维细胞上TR-PM7电流大小及通道表达上调,且该上调能增强细胞增殖能力,而ASG Ⅳ能通过下调TRPM7表达抑制成纤维细胞的增殖.
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芍药苷对大鼠颈椎间盘纤维环细胞炎症模型IL-1、IL-6和TNF-α表达的影响
目的:观察芍药苷对体外培养的大鼠颈椎间盘纤维环细胞炎症模型IL-1β、IL-6和TNF-α表达的影响.方法:分离3周龄SD大鼠颈椎间盘纤维环细胞,培养至取第三代进行甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色鉴定.鉴定成功后,随机分为空白组、模型组和芍药苷组,其中模型组与芍药苷组均采用脂多糖(LPS)诱导,建立体外纤维环细胞的炎症模型,并确定干预的佳浓度和时间;于造模成功后,芍药苷组分别用不同浓度芍药苷进行干预,其余各组不进行干预,24h后,收集各组细胞上清液,通过ELISA法检测IL-1β、IL-6和TNF-α的表达量.结果:与空白组比较,24h时,LPS10ng/mL、100ng/mL、1000ng/mL、2000ng/mL组细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α含量均显著高于空白组(P＜0.01).其中,LPS浓度为10ng/mL时,IL-1β、IL-6和TNF-α表达高于其余各组,差异具有统计学意义(P＜0.01);10ng/mL LPS分别干预纤维环细胞4h、8h、12h、24h、48h,细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达均高于空白组,且24h时细胞上清中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达均高于其余各组.芍药苷组采用浓度为20μg/mL、200μg/mL、2 000μg/mL芍药苷溶液干预纤维环细胞的炎症细胞24h,细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达均低于空白组,差异具有统计学意义(P＜0.01),且芍药苷浓度为200μg/mL时IL-1β、IL-6和TNF-α均低于20μg/mL、2 000μg/mL时,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:LPS浓度为10 ng/mL时,干预24h时,可成功建立体外纤维环细胞炎症模型;芍药苷浓度为200 μg/mL时可有效抑制纤维环细胞炎症模型IL-1β、IL-6和TNF-α的表达.
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内毒素耐受的研究进展
巨噬细胞被少量内毒素多次刺激后则能引起内毒素耐受现象,主要机制为LPS信号转导功能障碍.全身性炎症反应综合征以及脓毒症患者均具有内毒素耐受的特征,可作为其免疫功能失调的重要标志.
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脓毒症的发病机制及其治疗策略新认识
脓毒症是临床上常见的严重并发症,其发病机制主要是LPS介导的信号过度激活所致的炎症、免疫反应严重失衡而失去清除病原体能力的病理状态,调节炎性介质、aPC、糖皮质激素、胰岛素、早期组织供氧等治疗新措施提高了脓毒症患者的生存率,而MIF,HMGB-1,OXPAPC,C5a抗体,Rip2等作为治疗新靶点有望取得效果.
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银杏总黄酮对脂多糖诱导的小胶质细胞炎症反应的抑制作用
目的 探讨银杏总黄酮(TFG)对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞(MG)炎症反应的抑制作用.方法 通过LPS诱导小胶质细胞系(BV-2)小胶质细胞活化建立神经系统炎症模型,分别用不同浓度TFG(0、40、80、120和160 mg/mL)处理细胞,CCK-8方法检测各组细胞活性,选取TFG(80 mg/mL)预处理细胞,倒置相差显微镜观察小胶质细胞形态变化.ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,Western blot检测Toll样受体4(TLR4)、抑制性卡巴蛋白(IκB-α)、核因子κB(NF-κB)/p65蛋白表达水平.结果 低剂量组TFG(40和80 mg/mL)对小胶质细胞活性无明显影响,差异无统计学意义(P＞0.05);高剂量的TFG(120和160 mg/mL)显著抑制小胶质细胞活性,差异具有统计学意义(P＜0.05).与LPS组相比,TFG+LPS组显著抑制LPS诱导的小胶质细胞形态变化及细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达和释放(P＜0.05);明显降低TLR4蛋白表达水平(P＜0.05);显著增加胞质内IκB-α的表达(P＜0.05);抑制NF-κB/p65向核内转移(P＜0.05).结论 TFG抑制LPS所诱导的小胶质细胞炎症反应效果良好,对以神经炎症为病理特征的神经退行性病变有一定治疗作用.
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去甲斑蝥素对LPS诱导的体外培养的肝细胞损伤的保护作用
目的:通过体外观察去甲斑蝥素(NCTD)对LPS所致肝细胞损伤和TNF-α表达的影响,探讨NCTD的作用及其机制.方法:胶原酶Ⅳ灌流分离培养大鼠肝细胞,将细胞分为对照组、LPS组、NCTD组.对照组用无血清DMEM培养,LPS组用LPS (40 mg/L)诱导,NCTD组用不同浓度NCTD(0.5,1.0,2.5 μg/mL)与LPS (40 mg/L)共同作用,各组作用时间均为24 h.MTT法检测肝细胞的增殖情况、测定培养上清液乳酸脱氢酶(LDH)含量,ELISA法检测TNF-α和IL-6表达.结果:LPS (40 mg/L)作用于原代培养大鼠肝细胞24 h后,与对照组相比,细胞生长抑制率达27％,培养上清液LDH含量增加20倍,TNF-α和IL-6的表达以及NF-κB DNA结合活性均明显增加(P＜0.05).给予不同浓度NCTD后,培养上清液LDH,TNF-α和IL-6的含量及NF-κB DNA结合活性均明显下降,且呈量效关系.结论:NCTD拮抗LPS所致的肝细胞损伤,其保护作用的机制可能与其抑制TNF-α和IL-6的表达有关.
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Troglitazone对高糖和LPS诱导的人肾小球mPGEs蛋白表达的抑制作用
目的:研究PPAR-γ激动剂troglitazone对LPS或高浓度葡萄糖作用的体外培养的人肾小球mPGEs蛋白表达水平的影响.方法:用LPS或高浓度葡萄糖分别与不同浓度troglitazone作用体外培养的人肾小球,ELISA法检测上清液中mPGEs浓度.结果:LPS(10 μg/ml) 或5%葡萄糖均可使体外培养的人肾小球mPGEs明显增高.10～20 nmol/L的troglitazone可明显抑制LPS(10 μg/ml)和5%葡萄糖诱导的大鼠系膜细胞mPGEs蛋白表达水平的增高(P<0.05).结论:LPS和5%葡萄糖可诱导体外培养的人肾小球mPGEs蛋白表达水平明显增高,PPAR-γ激动剂troglitazone可明显抑制两者所诱导的体外培养的人肾小球mPGEs蛋白表达水平的增高.
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阿托伐他汀对脂多糖诱导的人肺上皮细胞分泌PGE2和IL-6的影响
目的:探讨阿托伐他汀(atorvastatin)对经脂多糖(LPS)诱导人肺上皮细胞(A549)的炎症细胞因子PGE2和IL-6分泌的影响.方法:对LPS诱导的人肺上皮细胞给予不同浓度的阿托伐他汀干预,同时设置对照组,分别收集其培养上清液,采用ELISA方法,比较PGE2和IL-6浓度.结果:①在不同浓度的LPS诱导下,肺泡上皮细胞不同时间分泌PGE2和IL-6浓度明显高于未经LPS诱导的对照组(P<0.05).②阿托伐他汀不同浓度的干预,肺上皮细胞PGE2和IL-6的分泌浓度较无阿托伐他汀干预组均有不同程度的降低(P<0.05).结论:阿托伐他汀能降低脂多糖诱导的人肺上皮细胞炎症因子PGE2和IL-6的分泌, 提示他汀类药物对肺上皮细胞有直接抗炎作用.
关键词： 阿托伐他汀 肺上皮细胞(A549) LPS PGE2 IL-6 -
LPS所介导的信号转导通路研究进展
LPS是革兰氏阴性细菌的细胞壁主要组成成分,对LPS的识别与信号转导是机体自身防御反应的重要环节,同时也是导致内毒素性休克、全身炎症反应综合征和多器官功能衰竭等疾病的重要机制.LPS可通过LPS-LBP-sCD14三联复合物作用于TLR4并激活MyD88,活化的MyD88可聚集并结合IRAK1和IRAK2,然后作用于肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6),进一步激活MAPK和NF-κB信号转导通路.活化的MAPK和NF-κB信号转导通路是LPS所导致的细胞反应与炎症细胞因子如TNF-α, IL-6和IL-8等产生的重要分子机制.
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脆弱类杆菌脂多糖(LPS)对正常人外周血单个核细胞分泌IL-10及凋亡的影响
目的 通过研究脆弱类杆菌LPS对正常人外周血单个核细胞(PBMC)分泌IL-10及凋亡的影响,探讨脆弱类杆菌感染的机制,为临床上防治厌氧菌感染提供科学的理论依据.方法 采用脆弱类杆菌临床分离菌和标准菌株(NCTC9343)提取的LPS,以不同浓度梯度作用于正常人外周血单个核细胞,24h后收集培养细胞上清液,运用ELISA法检测上清液中IL-10的含量变化,溴乙啶-吖啶橙染色检测凋亡百分率.结果 脆弱类杆菌LPS对正常人PEMC分泌有显著刺激作用,并能诱导其凋亡(P<0.01).脆弱类杆菌临床分离菌与标准菌株LPS对正常人PBMC分泌IL-10及凋亡具有相同效应,两组之间无明显差异(p>0.05).结论 脆弱类杆菌LPS对正常人PBMIL-10的分泌有刺激作用,并能诱导其凋亡.
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重组人生长激素对内毒素诱导的巨噬细胞凋亡和NF-κB的影响
目的 观察内毒素(LPS)对巨噬细胞的凋亡作用以及重组人生长激素(rhGH)的干预效果.方法 巨噬细胞系U937细胞经传代培养24 h后,换用舍LPS(40μg/mL)和LPS+rhGH(4u/L)新鲜培养液继续培养16 h,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫细胞化学法检测巨噬细胞内NF-κB的活化程度.结果 U937细胞经LPS和LPS+rhGH作用16 h后,rhGH明显降低LPS诱导U937细胞的细胞凋亡率,并可抑制NF-κB的活化.结论 rhGH能抑制LPS诱导的U937细胞凋亡,并对NF-κB的活化有一定的抑制作用.
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芪参活血颗粒对脓毒症大鼠心肌保护作用的研究
目的 观察脓毒症大鼠心脏功能、心肌力学的改变并探讨中药芪参活血颗粒对心脏的保护作用.方法 96只wistar大鼠随机分为对照组(32只)、脂多糖(LPS)组(32只,予LPS 4 mg/kg静脉注射)及LPS+芪参活血颗粒组(32只,予芪参活血颗粒84 g生药/kg灌胃,1 h后注射LPS).各组动物均于实验前(0点)及给药后2、4及6 h采血,每时间点8只.经右颈总动脉左心室内插管,监测各组动物左心室功能变化并检测血中肿瘤坏死因子(TNF-α)、血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)、肌钙蛋白T(TNT)浓度.结果 脓毒症状态下TNT显著升高,应用芪参活血颗粒后明显降低[(1.30±0.53)μg/L vs(0.68±0.82)μg/L,P＜0.05].脓毒症状态下左心室收缩峰压(LVPP)、左心室压力上升(下降)大速率(±dp/dt)均有不同程度变化,左心室舒张末期压(LVEDP)升高,干预治疗后可明显改善.脓毒症状态下,TNF-α、Ang-Ⅱ浓度均明显升高,芪参活血颗粒可显著降低其浓度,分别为[(10.16±1.74)pmol/L vs(7.60±1.79)pmol/L,P＜0.05]和[(1089.96±365.4)ng/L vs(625.30±224.71)ng/L P＜0.01].结论 脓毒症状态下,心肌可发生明显损伤;应用芪参活血颗粒可明显减轻内毒素对心肌的损伤.
