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薯蓣皂苷片对类风湿性关节炎大鼠血清OPG/RANKL水平表达的干预作用
目的 观察薯蓣皂苷片对类风湿性关节炎模型大鼠血清骨保护素(OPG)、核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)表达水平的影响.方法 SD大鼠,随机分为6组,每组10只,其中选取10只作为正常组,其余大鼠采用弗氏完全佐剂复制类风湿性关节炎动物模型,并将造模成功的类风湿性关节炎大鼠随机分为模型组、阳性组(甲氨蝶呤组,3.8mg·kg-1)、薯蓣皂苷片高、中、低剂量组(10 mg·mL-1、20 mg·mL-1、30mg·mL-1),连续灌胃给药治疗24 d后处死,采用ELISA法检测血清OPG、RANKL水平.结果 薯蓣皂苷片各剂量组大鼠血清OPG、RANKL水平分别为(95.27±4.24)、(76.44±4.09)、(69.26±5.63)pmol·L-1和(96.07±4.94)、(85.41±3.75)、(67.53±2.23)pmol·L-1,与模型组((53.92±2.83)pmol·L-1和(116.18±3.02)pmol·L-1)相比均有显著性差异(P<0.05);OPG/RANKL比值显著高于模型组.结论 薯蓣皂苷片可能通过调整OPG/RANKL动态平衡而对破骨细胞功能产生影响,从而防止骨破坏.
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杜仲含药血清对成骨细胞的影响
目的:研究不同浓度杜仲含药血清对体外培养小鼠MC3T3-E1 Subclone 14成骨细胞增殖、分化的影响.方法:大鼠灌胃给予杜仲后制备含药血清,取MC3T3-E1 Subclone 14成骨细胞,分别加入空白血清(空白对照组)和含2％、5％、10％的杜仲含药血清(给药组)的培养基培养,用MTT法检测MC3T3-E1 Subclone 14成骨细胞增殖情况,ELISA法检测细胞中的碱性磷酸酶(ALP)、骨钙蛋白(OTC)、破骨细胞抑制因子与核因子κB受体活化因子配体(OPG/RANKL)系统活性.结果:与空白对照组同浓度比较,杜仲含药血清各浓度明显促进细胞增殖并上调ALP、OTC、OPG/RANKL的比值(P＜0.05,P＜0.01).结论:杜仲能促进体外培养的MC3T3-E1Subclone 14成骨细胞增殖与分化.
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前列地尔对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化及TGF-β1、OPG/RANKL的影响
目的 分析采用前列地尔对慢性心力衰竭大鼠干预后,对心肌纤维化及组织转化生长因子β1(TGF-β1)、骨保护素(OPG)/КB受体活化因子(RANKL)的影响.方法 研究选取40只健康雄性SD大鼠,随机分为模型组和假手术组.采用腹主动脉萎缩法,建立心脏压力负荷超载慢性心力衰竭模型,假手术组大鼠仅将手术丝线穿过腹主动脉;模型组的30只大鼠随机分为未治疗组、低、中、高剂量组,低剂量组给药浓度1.25 μg/kg,中剂量组2.50 μg/kg,高剂量组5.00 μg/kg,未治疗组及假手术组每天给予0.50 ml/kg的生理盐水进行干预,共治疗2周.采用超声心电图评估大鼠心功能,检测心肌组织胶原纤维及胶原,并使用RT-PCR检测基质金属蛋白酶(MMP)、TGF-β1、OPG/RANKL mRNA水平.结果 未治疗组及前列地尔干预组大鼠左心室收缩期末内径(LVESD)、左心室舒张期末内径(LVEDD)水平显著高于假手术组(P<0.05),左心室短轴缩短率(LVFS)、左心室射血分数(LVEF)水平显著低于假手术组(P<0.05);未治疗组及前列地尔干预组大鼠心肌组织胶原及胶原容积分数(CVF)水平显著高于假手术组(P<0.05),前列地尔干预各组大鼠心肌组织胶原及CVF水平显著低于未治疗组(P<0.05),各指标改善情况呈明显剂量依赖性(P<0.05);未治疗组及前列地尔干预组大鼠心肌MMP、TGF-β1、OPG、RANKL水平显著高于假手术组(P<0.05),前列地尔干预各组大鼠心肌组织MMP、TGF-β1、OPG、RANKL mRNA水平显著低于未治疗组(P<0.05),前列地尔各干预组的各指标改善情况呈明显剂量依赖性(P<0.05).结论 采用前列地尔对慢性心力衰竭大鼠干预后,可有效减轻大鼠心肌纤维化,降低MMP、TGF-β1、OPG及RANKL水平,且作用效果呈明显剂量依赖性.
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hsa-miR-655靶向CLCF1基因对人成骨肉瘤MG63细胞OPG/RANKL系统表达的影响
目的 探讨hsa-miR-655通过靶向调控心肌营养素样细胞因子1(cardiotrophin-like cytokine factor 1,CLCF1)基因表达,对人成骨肉MG63细胞系增殖、护骨素(osteoprotegerin,OPG)和核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-KBligand,RANKL)表达的影响.方法 通过hsa-miR-655慢病毒转染MG63细胞进行功能获得实验.实验分阴性对照组(NC组)和hsa-miR-655过表达组(OE组),荧光显微镜和流式细胞术(flow cytometry analysis,FCM)评估转染效率,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖能力,FCM检测细胞周期分布,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa-miR-655、CLCF1、OPG和RANKL mRNA的水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测CLCF1、OPG及RANKL蛋白的变化.结果 荧光显微镜和FCM显示对照组和miR-655过表达组感染效率为80％以上;qRT-PCR结果显示,相对于对照组,过表达组MG63细胞hsa-miR-655表达上调,差异有统计学意义(P=0.0004);CLCF1 mRNA水平未见明显变化(P =0.0986);过表达组OPG(P=0.0384)、RANKL(P=0.0007) mRNA均有所上调,差异具有统计学意义(P＜0.05);Western blot结果显示,过表达组CLCF1蛋白水平表达下调(P =0.0053);与对照组比较,过表达组OPG(P=0.0021)、RANKL(P=0.0002)蛋白均上调,而OPG/RANKL比值却降低(P=0.0078),差异具有统计学意义(P ＜0.05);CCK-8细胞增殖实验结果显示,miR-655过表达后抑制MG63细胞增殖;FCM检测细胞周期结果显示,miR-655过表达后MG63细胞G0/G1期细胞比例增加,S期减少,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 hsa-miR-655通过负调控CLCF1基因的表达,抑制MG63细胞的增殖,下调OPG/RANKL的比值.
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橄榄苦苷对成骨细胞 OPG／RANKL mRNA 的影响
目的：通过测定橄榄苦苷对成骨细胞OPG／RANKL mRNA的表达，探讨其治疗骨质疏松症的机制。方法运用荧光定量PCR技术（ RT-PCR）检测不同浓度橄榄苦苷不同时间对成骨细胞OPG／RANKL mRNA表达量。结果与阴性对照组比较， RT-PCR结果显示不同浓度的橄榄苦苷均能促进OPG mRNA的表达，并且抑制成骨细胞RANKL mRNA 的表达。结论橄榄苦苷可能通过抑制RANKL分泌来降低破骨细胞活性，同时促进成骨细胞分泌OPG，使之与RANKL结合增多，间接作用于破骨细胞，使其活性降低，而达到治疗骨质疏松的目的。
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淫羊藿苷对人成骨样细胞成骨分化及OPG/RANKL表达的影响
目的 探讨淫羊藿苷对人成骨样细胞(MG-63)成骨分化及OPG/RANKL表达的影响.方法 用1 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L、1μmol/L、10μmol/L 5种浓度的淫羊藿苷对MG-63进行干预,并同时进行成骨诱导,RT-PCR在第3天检测其细胞增殖基因MYC、CDK7表达量,在第6天检测成骨分化标志基因RUNX2、COL1A1及OPG、RANKL的表达量.结果 对成骨分化相关基因,10 nmol、1μmol干预的MG-63 RUNX2基因表达量较1 nmol及10μmol的高(P＜0.05),与100 nmol及空白对照组没有明显差别(P＞0.05),10μmol的RUNX2蛋白表达量较其余各组更高;COLIA1的基因表达呈剂量依赖型,随浓度的增加而升高,10μmol的表达量较其余各组有明显升高(P＜0.05),其蛋白表达也更多;RANKL的表达量极低,且在各组之间均无明显差异(P＞0.05);OPG的表达在lμmol浓度时较100 nmol、10μmol明显增高(P＜0.05),与1 nmol、10 nmol及空白组没有统计学差异(P＞0.05);与细胞增殖相关的MYC的表达各组之间均没有差异(P＞0.05),而CDK7的表达均较空白组降低(P＜0.05).结论 10μmol/L的淫羊藿苷能够明显促进MG-63细胞的成骨分化,但并不通过影响OPG/RANKL起效.
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超声对大鼠牙骨质修复过程中TGF-β1表达和OPG/RANKL表达比值的影响
目的:研究超声在大鼠牙骨质修复过程中对转化生长因子-β1(TGF-β1)表达和骨保护蛋白、核因子-KB受体活化因子配体(OPG/RANKL)表达比值的影响.方法:选择32只健康雄性Wistar大鼠建立正畸性牙根吸收动物模型,随机分为4组,每组8只,分别为空白对照组,单纯加力组,自然修复组,超声修复组,其中用频率1.5MHz,强度100MW/cm2的治疗超声对超声修复组的实验牙在2周的修复期进行每天15min治疗超声照射.2周治疗结束后,取上颌第一磨牙及其牙周组织,制作以上颌第一磨牙为中心的,近远中方向的组织切片,行TGF-β1,OPG,RANKL,免疫组化染色,光镜观察并作免疫组化光密度分析,对实验结果进行单因素方差分析.结果:超声修复组TGF-β1的光密度值(0.36228±0.02833),明显高于自然修复组(0.24576±0.03183),差异有统计学意义.超声修复组OPG/RANKL光密度值比值(1.1126±0.096),也明显高于自然修复组(0.7835±0.067)差异有统计学意义.结论:超声通过上调TGF-β1表达,改变OPG/RANKL的比值,促进牙骨质的修复重建.
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跳跃性应力刺激对大鼠胫骨OPG、RANKL及骨代谢的影响
目的:研究跳跃性应力刺激对大鼠骨组织的影响,探讨骨质破坏发生的分子生物学机制.方法:48只8周龄雄性SD大鼠,随机平均分为跳跃组和对照组,跳跃组按训练周数标记为J2、J4和J6组,相应对照组为C2、C4和C6组.跳跃组按计划进行跳跃运动训练,对照组安静饲养.每隔2周各组分别处死8只,检测血清碱性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸酸性磷酸(StrACP),取一侧胫骨制作HE石蜡切片,另一侧胫骨应用RT-PCR法检测OPG、RANKL mRNA表达.结果:(1)与对照组相比,J6组骨胶原纤维和骨膜排列紊乱,骨皮质出现较大程度破坏,空腔增多.(2)3个跳跃组大鼠血清ALP和StrACP浓度均高于其对照组(P＜0.05).(3)J2组大鼠胫骨OPG mRNA表达量显著低于C2组(P＜0.05),而J6组OPG mRNA表达显著高于C6组(P＜0.01);J6组RANKL mRNA表达量显著高于C6组(P＜0.01).结论:过度跳跃性应力刺激后,大鼠胫骨OPG和RANKL表达增加,参与以骨转换率升高为特征的骨质破坏过程.
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独活寄生汤含药血清对成骨细胞OPG/RANKL mRNA表达的影响
目的:检测独活寄生汤含药血清对成骨细胞OPG/RANKL mRNA表达的影响,从分子生物学层面探究独活寄生汤治疗骨质疏松症的机理.方法:原代体外培养SD乳大鼠成骨细胞,分别用生理盐水血清对照组、独活寄生汤含药血清低浓度,中浓度,高浓度作用于成骨细胞,采用碱性磷酸酶(ALP)检测成骨细胞活性,RT-PCR法检测独活寄生汤含药血清对成骨细胞OPG、RANKL mRNA表达的影响.结果:独活寄生汤能增加成骨细胞内碱性磷酸酶的活性,RTPCR结果显示不同浓度的独活寄生汤含药血清能促进OPGmRNA的表达,并且抑制成骨细胞RANKL mRNA的表达.结论:独活寄生汤含药血清一则可以通过抑制RANKL分泌从而降低破骨细胞活性;二则促进成骨细胞分泌OPG,使之与RANKL结合增多,进而使破骨细胞活性降低,从而达到治疗骨质疏松的目的.
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糖皮质激素诱导肾虚骨质疏松症大鼠骨组织中OPG/RANKLmRAN及蛋白表达的影响
目的:研究糖皮质激素性骨质疏松症大鼠骨组织中OPG/RANKL的mRNA和蛋白表达,揭示糖皮质激素骨质疏松症的发病机理,阐述纳米钙补肾中药的调节作用机制.方法:用糖皮质激素注射的方法复制骨质疏松症模型,用纳米钙及具有益肾填精、补钙壮骨作用的补肾中药高、低剂量对实验大鼠治疗8周,以骨疏康颗粒、盖天力钙片作为阳性对照组,正常大鼠和模型空白组为空白对照组.用PCR法、Western印迹法检测骨质疏松症大鼠骨组织中OPG/RANKLmRNA和蛋白表达.结果:正常大鼠骨组织可以在基因、蛋白水平表达OPG及RANKL,表明正常骨组织中存在OPG/RANK/RANKL系统,此系统可能在骨组织维持骨密度的作用上发挥重要的作用.糖皮质激素可影响骨组织中OPG/RANK/RANKL系统,促进破骨细胞的分化抑制成骨细胞的形成,从而影响骨形成诱发骨质疏松症.结论:纳米钙补肾中药通过调控大鼠骨组织中OPG/RANKL mRNA和蛋白表达,可缓解糖皮质激素对骨组织中OPG/RANK/RANKL系统的影响.抑制破骨细胞的分化,促进成骨细胞的形成,从而对糖皮质激素性骨质疏松症有一定的防治作用.
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桂枝芍药知母汤对Ⅱ型胶原蛋白诱导关节炎大鼠RANKL/OPG水平的影响
目的:研究桂枝芍药知母汤对Ⅱ型胶原蛋白诱导类风湿关节炎大鼠踝关节骨组织细胞RANKL表达的影响,以证明桂枝芍药知母汤可通过抑制破骨细胞的分化与活化,达到缓解或阻止关节的损伤,已达到对类风湿关节炎骨破坏的抑制作用.方法:采用Ⅱ型胶原蛋白诱导类风湿关节炎大鼠模型,灌胃给药30 d后用原位杂交技术检测踝关节局部的OPG/RANKL水平.结果:桂枝芍药知母汤能降低CIA踝关节组织RANKL、OPG表达水平.结论:桂枝芍药知母汤可以抑制CIA模型鼠关节RANKLmRNA的表达水平,提高OPGmRNA的表达水平,降低RANKL/OPG的比值,可能通过抑制了破骨细胞的分化与活化,从而可能缓解或阻止关节的损伤破坏.
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骨搬移技术-稳态压应力对破骨细胞分子机制研究
目的 评估稳态压应力对破骨细胞OPG/RANKL表达的影响.方法 对破骨细胞分别加载相同应变频率不同加载时间和不同应变频率不同加载时间的稳定压应力,经PCR检测OPG/RANKL的表达差异.结果 在稳定压应力下加载时间和频率皆不同时C组(24 h)RANKL具有统计学意义(P＜0.05).而稳态压应力下加载时间相同为24 h,加载频率不同A、B、C三组比值与对照组比较OPG、RANKL皆差别不大,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在稳态压应力作用下可防止骨吸收,促进骨沉积,而动态加载时间和频率尤为明显.
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骨搬移技术-压应力对成骨细胞OPG/RANKL表达的影响
目的 评估恒定压应力对雄性大鼠成骨细胞OPG/RANKL表达的影响.方法 恒定压应力下对雄性大鼠成骨细胞加载相同应变频率、不同加载时间以及不同应变频率、不同的加载时间后,经PCR检测OPG/RANKL表达差异.结果 加载应力相同,加载时间和频率不同时,A组RANKL具有统计学意义(P＜0.05);而OPG较其它各组差别不大,无统计学意义(P＞0.05).加载时间相同,加载频率与加载压应力不同时,A、B、C三组比值比较对照组OPG、RANKL皆差别很大,具有统计学意义(P＜0.05).结论 在加载时间相同的情况下(恒定为4 h)成骨细胞OPG与RANKL的比值随着压应变频率和预压应力的增加而升高.
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LPS刺激单核巨噬细胞培养上清对成骨细胞OPG/RANKL的影响
目的:观察经牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)刺激的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7培养上清对小鼠成骨细胞MC3T3-E1 OPG/RANKL表达的影响.方法:收集经100 ng/mL Pg-LPS刺激的单核巨噬细胞RAW264.7培养24 h后的上清,以不同稀释浓度(10％、20％、30％、40％和50％)的培养上清作用于MC3T3-E1 24h,分别通过RT-PCR、免疫印迹法(Western blotting)检测细胞OPG/RANKL基因和蛋白水平表达的变化,采用SPSS17.0软件包对数据进行单因素方差分析.结果:MC3T3-E1经不同稀释浓度的培养上清刺激后,其OPGmRNA及蛋白表达随浓度的增加而显著减少(P＜0.05),而RANKLmRNA及蛋白表达随浓度的增加显著增加(P＜0.05).结论:Pg-LPS刺激的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7培养上清可通过抑制成骨细胞OPGmRNA及蛋白的表达,增加RANKLmRNA及蛋白的表达而抑制其成骨能力,且与浓度呈一定的正相关.
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龈沟液 OPG／RANKL 表达与慢性牙周炎患者龈沟出血指数的相关性
目的：分析慢性牙周炎患者龈沟液护骨素（ osteoprotegerin，OPG）和核因子κB受体活化因子配体（ receptor ac-tivator of nuclear factor-KB ligand，RANKL）表达与其龈沟出血指数的关系。方法以吸潮纸尖法，取37例慢性牙周炎患者（观察组）和同期入院体检的31例健康志愿者（对照组）的龈沟液。采用免疫荧光试验分析OPG和RANKL的表达强度；并以简单线性回归法测试OPG／RANKL表达与龈沟出血指数的相关性。结果与对照组比较，观察组患者OPG和OPG／RANKL表达强度明显偏低，RANKL表达强度明显偏高，且各指标的组间差异均有统计学意义（ P＜0．001）。经线性回归分析，观察组患者的 OPG／RANKL 的表达情况与其出血指数呈显著负相关（ y ＝－3．7755x＋3．6212，R2＝0．6651，P＜0．05）。结论 OPG／RANKL／RANK系统参与了慢性牙周炎的发生和发展，可作为衡量其炎症性出血程度的客观指标。
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壮骨止痛方调节OPG/RANKL平衡抗绝经后骨质疏松作用
目的 研究壮骨止痛方对去卵巢骨质疏松大鼠骨保护素(osteoprotegerin,OPG)和NF-κB受体活化因子(receptor activator of NF-κB,RANK)/RANK配体(RANK ligand,RANKL)的影响,探讨其抗骨质疏松的作用机制.方法 72只SD大鼠按体质量随机抽出假手术组12只,造模组60只,造模组采用双侧去卵巢法造模,假手术组只切除卵巢周围相应等量的脂肪.术后造模组大鼠按体质量随机分为模型组、壮骨止痛方高剂量组(13.2 g·kg-1)、中剂量组(6.6 g·kg-1)、低剂量组(3.3 g·kg-1)和戊酸雌二醇组,每组12只.术后第5天开始药物干预,模型组和假手术组给予相应体积的纯净水,持续13周.给药结束后,股骨进行病理组织检测,酶联免疫法检测大鼠血清和骨组织OPG、RANKL含量,免疫组化法检测大鼠骨组织OPG、RANKL蛋白表达.结果 模型组大鼠股骨骨小梁面积率显著降低,血清和骨组织OPG含量显著下降,RANKL含量显著增加,OPG/RANKL比值显著降低,骨组织OPG蛋白表达显著下调,RANKL蛋白表达显著增强,OPG/RANKL比值显著降低,与假手术组比较,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).壮骨止痛方各剂量组大鼠股骨骨小梁面积率显著增加,显示其具有良好的抗骨质疏松作用;血清和骨组织OPG含量显著增加,RANKL含量显著下降,OPG/RANKL比值升高;骨组织OPG蛋白表达显著增强,RANKL蛋白表达显著下调,OPG/RANKL比值显著升高,与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 去卵巢大鼠OPG/RANKL比值显著降低,壮骨止痛方能显著升高去卵巢大鼠OPG/RANKL比值,调节OPG/RANKL平衡是壮骨止痛方抗绝经后骨质疏松的作用机制之一.
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薯蓣皂苷通过上调Lrp5、β-catenin 表达促进成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化
目的 探讨薯蓣皂苷对体外培养的成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化的影响,并初步探讨薯蓣皂苷预防与治疗骨质疏松的作用机制.方法 ①体外培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,分别加入含不同浓度的薯蓣皂苷(0.3、0.6、1.2 μmol·L-1)进行培养,以洛伐他汀(0.04 μmol·L-1)作为阳性对照.采用MTT法检测细胞增殖情况;用ALP试剂盒检测细胞内ALP的活性;采用RT-PCR检测Lrp5、β-catenin、OPG/RANKL mRNA 表达情况;Von Kossa 染色法检测细胞矿化能力.②通过RNAi技术将Lrp5基因沉默,检测薯蓣皂苷是否依赖于Lrp5来调节OPG/RANKL的比值.结果 ①薯蓣皂苷可以剂量依赖的促进MC3T3-E1细胞的增殖;②薯蓣皂苷可以剂量依赖的增加MC3T3-E1细胞ALP的活性;③薯蓣皂苷可以剂量依赖的上调MC3T3-E1细胞Lrp5、β-catenin、OPG/RANKL mRNA表达水平;④薯蓣皂苷可以使MC3T3-E1细胞产生的矿化结节数增加;⑤薯蓣皂苷依赖于Lrp5来调节MC3T3-E1的OPG/RANKL比值.结论 ①适量浓度的薯蓣皂苷可以促进MC3T3-E1细胞的增殖与分化;②薯蓣皂苷可以调节Lrp5等与骨代谢相关的基因的表达以产生抗骨质疏松作用.
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骨灵汤对绝经期前后骨质疏松患者血清IGF-1、TGFβ1与OPG/RANKL水平的影响
目的 观察绝经期前后骨质疏松(osteoporosis,OP)患者血清胰岛素样生长因子(IGF-1)、转化生长因子(TGFβ1)与OPG-RANKL系统的关系以及骨灵汤对IGF-1和TGFβ1表达的影响.方法 将80例OP患者分为绝经前组和绝经后组.每组各40例,均给予抗OP中药骨灵汤(骨碎补、鹿角胶、菟丝子等)治疗.采用ELISA方法检测血清TGFβ1、OPG和RANKL.采用包被放免法(IRMA)检测血清IGF-1.结果 绝经后组血清IGF和RANKL的水平显著低于绝经前组(P<0.01),绝经后组血清OPG水平显著高于绝经前组(P<0.01);血清IGF-1、TGFβ1浓度与血清OPG浓度呈负相关.相关系数为r=0.003、P=-0.622和r=0.000、P=-0.713;血清IGF-1、TGFβ1浓度与血清RANKL浓度呈正相关.相关系数为r=0.012、P=0.549和r=0.001、P=0.667:绝经前妇女骨灵汤治疗后,血清IGF和TGFβ水平升高(P<0.05),OPG水平明显升高(P<0.01).RANKL浓度下降(P<0.05);绝经后妇女骨灵汤治疗后IGF、TGFβ和OPG水平升高(P<0.05),RANKL浓度下降(P<0.05).结论 骨灵汤可以通过上调IGF-1和TGFβ1的表达,影响OPG-RANKL系统,从而调节骨代谢,达到防治OP的目的 .
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锁阳多糖对去卵巢大鼠骨质疏松的改善作用
目的 观察锁阳多糖对去卵巢大鼠骨质疏松的作用并探讨其机制.方法 雌性SD大鼠分为假手术组、造模组.术后2个月造模组分为模型组、阳性对照组、锁阳多糖治疗组,每组10只.治疗组灌胃给予锁阳多糖(20、40、80 mg/kg),阳性药组灌胃给予尼尔雌醇(1.5 mg/kg),每日1次,连续给药12周.ELISA法检测血清雌二醇(E2)、骨钙素(BGP)、降钙素(CT)及尿液脱氧吡啶啉(DPD)的含量,双能X线骨密度检测仪检测腰椎及股骨的骨矿物密度(BMD),三点弯曲法测定胫骨生物力学,Western blot检测大鼠股骨组织中骨保护素(OPG)及核因子-κB受体活化因子配体(RA NKL)蛋白的表达.结果 摘除卵巢后模型组大鼠血清中E2、CT显著下降(P ＜0.05.P＜0.01),血清BGP及尿液DPD含量则显著升高(P＜0.01),中、高剂量锁阳多糖及尼尔雌醇能够显著升高血清E2、 CT含量(P＜0.05),降低血清BGP及尿液DPD含量(P＜0.01);锁阳多糖及尼尔雌醇能够逆转去卵巢大鼠腰椎和股骨BMD的降低(P＜0.01),改善胫骨生物学特性中的大载荷及大应力降低的趋势(P ＜0.05,P＜0.01),并能增强OPG蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01),降低RANKL蛋白表达(P＜0.01),升高OPG/RANKL比值(P＜0.01).结论 锁阳多糖有明显抗去卵巢大鼠骨质疏松的作用,其机制可能与其调节E2,CT、BGP和DPD水平,激活OPG/RANK/RANKL信号系统有关.
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不同形式的跳跃运动对大鼠胫骨IL-6和OPG以及RANKL基因表达的影响
目的 研究不同形式跳跃运动对大鼠胫骨白介素6(IL-6)和骨代谢相关分子护骨素(OPG)、核因子-κB受体激活因子配体(RANKL)基因表达的影响,探讨过度跳跃运动所致的骨质破坏发生的可能机制.方法 24只8周龄雄性SD大鼠,随机平均分为对照组、跳跃组和跳跃负重组.跳跃组进行递增负荷跳跃训练,负重跳跃组按5％自身体质量负重,训练计划同跳跃组,对照组不作处理,实验6周后完成取材测试.采用比色法检测血清碱性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)浓度,取一侧胫骨制作HE石蜡切片,另一侧用实时定量PCR检测IL-6、OPG和RANKL的mRNA表达.结果 与对照组和跳跃组相比,跳跃负重组骨胶原纤维和骨膜排列紊乱,骨皮质出现较大程度破坏,骨质中空腔增多.跳跃负重组血清ALP显著高于跳跃组和对照组(P＜0.05).跳跃负重组和跳跃组血清TRACP显著高于对照组(P＜0.05).大鼠经过2种形式跳跃运动6周后,胫骨组织IL-6 mRNA表达均显著高于对照组(P＜0.01).负重跳跃组IL-6 mRNA表达显著高于普通跳跃组(P＜0.01).与对照组比较,跳跃组和跳跃负重组OPG mRNA表达显著升高,其中跳跃组表达量高.跳跃负重组RANKL mRNA表达显著高于跳跃组和对照组(P＜0.01).结论 IL-6和RANKL在负重跳跃运动大鼠胫骨中升高,参与以骨高转换率为特征的骨质破坏过程.
