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灯盏花素对大鼠肾脏缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响
目的 探讨灯盏花素对大鼠肾脏缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响.方法 48只健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组、缺血再灌注组、硝苯地平组、灯盏花素组.肾脏缺血60min再灌注24h,检测大鼠血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平,TUNEL法检测大鼠肾组织细胞凋亡情况,免疫组化方法检测肾组织Bax和Bcl-2蛋白表达.结果 与假手术组比较,缺血再灌注组大鼠血清BUN和Cr浓度增高(P<0.05),肾细胞凋亡指数升高,Bax蛋白表达明显上调(P<0.05),Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax比值明显下降(P<0.05).与缺血再灌注组比较,灯盏花素组血清BUN和Cr水平降低(P<0.05),肾细胞凋亡指数降低,Bax蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调,Bcl-2/Bax升高(P<0.05).结论 灯盏花素可以抑制大鼠肾脏缺血再灌注细胞凋亡,其机制可能与改变Bax和Bcl-2蛋白的表达有关.
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葛根素对肾缺血再灌注大鼠肾脏组织细胞凋亡的影响及其机制探讨
目的:研究葛根素对肾缺血再灌注大鼠肾脏组织细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:选取120只实验用大鼠随机分为假手术组、模型组、银杏叶提取物100 mg·kg-1治疗组、葛根素(100,50,25 mg·kg-i)治疗组;采用夹闭双侧肾蒂血管45 min后恢复血流再灌注的方法制备肾缺血再灌注大鼠模型;再灌注后立即通过iP给药,每天1次,疗程2周.治疗完成后,称量体重和肾脏质量并计算肾脏指数,测定血清中尿素氮(BUN),血肌酐(SCr),尿酸(UA)含量,PAS染色法观察肾脏组织形态学变化;末端标记法(TUNEL)染色法观察细胞凋亡状况并计算凋亡指数(AI);实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定肾脏组织蛋白激酶B(AKT),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax) mRNA表达,并计算Bax/Bcl-2;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测肾脏组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白的表达并进行半定量分析;酶联免疫法测定血浆中血浆C-反应蛋白(CRP),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6),细胞间黏附分子-1(ICAM-1)水平.结果:与模型组比较,葛根素(100,50 mg·kg-1)治疗组大鼠肾脏指数明显降低(P＜0.05,P＜0.01),血清中BUN,SCr,UA含量明显降低(P＜0.05,P＜0.01);葛根素各治疗组肾脏组织病理性形态学变化呈不同程度改善,肾小球细胞凋亡状况呈不同程度好转,均以100 mg·kg-1治疗组效果为显著,葛根素100,50 mg· kg-1治疗组肾小球细胞AI显著降低(P＜0.05,P＜0.01),肾脏组织中Bax mRNA表达明显下调且Bcl-2 mRNA表达明显上调(P＜0.05,P＜0.01),Bax/Bcl-2明显降低(P＜0.01),且100 mg·kg-1治疗组AKT mRNA表达显著上调(P＜0.01);Caspase-3蛋白表达量明显降低(P＜0.05,P＜0.01).葛根素(100,50 mg· kg-1)治疗组大鼠血浆中CRP,TNF-α,IL-6水平均明显降低(P＜0.05,P＜0.01),且100 mg·kg-1治疗组IL-1β,ICAM-1含量水平明显降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:葛根素具有抑制肾缺血再灌注大鼠肾脏组织细胞凋亡、改善肾功能的作用;其作用机制可能与葛根素能够有效上调AKT基因表达、抑制Caspase-3蛋白表达,下调Bax基因表达、上调Bcl-2基因表达,并降低Bax/Bcl-2,降低炎症因子表达、抑制炎症反应有关.
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肾衰1号对肾脏缺血再灌注大鼠KIM-1和NGAL蛋白表达的影响
[目的]探讨肾衰1号对肾脏缺血再灌注大鼠肾脏损伤敏感蛋白肾损伤因子-1(KIM-1)和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的影响.[方法]将SD大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、尿毒清颗粒阳性药组、肾衰1号高剂量组和肾衰1号低剂量组.除假手术组外,其余各组均进行双侧肾结扎复灌,造成急性缺血再灌注损伤.分别连续给药1d、3d、7d,实验结束后,测定血清尿素氮(BUN)和血清肌酐(SCr),观察肾组织病理形态学,免疫印迹法测定肾脏组织中KIM-1和NGAL的表达.[结果]模型组大鼠BUN和SCr和肾组织中KIM-1和NGAL水平明显增高(P＜0.001);与模型组比较,肾衰1号高低剂量组BUN、SCr均有明显降低(P＜0.001;P＜0.001,P＜0.01),NGAL蛋白表达有明显下降(P＜0.01).HE病理染色显示肾衰1号能够减少细胞管型、肾小管上皮细胞坏死、组织出血及炎性反应的发生与发展,其中以肾衰1号高剂量效果为明显.[结论]肾衰1号通过降低KIM-1和NGAL的表达发挥对肾脏的保护作用.
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淫羊藿苷对大鼠急性缺血再灌注性肾损伤的保护作用及机制
目的 研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对大鼠急性缺血再灌注性肾损伤(IRI)的保护作用及机制.方法 健康Wistar大鼠45只,随机分为5组:对照组(假手术组),模型组(IR),淫羊藿苷低、中、高三个剂量组.建立大鼠双侧肾脏缺血再灌注损伤模型,观察大鼠精神状态,24h尿量的变化;检测血清中SOD活性及MDA含量等酶学的变化.结果 和模型组BUN、Scr和MDA,SOD相比,ICA治疗后肾缺血再灌注大鼠血清中BUN、Scr和MDA含量降低,SOD(101.18±1.45)活性升高,肾脏功能有明显改善.结论 淫羊藿苷能明显改善急性肾损伤大鼠的肾功能,其机制可能通过对抗氧化应激发挥对肾脏缺血再灌注损伤的保护作用.
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TRPM7在肾脏缺血再灌注损伤中的表达变化
目的:瞬时受体电位M7(transient receptor potential melastatin 7,TRPM7)为1种具有离子通道和激酶特性的双功能膜蛋白,在缺血再灌注损伤中发挥重要的作用,但TRPM7在肾脏缺血再灌注损伤中的变化和作用尚不完全清楚.本研究探讨TRPM7在体内和体外肾脏缺血再灌注损伤模型中的变化.方法:建立体外肾小管上皮细胞TCMK-1不同方式的缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型,包括物理H/R(1％O2)以及CoCl2化学H/R模型,并建立体内小鼠肾脏缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusion,I/R)模型.采用实时聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)方式检测H/R以及I/R不同时间点细胞或组织中TRPM7 mRNA或蛋白的表达变化.结果:TCMK-1细胞物理H/R模型中TRPM7 mRNA表达在再灌注24 h达到高;而在化学H/R模型中,TRPM7 mRNA表达在再灌注12h达到高;TCMK-1细胞物理H/R模型中,TRPM7蛋白含量在再灌注24 h达到高.在体内肾脏I/R模型中,TRPM7 mRNA在再灌注5d达到高.结论:TRPM7在肾脏I/R损伤过程中起重要的作用,提示TRPM7可能是肾脏I/R损伤过程中的一个潜在的治疗靶点.
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丹参酮ⅡA 对 TLR4/NF-κB 信号通路下游炎症因子的影响及其临床意义
目的：探讨丹参酮ⅡA 对大鼠 IRI 肾脏 TLR4/ NF-κB 信号通路以及下游炎症因子的影响，分析其对肾脏保护的可能机制。方法建立大鼠肾脏缺血再灌注（IRI）模型，将60只 SD 大鼠随机均分为空白组、对照组、丹参酮ⅡA 组、ST2825组及 Bay11-7082组，行对应处理，24 h 后取肾脏标本，行 HE 法观察组织病理学形态，以 PT-PCR 法、Western Blot-ting 法检测 TLR4、NF-κB mRNA 及蛋白水平，行酶联免疫吸附试验检测组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）水平。结果与空白组相比，对照组肾组织病理学明显改变，且 TLR4、NF-κB mRNA 及蛋白水平，组织 TNF-α、IL-1β、IL-6水平均明显上升；丹参酮ⅡA、ST2825及 Bay11-7082均可有效保护肾组织，表现为细胞肿胀、坏死和脱落程度较轻，同时炎症反应更轻，表现为 TLR4、NF-κB mRNA 及蛋白水平，组织 TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低，与对照组相比，上述指标差异均有统计学意义（P ﹤0.05）。结论丹参酮ⅡA 对缺血再灌注肾脏组织有保护作用，其机制与抑制 TLR4/ NF-κB 信号通路、减少下游炎症因子有关。
关键词： 丹参酮ⅡA 肾脏缺血再灌注 TLR4/NF-κB 信号通路 炎症因子 -
肾缺血再灌注损伤后miR-210及其靶基因的变化
目的 观察缺血再灌注损伤(IRI)对小鼠肾脏mir-210及其靶基因Ephrin-A3表达的影响.方法 将10只成年昆明雌鼠随机分为缺血再灌注组(IR)、假手术组(Sham),每组5只.IR组完全阻断双肾蒂40 min后恢复血流,Sham组暴露左右双肾40 min后关闭腹腔.每组在手术4 h后取肾组织标本,采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测mir-210表达水平;RT-PCR和酶标免疫组织化学染色法检测Ephrin-A3基因和蛋白的表达情况.结果 IR组miR-210表达水平明显上升(P<0.05).因miR-210对靶基因Ephrin-A3的负向调节作用,PCR结果显示IR组Ephrin-A3基因表达水平明显高于Sham组(P<0.01).Ephrin-A3蛋白主要表达在肾小管上皮细胞胞质中,Sham组Ephrin-A3蛋白表达水平较IR组明显升高(P<0.01).结论 肾缺血再灌注损伤明显影响miR-210及其靶基因Ephrin-A3的表达,miR-210表达的变化可能与肾缺血再灌注损伤的修复有关.
关键词： 肾脏缺血再灌注 microRNA-210 Ephrin-A3 -
表面加强解析电离-飞行时间-质谱仪检测大鼠肾脏缺血再灌注早期血清蛋白质谱变化
肾脏缺血再灌注(I/R)损伤是导致急性肾衰竭(ARF)主要的因为,但到目前为止,仍没有一项比较实用可行的指标诊断早期缺血性急性肾衰竭~([1,2]).我们应用表面加强解析电离-飞行时间-质谱仪(SELDI-TOF-MS)检测大鼠正常对照组与肾I/R组早期血清的蛋白质谱,筛选肾脏I/R后早期差异表达的标记蛋白质,为临床早期诊断急性肾衰竭寻找更为可靠的指标.
