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益肾蠲痹丸对CIA大鼠辅助性T细胞相关细胞因子的影响
目的:探究益肾蠲痹丸对胶原诱导关节炎大鼠模型(CIA)辅助性T细胞分泌的细胞因子作用.方法:CIA模型大鼠按随机数字表法分为正常对照组、CIA模型组、阳性药组(甲氨喋呤)和益肾蠲痹丸治疗组4组各10只.治疗结束后采用ProcartaPlexTM多因子免疫检测技术定量分析各组大鼠血清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A的含量.结果:益肾蠲痹丸能下调CIA大鼠机体IL-2、IL-6、IL-17A的表达,同时上调IL-10表达.讨论:益肾蠲痹丸可在一定程度上调节促炎细胞因子及抗炎细胞因子的平衡,其作用靶点可能与IL-2、IL-6、IL-17A及IL-10有关.
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TNF-α拮抗剂对胶原诱导大鼠类风湿关节炎骨破坏治疗作用的实验研究
目的 建立模拟类风湿关节炎(RA)发病的CIA大鼠模型,明确TNF-α拮抗剂对CIA大鼠关节局部骨破坏的改善作用,为临床提供实验依据.方法 利用皮下注射牛II型胶原诱导Wistar大鼠发病,建立CIA大鼠模型.将大鼠随机分为3组:①正常对照组(10只);②灭菌用水治疗组(10只);③TNF-α拮抗剂治疗组(10只).每只大鼠均在炎症分值达到两分及以上时开始治疗,分别在治疗4周和8周后,取胫骨上段做硬组织切片,观察胫骨上段骨小梁变化及骨量变化情况.结果 TNF-α拮抗剂具有明显抑制CIA大鼠关节周围骨量丢失的作用,且其抑制骨量减少主要是通过抑制骨小梁数量减少来实现的,与抑制骨小梁宽度丢失关系较小.结论 TNF-α拮抗剂能明显抑制CIA大鼠关节侵蚀及关节周围骨丢失.
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小鼠胶原诱导性关节炎模型的建立及其免疫学变化研究
目的 胶原诱导性关节炎模型(collagen induced arthritis,CIA)是研究类风湿性关节炎发病机制和治疗药物筛选的理想模型,也是目前国际上公认的关节炎模型.但是,目前鲜见Ⅱ型胶原诱导CIA模型的系统免疫学变化的报道.因此,本研究采用DBA/1小鼠诱导了CIA模型,并对其免疫学改变进行了系统研究.方法 将牛Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂混和并充分乳化,于DBA/1小鼠尾根部皮内注射进行初次免疫,20 d后同样方法进行再次免疫.应用千分尺测量CIA模型小鼠的左右两侧足掌厚度,并进行关节炎评分.酶联免疫吸附试验测定小鼠血清Ⅱ型胶原特异性抗体,Luminex技术和αLISA技术测定血清及培养上清中的细胞因子水平.结果CIA小鼠于造模后23 d开始,陆续出现前肢、后肢的红肿、功能障碍,发病率高达100％,且随着时间的延长其关节肿胀程度呈进行性加重,关节炎评分增高.CIA小鼠脾脏指数较正常组明显升高,且Ⅱ型胶原刺激的特异性T细胞增殖明显增强.细胞因子检测结果表明,脾细胞培养上清中IFN-γ和1L-4含量及IFN-γ/IL-4比值明显升高,TNF-α和IL-1β水平亦显著升高.此外,CIA小鼠血清中存在高水平的Ⅱ型胶原特异性抗体.结论 Ⅱ型胶原诱导CIA模型发病率高,免疫学改变以Th1细胞因子升高为主,兼有细胞免疫功能及体液免疫功能损伤.
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基于语料库的中介语研究述评
对国内研究者基于语料库的英语中介语研究进行了系统的调查统计和归纳总结,从研究方法、研究角度和研究内容等方面揭示国内研究者基于语料库的中介语研究现状,总结出该领域的研究趋势.以期为对这一领域感兴趣的学习者和研究者提供借鉴和参考.
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桂枝芍药知母汤对Ⅱ型胶原蛋白诱导关节炎大鼠RANKL/OPG水平的影响
目的:研究桂枝芍药知母汤对Ⅱ型胶原蛋白诱导类风湿关节炎大鼠踝关节骨组织细胞RANKL表达的影响,以证明桂枝芍药知母汤可通过抑制破骨细胞的分化与活化,达到缓解或阻止关节的损伤,已达到对类风湿关节炎骨破坏的抑制作用.方法:采用Ⅱ型胶原蛋白诱导类风湿关节炎大鼠模型,灌胃给药30 d后用原位杂交技术检测踝关节局部的OPG/RANKL水平.结果:桂枝芍药知母汤能降低CIA踝关节组织RANKL、OPG表达水平.结论:桂枝芍药知母汤可以抑制CIA模型鼠关节RANKLmRNA的表达水平,提高OPGmRNA的表达水平,降低RANKL/OPG的比值,可能通过抑制了破骨细胞的分化与活化,从而可能缓解或阻止关节的损伤破坏.
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Treg细胞在VIP治疗实验性类风湿性关节炎中的作用研究
目的:本研究探讨血管活性肠肽(VIP)治疗实验性类风湿性关节炎的免疫调节机制及Treg细胞参与的调节.方法:本研究以鸡Ⅱ型胶原(CCⅡ)诱导的Wistar大鼠实验性类风湿性关节炎(CIA)为动物模型,分析大鼠关节指数评分和关节病理变化,通过细胞因子检测分析Th1/Th2平衡关系;通过流式细胞术和功能实验分析Treg的变化,评价VIP的治疗作用和机制.结果:我们的研究显示体内经VIP治疗的CIA大鼠在临床和组织学水平均得到了保护和缓解.其抑制作用与下列因素有关:抑制致病性T细胞的增殖,免疫应答由Th1型应答向Th2型应答转换,以及上调了具有抑制T细胞活化和增殖作用的CD4+CD25+ Treg细胞数量与功能.结论:本研究揭示了VIP可通过调节Th1/Th2平衡和上调Treg细胞来抑制致病性T细胞的活性,从而保护、缓解实验性关节炎.
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芍药苷对牛Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎模型T细胞作用机制研究
目的：探讨芍药苷（ Paeoniflorin）对牛Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎模型（ Collagen-induced arthritis，CIA） T细胞作用机制。方法：采用牛Ⅱ型胶原诱导DBA/1J小鼠建立CIA模型，二次免疫时随机分为两组，一组用芍药苷治疗，另一组用磷酸盐缓冲液治疗作为对照，每天进行临床评分；发病高峰期处死小鼠， HE染色法观察关节病理学变化；3 H-甲基胸腺嘧啶（3 H-TdR）掺入法检测小鼠脾脏细胞和CD4＋T细胞增殖反应；流式细胞技术检测T细胞亚群比例；酶联免疫吸附试验（ ELISA）检测小鼠脾脏细胞培养上清中炎性因子分泌情况。结果：芍药苷治疗组小鼠临床评分显著低于对照组（ P＜0.05）；治疗组CD3抗体和CD28抗体刺激的脾脏细胞和CD4＋T细胞增殖能力明显减弱（ P＜0.05），治疗组CII刺激的脾脏细胞和CII特异性CD4＋T细胞增殖能力明显减弱（P＜0.01）；治疗组Th1和Th17细胞亚群比例低于对照组（P＜0.01）；治疗组脾脏细胞培养上清中IFN-γ和IL-17含量低于对照组（ P＜0.05）。结论：芍药苷可能通过抑制致病性T细胞增殖，降低Th1和Th17细胞亚群比例，减少炎性细胞因子分泌，从而缓解CIA病情。
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胶原诱导型关节炎小鼠Th1细胞及特异转录因子的动态变化
目的 研究鸡Ⅱ型胶原蛋白诱导型关节炎(CIA)小鼠脾淋巴细胞Th1及其特异转录因子T-bet动态变化,探讨Th1细胞与类风湿关节炎(RA)进展的关系.方法 108只DBA1/J小鼠随机分为正常对照组(每组6只)和模型组(每组12只),于初次免疫7、14、21 d、加强免疫后第7、21、35天无菌摘脾脏提取脾淋巴细胞,应用流式细胞术和荧光定量PCR技术检测各组小鼠脾淋巴细胞Th1及其特异转录因子T-bet变化情况.结果 小鼠初免7d和14 d模型组TM细胞及其转录因子T-bet明显高于正常组(P＜0.01,P＜0.05),初免21 dTh1细胞及其转录因子T-bet与正常组无明显区别(P＞0.05).加强免疫7d模型组Th1细胞开始升高与正常组比较有显著差异(P＜0.01),检测其T-bet与正常组也有明显区别(P＜0.05),加强免疫21 d模型组Th1细胞及T-bet表达量降低与正常组比较差异显著(P＜0.01,P＜0.05),加强免疫35 d模型组Th1细胞及T-bet表达量与正常组比较无明显差异(P＞0.05).结论 CD4+Th1细胞及其特异转录因子动态变化可能和RA进展具有一定关系.
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IL-7Rα抗体对Ⅱ型胶原诱导性关节炎小鼠T细胞作用机制研究
本研究探讨应用IL-7Rα抗体对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)T细胞的作用机制.采用Ⅱ型胶原(collagenⅡ,CⅡ)免疫DBA/1J小鼠建立CIA模型,二次免疫后分别对治疗组和对照组小鼠给予IL-7Rα抗体及其同型对照抗体进行治疗.通过HE染色检测小鼠关节炎性细胞浸润程度；3 H-TdR掺入法检测小鼠脾脏单个核细胞和CD4+T细胞对CⅡ的增殖反应；ELISA检测脾脏单个核细胞培养上清中细胞因子分泌情况；流式细胞术检测小鼠T细胞亚群分布变化情况；real-time PCR检测相关细胞因子及T细胞亚群转录因子mRNA表达水平.实验结果显示:治疗组小鼠关节炎症细胞浸润程度明显减轻；脾脏单个核细胞及CD4+T细胞增殖程度显著降低；脾脏单个核细胞培养上清中的炎性细胞因子IFN-γ、IL-17A、TNF-α含量明显低于对照组；Th1和Th17细胞亚群数量及相应的转录因子mRNA水平明显降低.以上结果提示应用IL-7Rα抗体治疗可能通过抑制致病性T细胞的增殖、减少致病性T细胞数量等途径缓解CIA发病.本研究阐明了IL-7Rα作为拮抗剂治疗CIA的作用机制,并为临床治疗类风湿性关节炎提供了研究基础.
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骨碎补总黄酮对胶原诱导大鼠类风湿关节炎骨破坏治疗作用的实验研究
目的 建立模拟类风湿关节炎(RA)发病的胶原诱导关节炎(CIA)大鼠模型,明确骨碎补总黄酮对CIA大鼠关节局部骨破坏的改善作用,为临床提供实验依据.方法 利用皮下注射牛Ⅱ型胶原诱导Wistar大鼠发病,建立CIA大鼠模型.将大鼠随机分为正常对照组(10只)、灭菌用水治疗组(10只)、骨碎补总黄酮治疗组(10只).每只大鼠均在炎症分值达到2分及以上时开始治疗,分别在治疗4周和8周,取胫骨上段做硬组织切片,观察胫骨上段骨小梁变化及骨量变化情况.结果 骨碎补总黄酮具有明显抑制CIA大鼠关节周围骨量丢失的作用,且其抑制骨量减少主要是通过抑制骨小梁数量减少来实现的,与抑制骨小梁宽度丢失关系较小.结论 骨碎补总黄酮能明显抑制CIA大鼠关节侵蚀及关节周围骨丢失.
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外源性LTB4对CIA小鼠Treg/Th17脾细胞分化的作用
目的 探讨外源性白三烯B4(LTB4)对胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠脾细胞调节性T细胞(Treg)和Th17细胞分化的调节, 进一步阐明LTB4在类风湿关节炎(RA)发病中的作用机制.方法 建立CIA小鼠模型,取造模d 28的脾细胞,体外实验分析外源性LTB4对Treg和Th17细胞分化的影响.应用流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+细胞的数量,荧光定量PCR技术检测调控Treg和Th17细胞分化的特异性转录因子Foxp3和RORγt的mRNA的表达,酶联免疫吸附(ELISA)方法检测培养细胞上清IL-17的含量.结果 成功建立CIA小鼠模型;造模d 28分离小鼠脾细胞,体外培养加入鸡Ⅱ型胶原(CⅡ)共同孵育,随着LTB4浓度增加 (0.01、0.1、1 μmol·L-1),CD4+CD25+Foxp3+细胞数量相应减少,Foxp3 mRNA的表达相应降低;相反,IL-17的含量相应增加,RORγt mRNA的表达相应升高.结论 LTB4抑制CIA模型脾细胞Treg细胞的分化,促进Th17细胞的分化,提示LTB4在CIA发病过程中具有一定的促炎活性.
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淫羊藿苷对牛Ⅱ型胶原诱导型关节炎小鼠IL-17/RANKL轴的影响
目的 初步观察淫羊藿苷(Icariin,ICA)对牛Ⅱ型胶原诱导型关节炎(typeⅡcollagen-induced arthritis,CIA) DBA/1小鼠IL-17/RANKL的调节作用.方法 除正常对照组(N组,灌胃给予生理盐水3ml· kg-1 ·d-1)外以牛Ⅱ型胶原和弗氏不完全佐剂注射诱导DBA/1小鼠关节炎模型;将32只建模成功(关节炎指数评分≥4分)DBA/1小鼠随机分为模型对照组(Con组,灌胃给予生理盐水3ml· kg-1·d-1)、甲氨喋呤组(MTX组,灌胃给予每周MTX 1.5 mg·kg-1)、淫羊藿低剂量组(IL组,灌胃给予ICA 5 mg·kg-1·d-1)和淫羊藿苷高剂量组(IH组,灌胃给予ICA 20mg·kg-1·d-1),每组8只,连续干预15 d,并于第3,7,11,15 d记录各组小鼠关节炎指数评分值.干预结束后检测各组关节炎小鼠血清白介素-17(IL-17)、白介素-23(IL-23)、NF-KB配体的受体或激活因子(RANKL)和抗酒石酸酸性磷酸酶(Tracp)含量.结果 第2次免疫后1周左右,Con组足趾肿胀明显,关节炎指数评分明显高于N组,差异具有显著性(P＜0.01);干预15 d后,与N组比较,Con组IL-23、Tracp、IL-17和RANKL浓度升高,在IL-23和Tracp水平上差异有统计学意义(P＜0.05),而IL-17和RANKL 两个指标差异无统计学意义(P＞0.05);与Con组比较,MTX组血清IL-23水平降低(P＜0.05),IL组IL-23和RANKL含量降低(P＜0.01,P＜0.05),IH组IL-17、IL-23、RANKL和Tracp水平均显著降低(P＜0.01);IH组与IL组相比,RANKL和Tracp均明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05).结论 淫羊藿苷能改善CIA DBA/1小鼠足趾局部肿胀程度,下调血清IL-23和IL-17、RANKL和Tracp水平,具有调节骨免疫系统的潜能.
关键词： 淫羊藿苷 骨免疫 CIA IL-17/IL-23 RANKL/Tracp -
中药熏蒸疗法对Ⅱ型胶原蛋白诱导型关节炎大鼠关节病理改变的影响
目的 研究中药熏蒸疗法对Ⅱ型胶原蛋白诱导的关节炎(CIA)模型大鼠关节病理改变的影响.方法 用小牛源Ⅱ型胶原复制CIA模型.清洁级雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、水熏组、低熏组、高熏组,正常组和模型组常规喂养,不作熏蒸处理;水熏组给予(57±1)℃蒸馏水熏蒸,蒸气温度为(39±1)℃;低熏组给予水熏组相同温度的3.33%中药液熏蒸;高熏组给予水熏组相同温度的6.67%中药液熏蒸,造模第41日处死大鼠,获取完整膝关节.光镜下观察炎性细胞浸润、纤维组织增生及滑膜细胞增生情况.结果 中药熏蒸疗法对CIA大鼠骨关节组织的炎性细胞浸润、纤维组织增生及滑膜细胞增生有明显抑制作用.3种病理改变的总积分与模型组差异显著.结论 中药熏蒸疗法治疗类风湿性关节炎的机制可能与抑制炎性细胞浸润、纤维组织增生及滑膜细胞增生有关.
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胶原诱导性关节炎小鼠Treg细胞及转录因子Foxp3动态变化的研究
目的 研究鸡Ⅱ型胶原蛋白诱导性关节炎(CIA)小鼠Treg细胞及转录因子Foxp3的动态变化与类风湿关节炎疾病进展的关系.方法 147只DBA1/J小鼠随机分为正常对照组和模型组,制备Ⅱ型胶原乳剂免疫模型组小鼠,于初次免疫后的d7、d14、d21,加强免疫后的d7、d14、d21、d35无菌摘取腹殷沟淋巴结提取淋巴细胞,应用流式细胞技术和荧光定量PCR技术检测各组小鼠的Treg细胞及转录因子Foxp3变化情况.结果 模型组Treg细胞及转录因子Foxp3在初次免疫d14、d21较正常组有所升高(P＜0.05).模型组转录因子Foxp3表达量在加强免疫d14时高于正常组(P＜0.05).模型组Treg细胞表达在加强免疫d7、d14、d21逐渐上升,加强免疫d21时模型组Treg细胞表达与正常组相比有所增多(P＜0.05).模型组Treg细胞和转录因子Foxp3表达量在加强免疫d35与正常组相比均有所升高(P＜0.05,P＜0.01).结论 Treg细胞及其转录因子Foxp3的动态变化可能和RA发展具有一定关系.
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BALB/c小鼠胶原诱导关节炎模型的建立方法及特征分析
目的:建立BALB/c小鼠胶原诱导关节炎CIA(Collagen～induced Arthritis)模型及主要特征评价方法.方法:鸡Ⅱ型胶原溶于0.1M冰醋酸中,使其终浓度2 mg/ml,4度过夜,次日,取鸡Ⅱ型胶原与等体积完全弗氏佐剂充分乳化,将乳化后浓度为1 mg/mlⅡ型胶原50μl注射于BLAB/c鼠足跖皮内进行初次免疫.第15天,在相同部位将1mg/mlⅡ型胶原25止进行再次免疫.采用临床症状评分评价小鼠关节肿胀外观,测量小鼠肿胀厚度和小鼠体重并计算脾脏指数.对踝关节进行病理切片,采用HE染色观察滑膜增生,炎性细胞浸润及血管翳形成情况,甲苯胺蓝染色观察软骨损伤状况并评分,TRAP染色观察破骨细胞对骨侵蚀的影响.免疫组化法检测踝关节CD68蛋白的表达并计算平均光密度.结果:初次免疫第3天关节出现轻微肿胀,第18天肿胀为明显,模型组小鼠体重下降,脾脏指数增加.病理学结果显示:模型组出现滑膜增生,炎性细胞浸润,血管翳形成,软骨损伤等一系列典型RA特征,模型组CD68高表达.结论:采用BALB/c小鼠在其足趾皮内注射鸡Ⅱ型胶原可成功建立CIA模型,重现性好,周期短.病理学分析和临床症状评分评价了该模型具有典型的RA特征.
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T细胞疫苗对CIA的免疫调节作用
探讨T细胞疫苗(TCV)对小鼠胶原诱导性关节炎(CIA)的免疫调节作用.方法通过TCV干预CIA模型,观察小鼠发病情况,运用免疫组化技术观察局部关节病变程度；FACs分析T细胞亚群变化；ELISA检测细胞培养上清中TGF-β、IFN-γ、IL-17水平；定量PCR方法检测Treg、Th1、Th17细胞相关转录因子表达水平.结果经过TCV干预,小鼠自身反应性T细胞的增殖能力被显著抑制,CII抗体水平也显著下降；相较CIA组,TCV组Treg细胞百分比上升,Th1、Th17细胞百分比明显降低；各细胞分泌细胞因子的能力也发生相应的变化,其中TGF-β上升,IFN-γ、IL-17降低；Ireg细胞转录因子Foxp3基因水平提高,Th1、Th17细胞转录因子T-bet、RORα及RORγt的mRNA水平降低.结论TCV干预可通过抑制CIA小鼠自身反应性T细胞增殖,上调小鼠体内Treg细胞并抑制Th1、Th17细胞的表达而发挥免疫调节作用,有效降低小鼠发病严重度和关节炎症.
