原发性红斑肢痛症一家系的临床与SCN9A基因突变

原发性红斑肢痛症(primary erythermalgia)是一种少见的自主神经疾病,多在儿童及青春期起病,以肢体远端血管极度扩张、皮肤肿胀以及剧烈的肢端灼痛为主要临床特征.原发性红斑肢痛症的病因和发病机制至今尚不清楚,近年来的研究表明,遗传因素在原发性红斑肢痛症的发病中占重要地位,多呈常染色体显性遗传.现已证实编码电压门控钠通道α亚单位的SCN9A基因(sodium channel, voltage-gated, type Ⅸ,SCN9A)是原发性红斑肢痛症致病基因[1].我们2005年1月在湖南发现了1个原发性红斑肢痛症大家系,共6代98人,对本例大家系临床特点和先证者SCN9A基因突变进行了分析.

电压门控钾通道自身抗体相关性边缘性脑炎

边缘性脑炎(limbic encephalitis,LE)是指选择性地累及边缘性结构(海马、杏仁核、下丘脑、岛叶及扣带回皮质等)的一类中枢神经系统炎性疾病[1].近年来,在一些LE患者的血清中能够检测出电压门控钾通道(voltage-gated potassium channel,VGKC)自身抗体(VGKC-ab),其中一些患者对免疫治疗有较好反应,提示这些抗体具有致病性.越来越多的证据显示,VGKC-ab与LE有密切关系[2].我们对VGKC、LE以及两者之间的关系进行简要综述.

人喉癌Hep-2细胞膜钾离子通道与RNA编辑酶1的相关性

目的研究人喉癌细胞系Hep-2细胞膜钾离子通道特性及其与RNA编辑酶1(RNA-dependent adenosinedeaminase1,ADAR1)的相关性.方法以Hep-2细胞为研究对象,采用穿孔膜片钳全细胞记录法研究钾离子通道特性,用逆转录聚合酶链反应检测四乙胺(tetraethylammonium,TEA)阻断钾离子通道前后Hep-2细胞ADAR1 mRNA的表达.结果 Hep-2细胞膜的静息膜电位为(-29.8±1.9)mV,在钳制电压-40 mV,阶跃电压在-80～+80 mV,记录到一种跨膜电流,该跨膜电流具有电压依赖、外向整流特性,该电流在延迟25ms后大激活,800 ms内不失活,可被阻断剂TEA阻断.Hep-2细胞钾离子通道被TEA阻断前后ADAR1mRNA相对表达量存在显著性差异.结论 Hep-2细胞膜上存在延迟整流钾离子通道,此钾离子通道可能和ADAR1 mRNA的表达密切相关.

全细胞膜片钳技术在视网膜神经元电压门控离子通道研究中的应用

了解视网膜各种神经元神经电信号特点、产生机制及影响因素，对从功能角度评价视网膜神经细胞培养状态和移植效果具有重要意义。本文介绍一种先进的电生理学研究方法——全细胞膜片钳法在视网膜神经生理学中的应用，以及通过该方法对视网膜神经节细胞、双极细胞、水平细胞和无长突细胞部分电压门控离子通道进行研究所取得的进展。

口腔鳞状细胞癌及癌前病变组织中钾离子通道Kv3.4表达的研究

目的 探讨钾离子通道Kv3.4在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)及癌前病变组织中的表达及临床意义.方法 收集安徽省口腔医院病理科2013年1月至2014年6月存档的口腔癌前病变白斑及OSCC石蜡标本共57例,用免疫组化SP法检测该57例样本中Kv3.4的表达,分析其表达情况与癌前病变及口腔鳞状细胞癌的病理分级、临床分期及淋巴结转移等临床病理因素之间的关系.收集2014年5月至2015年3月安徽医科大学第一附属医院口腔颌面外科病房收治的6例正常口腔黏膜组织,23例OSCC及13例癌前病变患者术中切除组织的冰冻标本,采用荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别在分子和蛋白水平检测Kv3.4的表达,分析其表达与癌前病变及口腔鳞状细胞癌的病理分级等因素之间的关系.结果 荧光定量PCR结果显示Kv3.4蛋白在口腔正常黏膜、癌前病变及OSCC组织中的相对表达量分别为0.85±0.48、3.50±2.51及18.48±7.70,OSCC组及癌前病变组均显著高于正常组(P=0.002,P=0.029).蛋白质印迹法结果显示OSCC组和癌前病变组Kv3.4蛋白的相对表达量分别为0.87±0.14、0.35±0.03,均显著高于正常组(0.18±0.10),差异均有统计学意义(P=0.002,P=0.028).免疫组化结果显示Kv3.4蛋白在口腔正常黏膜、癌前病变及OSCC组织中均有阳性表达,其阳性表达率分别为2/6、13/18及95％(37/39),各组之间差异有统计学意义(P＜0.05).OSCC组Kv3.4蛋白表达与病理分期存在显著相关性(P＜0.05),与患者性别、有无淋巴结转移和临床分期均无相关性(P＞0.05).结论 Kv3.4的表达可能与OSCC的发生和发展存在相关性,Kv3.4有望成为OSCC和癌前病变的早期辅助诊断的分子指标之一,可为OSCC的治疗提供新靶点.

电压门控钠离子通道Nav l.9在牙髓炎牙髓中表达的动物实验

目的 通过检测电压门控钠离子通道Nav1.9在牙髓炎动物模型牙髓中的表达,探讨Nav1.9与炎性疼痛的关系.方法 将建立牙髓炎模型的36只大鼠分为3个实验组:造模后1、3、5d组,每组12只;以12只健康大鼠作为正常对照组.反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)法检测各组牙髓中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和Nav1.9 mRNA的表达,酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法和蛋白质印迹法检测各组Navl.9蛋白的表达,并对各组间的差异进行单因素方差分析.结果 RT-PCR结果显示,3个实验组TNF-α的表达(ld组:0.514±0.098,3d组:0.739 ±0.104,5 d组:1.238 ±0.082)均显著高于正常对照组(0.147±0.016),各组间差异均有统计学意义(P＜0.01);3个实验组牙髓中Nav1.9 mRNA相对表达量(1d组:0.296 ±0.038,3 d组:0.409±0.013,5d组:0.487 ±0.028)与正常对照组(0.223±0.020)相比均呈显著上升趋势,各组间差异均有统计学意义(p＜0.05).ELISA结果显示,正常对照组、1d、3d及5d组牙髓中Nav1.9的表达量分别为(4.013±0.292)、(5.143±0.101)、(5.835±0.088)及(6.307 ±0.137) μg/L,各组间差异均有统计学意义(P＜0.05).蛋白质印迹法结果显示,3个实验组Nav1.9蛋白相对表达量(1d组:0.106±0.007,3d组:0.170 ±0.013,5d组:0.238±0.004)均显著高于正常对照组(0.073±0.004)(P ＜0.05).结论 Nav1.9在疼痛牙髓中表达增强并随疼痛加重而升高,提示Nav1.9与炎性牙痛感觉过程的发生相关.

脑血管痉挛的发病机制及治疗新进展

1 脑血管痉挛的发病机制 1.1 K+通道脑血管平滑肌上存在多种具有不同功能特性和激活机制的钾通道,被激活后引起K+外流和膜超极化,终由于电压门控钙通道关闭,细胞内Ca2+浓度降低,血管舒张.

生后发育过程中大鼠下丘脑NMDA受体各亚单位mRNA基因表达

中枢NMDA受体通道具有一种独特的门控方式,既受配基门控又受电压门控,而这种独特的门控通道又必须由各种亚单位形成的多样化的异寡聚体才具有一定的活性和功能.从胚胎形成到生后发育,中枢NMDA受体各亚单位及其所组成的异寡聚体具有各自不同的时空特性,其功能以及药理学特性也随发育过程而变化.本研究应用RT-PCR技术,研究在生后发育过程中听觉中枢神经系统下丘NMDA受体NR1、NR2A、NR2B和NR2CmRNA基因的表达,以期为在分子水平上揭示其在生后发育过程中的规律.

慢性脓毒症对大鼠离体肌纤维电压门控钠离子通道的作用

阵发性腰痛2年 双下肢疼痛2个月

患者 女性,44岁,公务员,因阵发性腰痛2年、双下肢疼痛2个月,于2018年6月25日人院.患者2年前(2016年9月)无明显诱因出现阵发性腰痛,疼痛剧烈,均发生于夜间睡眠期,发作频率2～3次/晚,持续时间约30 min,起床活动后可改善,视觉模拟评分(VAS)10分,不伴头痛、恶心呕吐、心悸气短,无运动障碍和感觉异常,当地医院诊断为“骶髂关节炎”,予针灸治疗1～2个月后症状好转.2月余前(2018年4月3日)无明显诱因出现阵发性双侧膝关节酸软无力感,发作频率7～8次/d,持续时间约10 min,尤以午后显著,不伴头晕、恶心呕吐、心悸气短,无运动障碍和感觉异常,症状进行性加重,未予特殊处理.2个月前(2018年5月14日)无明显诱因突发双侧大腿深部剧烈疼痛,VAS评分10分,疼痛性质难以描述,发作频率1次/h,持续时间约5 min,无明显加重或缓解因素,并逐渐出现四肢肌肉跳动,尤以夜间显著,伴双侧大腿和膝关节酸软无力感,活动后多汗,再次就诊于当地医院,神经系统查体未见明显异常;实验室检查血常规血红蛋白(Hb) 100 g/L(110 ～ 150 g/L),血清类风湿因子(RF)、抗链球菌溶血素O(ASO)、C-反应蛋白(CRP)、人类白细胞抗原B27(HLA-B27)、抗谷氨酸脱羧酶(GAD)抗体均于正常值范围;腰椎穿刺脑脊液检查外观清亮、透明,常规、生化、细胞学均于正常值范围,细菌涂片和培养、抗酸染色、墨汁染色呈阴性;肌电图显示,左侧腓总神经末梢潜伏期较右侧延长;双下肢血管超声、头部MRI和MRA、脊椎CT均未见明显异常;临床诊断为“双下肢疼痛、肌肉跳动原因待查”,予以加巴喷丁、氨酚待因、维生素B1、甲钻胺、维生素C、乳酸亚铁口服(具体剂量不详)和针灸治疗,2～3d后双下肢疼痛略缓解.1周前(2018年6月18日)双下肢疼痛进展至腰背部,伴双足麻木感和灼烧感,活动时加重,蹲起后出现头晕伴双下肢无力,数秒后自行缓解,不伴黑蒙、意识障碍.为求进一步诊断与治疗,至我院就诊.患者自发病以来,失眠,精神、食欲欠佳,大小便正常,近2个月体重下降6 kg.

自发性癫(疒间)大鼠海马CA3区神经元电压门控钙通道功能异常

自发性癫(疒间)大鼠(SER;zi/zi,tm/tm)是通过异型合子大鼠交配得到的一种双重突变型大鼠,8周龄以上的SER可自发表现出强直性惊厥,并在皮层与海马脑电图(EEG)中伴随有5～7 Hz棘波(疒间)样放电.SER是研究新型抗癫(疒间)药物长短期药效的一种非常有用的动物模型.在单刺激苔状纤维反复触发的条件下,SER海马CA3区神经元表现为长时程的去极化漂移.这可能是由于L型钙通道活动增加而引起钙内流增大形成的结果.现有的许多研究表明钙通道在诱发癫(疒间)发作中发挥关键作用,钙通道功能异常参与到了SER癫(疒间)发作的过程中.本实验利用全细胞膜片钳记录模式对急性分离的SER海马CA3区神经元进行研究,探讨神经元的异常兴奋活动是否由电压门控钙通道(VDCCs)而引起.

胶质细胞能释放神经递质吗

在过去的二十年,对信息的处理正逐步从神经元发展为整个中枢神经系统.神经元诱发的胶质细胞内钙离子浓度的升高能诱发胶质递质(gliotransmitters)如谷氨酸、ATP和D-丝氨酸的释放.此过程能够调节神经元的兴奋性及递质的释放,并在诸如中风、癫(癎)、神经分裂症、阿尔茨海默氏病和艾滋病毒感染等疾病中发挥作用.然而,对于胶质细胞能否在在体环境下外排递质尚有争议.解决这个问题将会进一步加深笔者对大脑功能的认识.长久以来一直认为胶质细胞能重吸收神经递质,但是有关其释放递质的提法还相对较少.有很多证据表明培养的胶质细胞可以外排神经递质,并且通过其他机制释放,诸如已被证实的电压门控通道.

酸敏感离子通道对大电导钙激活钾通道的抑制及其相互作用

酸敏感离子通道(acid-sensing ion channels,ASICs)是神经细胞的非电压门控阳离子通道,广泛分布于中枢及外周神经系统,参与痛觉、触觉、酸味觉的形成.在突触可塑性、学习记忆功能、炎症及脑缺血等生理病理过程中发挥重要作用.ASICs分别由5个亚基:ASICla、ASICIb、ASIC2a、ASIC2b和ASIC3通过形成同聚体或异聚体构成.每个亚基都有2个跨膜区,1个大的富含半胱氨酸的胞外域和均位于胞内的N端与C端构成.

氯离子通道与肺动脉血管张力

肺血管张力的变化直接影响着肺循环的压力,具有十分重要的生理和病理生理学意义.血管张力的维持与血管平滑肌细胞膜的离子通道密切相关.肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)膜上主要分布有四种离子通道[1] 如钾、钠、钙及氯离子通道.这些离子通道均参与和决定了平滑肌细胞膜的膜电位,而膜电位不仅是调节钙离子经由电压依赖性(或电压门控)钙通道(voltage-dependent Ca2+ channels,VDC)内流,而且也是影响细胞内库存钙离子释放和平滑肌收缩装置对钙离子敏感性的关键的调节因素.通过调控钙离子的运输和膜电位,离子通道参与了产生和调节血管张力的各个方面[2].现就PASMCs(个别研究选自其他平滑肌组织)氯离子通道的生物物理和药理学特点及其在生理及病理情况下对肺动脉张力的影响加以综述.

电压门控钾通道自身抗体相关性边缘性脑炎的研究进展

边缘性脑炎(LE)是指选择性地累及边缘性结构的一类中枢神经系统炎性疾病.电压门控钾通道(VGKC)为镶嵌在中枢和周围神经系统神经元膜上的糖蛋白,是神经系统信号传导的组成元件,在维持静息膜电位和神经元动作电位中发挥着关键作用.VGKC自身抗体相关性LE是常见的自身免疫性神经系统疾病,患者体内能与VGKC发生免疫共沉淀的抗体主要是富亮氨酸胶质瘤失活1蛋白(LGI1)和接触蛋白相关样蛋白2(Caspr2),故其可分为抗LGI1抗体阳性LE、抗Caspr2抗体阳性LE、LGI1和Caspr2抗体阴性LE.本文对VGKC自身抗体相关性LE患者的临床表现、诊断及治疗方法进行了综述,以期提高VGKC自身抗体相关性LE临床诊治效果及改善患者预后.

二氯乙酸盐对肺动脉高压大鼠肺组织KV1.5表达的影响

目的 探讨二氯乙酸盐对肺动脉高压大鼠肺组织Kv1.5表达的影响.方法 雄性SD大鼠32只,8周龄,体重200～250 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=8):正常对照组(C组)、二氯乙酸盐对照组(D组)、肺动脉高压组(PAH组)和二氯乙酸盐治疗组(PD组).采用左肺切除术联合皮下注射野百合碱60mg/kg的方法制备肺动脉高压模型.PD组于皮下注射野百合碱后,给予二氯乙酸盐80mg/kg灌胃,1次/d,连续28 d,PAH组给予等量生理盐水;D组不制备模型,给予相同剂量二氯乙酸盐灌胃.于皮下注射野百合碱后28 d时测定肺动脉压(PAP),随后处死,取肺组织,计算肺小动脉中膜厚度百分比和右心室肥厚指数,采用Western blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)和Kv1.5蛋白的表达水平,采用RT-PCR法检测Kv1.5 mRNA的表达水平.结果 与C组比较,PAH组和PD组PAP、中膜厚度百分比及右心室肥厚指数升高,肺组织Kv1.5 mRNA及其蛋白表达下调,PCNA表达上调(P＜0.05),D组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与PAH组比较,PD组PAP、中膜厚度百分比及右心室肥厚指数降低,肺组织Kv1.5mRNA及其蛋白表达上调,PCNA表达下调(P＜0.05).结论 二氯乙酸盐减轻大鼠肺动脉高压与上调肺组织Kv1.5表达,抑制肺血管重构有关.

不同浓度褪黑激素对新生大鼠海马神经元电压门控性瞬时外向钾电流的影响

目的 探讨不同浓度褪黑激素对新生大鼠海马神经元电压门控性瞬时外向钾电流(I_A)的影响.方法 原代培养新生Wistar大鼠(出生时间<12 h)海马锥体神经元7～12 d.配制褪黑激素溶液,终浓度依次为1 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L、100 μmol/L和1 mmol/L,选择胞体清晰、光晕良好、轴突明显的锥体神经元采用膜片钳全细胞记录模式记录I_A的基本电生理特点,记录不同浓度褪黑激素作用下I_A的动力学.结果 与褪黑激素作用前比较,1、10 nmol/L褪黑激素作用后海马锥体神经元I_A幅度升高(P<0.05),其余浓度褪黑激素作用前后海马锥体神经元I_A幅度比较差异无统计学意义(P>0.05);10 nmol/L褪黑激素作用后海马椎体神经元电压门控性瞬时外向钾通道激活曲线的半数激活膜电位及曲线斜率因子与褪黑激素作用前比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 生理浓度褪黑激素可增加体外新生大鼠海马椎体神经元I_A.

七氟醚对大鼠背根神经节电压门控性离子通道的影响

目的观察七氟醚对大鼠背根神经节(DRG)细胞电压门控性Na+、K+、Ca2+离子通道的影响.方法取SD大鼠胸段和上腰段的DRG,在32～34℃下,用胶原酶、胰蛋白酶孵育60～90min后获取急性分离的DRG细胞.以-70mV为钳制电压,间隔10mV逐步递增测试电压至0mV,膜片钳全细胞记录DRG细胞的Na+、K+、Ca2+电流.纯氧驱动七氟醚溶解于培养液,观察不同浓度七氟醚对细胞膜Na+、K+、Ca2+电流的影响,并记录细胞外液中七氟醚浓度.结果与用药前比较,七氟醚在0.4、0.9、1.8 mmol/L时DRG细胞的Na+、K+电流差异无显著性(P＞0.05);而七氟醚在0.4 mmol/L时Ca2+电流明显受抑制(P＜0.05).结论七氟醚在脊髓水平的抗伤害感受作用可能与其抑制DRG细胞Ca2+电流的作用有关.

TRPM8基因敲除小鼠的饲养繁殖及基因型鉴定

瞬时型感受器电位蛋白（transient receptor potential， TRP）是一种阳离子通道，它包括多个成员，哺乳动物中就存在三十多个［1］，这些成员一般具有6个跨膜结构域，并以四聚体形式发挥作用。TRP离子通道受电压门控，而温度和配体则可通过改变电压而实现对通道开闭的调节，因此被认为是温度感知和温度调节的参与者。melastatin 8型TRP（TRPM8）可被冷激活，被认为是一种冷受体［2］。新研究发现TRPM8不仅为冷知觉所必需，而且在被低温或冷却剂激活后可在过敏性支气管哮喘的某些病理生理改变中起重要作用［3］，具有重要的临床和药理学研究价值。

若干临床疾病与电压门控钠通道的特异调控

电压门控钠通道在细胞电兴奋活动中起着至关重要的调控作用.自19世纪40年代,Hodgkin等[1]首次定性地鉴定了兴奋性细胞膜钠通道的电生理活动特征,相当一段时期内,对钠通道分型的认识似乎主要依据其对河豚毒素(TTX)的药理敏感性,即TTX-敏感型(TTX-S)或TTX-非敏感型(TTX-R)钠通道.