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心肌营养素1修饰的神经干细胞移植对癫(癎)持续状态大鼠海马损伤及苔藓纤维发芽的影响
目的 观察心肌营养素1(CT1)修饰的神经干细胞(NSCs)移植到癫(癎)持续状态(SE)大鼠海马后的存活、迁移和分化情况,探讨CT1-NSCs移植对海马神经元损伤及苔状纤维发芽(MFS)的影响.方法 建立氯化锂-匹罗卡品致SE大鼠模型,随机分为CTI-NSCs移植组、单纯NSCs移植组、模型组和正常对照组,每组18只.各组再分为移植后1、4、8周3个时间点,每个时间点6只.共聚焦免疫荧光显微镜下观察移植的NSCs在脑内存活、分化及迁移情况;Nissl染色观察海马神经元形态并计数CA1区神经细胞数;Timm染色检测海马齿状回MFS形成.结果 (1)移植后4周及8周,CT1-NSCs移植组双标阳性细胞数量明显多于单纯NSCs移植组,前者可见神经细胞向周围迁移,后者未见明显迁移现象.(2)SE后大鼠CA1区神经细胞数随时间推移进行性减少,CTI-NSCs移植组细胞数(移植后1、4,8周分别为68.85±11.49、60.89±12.17和51.51±13.34)多于单纯NSCs移植组(67.92±10.78、42.56±11.47和30.49±10.12),4、8周时差异有统计学意义(t=4.650、5.334,P<0.05).(3)SE后大鼠齿状回内分子层可见MFS形成,且MP3评分随时间推移进行性增高;移植后1、4,8周时CT1-NSCs移植组MFS分值(0.77±0.04、2.48±0.89和2.39±0.82)明显低于单纯NSCs移植组(1.12±0.62、3.17±0.64和3.88±0.51,t=6.059、9.511、9.728,P<0.05).结论 CT1能够促进NSCs在SE大鼠脑内存活、迁移和分化,CTI-NSCs移植对SE大鼠海马损伤有修复作用,并可抑制海马MFS形成.
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海马干细胞移植对癫痫鼠苔状纤维发芽抑制作用的研究
Turner等[1]证实大鼠海马胚胎细胞移植对于海人酸(KA)所致癫痫鼠神经元的损害具有一定的修复作用,但胚胎细胞移植受细胞来源和伦理学等多方面限制.神经干细胞的发现为细胞移植治疗颞叶癫痫等神经系统疾病提供了广阔前景.本研究将分离培养的大鼠海马干细胞移植至KA所致癫痫模型鼠CA3区,应用形态学和免疫组化等方法观察移植后癫痫鼠神经病理学改变及神经干细胞的存活、迁移情况,并探讨其作用机制.
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自发性癫(疒间)大鼠海马CA3区神经元电压门控钙通道功能异常
自发性癫(疒间)大鼠(SER;zi/zi,tm/tm)是通过异型合子大鼠交配得到的一种双重突变型大鼠,8周龄以上的SER可自发表现出强直性惊厥,并在皮层与海马脑电图(EEG)中伴随有5～7 Hz棘波(疒间)样放电.SER是研究新型抗癫(疒间)药物长短期药效的一种非常有用的动物模型.在单刺激苔状纤维反复触发的条件下,SER海马CA3区神经元表现为长时程的去极化漂移.这可能是由于L型钙通道活动增加而引起钙内流增大形成的结果.现有的许多研究表明钙通道在诱发癫(疒间)发作中发挥关键作用,钙通道功能异常参与到了SER癫(疒间)发作的过程中.本实验利用全细胞膜片钳记录模式对急性分离的SER海马CA3区神经元进行研究,探讨神经元的异常兴奋活动是否由电压门控钙通道(VDCCs)而引起.
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海人酸诱导癫痫大鼠齿状回神经肽Y能苔状纤维侧枝发芽
目的：探讨海马苔状纤维侧枝发芽与癫痫发作敏感性形成的关系。材料与方法：在海人酸诱发大鼠出现癫痫发作后，采用免疫组织化学染色法观察大鼠海马齿状回内神经肽Y能纤维的异常发芽。结果：首次证实在癫痫发作后7天时，在海马齿状回内分子层就已出现神经肽Y能纤维的异常增生。结论：这可能是对癫痫发作后齿状回门区神经肽Y能神经元缺失的一种代偿性变化。
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大鼠颅脑损伤后早期癫痫发作时海马改变
目的 制作大鼠颅脑液压冲击伤后早期癫痫发作模型,观察海马的胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和海马苔状纤维变化.方法 将大鼠随机分组,实验组按照不同的打击力度制作颅脑液压冲击伤模型,测定伤后7d大鼠海马胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,行Timm染色,镜下观察.结果 重度冲击伤组大鼠均出现了早期癫痫发作,GFAP平均积分吸光度(A)值:CA3区为38.87±1.24,齿状回为42.35±1.40,苔藓纤维Timm染色颗粒的平均积分A值:1.38 ±0.10,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 海马区域GFAP表达和苔状纤维出芽增生在伤后早期癫痫发作大鼠明显增加,与癫痫发作敏感性密切相关.
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移植的齿状回颗粒细胞在培养的大鼠海马组织上移行特征
为探讨齿状回颗粒细胞在培养的海马组织表面上的移行过程以及苔状纤维的投射特征,本实验从生后3 d的绿色荧光蛋白(GFP)基因导入的SD大鼠海马组织切片中分离出齿状回颗粒细胞层,移植到培养的SD大鼠海马组织切片表面上,共同培养3～4 d后,激光共聚焦显微镜观察.结果显示,97.6%的细胞移行到齿状回和CA3区,仅有2.4%细胞移行到CA2和CA1区.移行到齿状回颗粒细胞层的颗粒细胞投射苔状纤维到齿状回门区和CA3区的透明层,却不到CA2和CA1区.上述结果提示,在海马组织培养中移植的齿状回颗粒细胞的移行以及苔状纤维的投射方向明显受宿主的影响.
