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乳鼠肌源干细胞的培养及其成肌分化的实验研究
目的 体外培养乳鼠肌源干细胞,探讨其成肌分化的能力. 方法 采用混合酶消化法制备乳鼠肌源干细胞,反复差速贴壁法纯化,利用银环蛇毒素鉴定肌管表面的乙酰胆碱受体,并对相应的与肌分化相关的蛋白进行免疫荧光分析. 结果 体外培养的肌源干细胞分化成肌管,表达乙酰胆碱受体,且表达骨骼肌和心肌特异性蛋白. 结论 采用混合酶消化法消化,反复差速贴壁法纯化可以得到多数量高纯度的肌源干细胞.
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封闭加手法治疗隐神经卡压综合征20例疗效观察
我院自1999年10月至今采用封闭加手法治疗的方法共收治隐神经卡压综合征患者20例,效果满意,报告如下。1 临床资料本组20例中男6例,女14例。年龄20～78岁,平均44.2岁。左侧8例,右侧15例,其中3例为双侧发病,均为女性。病程1周～3年。有轻重不同的外伤史者8例,感受寒湿者10例,无明显诱因者2例。临床表现:大腿下内侧和小腿前内侧持续性疼痛及酸乏感,疼痛范围弥散,走路、劳累、感受寒湿或久站后加重。皮肤痛觉过敏或减退,往往有针刺或烧灼样疼痛。隐神经出口(内收肌管前口)即股骨内上髁上方约10cm处压痛明显,并向膝关节内侧及小腿前内侧放射。胫骨内缘及腓肠肌有压痛。内收肌管隐神经封闭治疗后症状可立即减轻或缓解。
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收肌管压迫综合征的解剖与临床研究进展
收肌管压迫综合征(Adductor canal compression syndrom),是一种多发生在年轻人中的由于股动脉、股静脉、隐神经受周围肌肉及肌腱异常收缩压迫终造成急性动脉闭塞所致的一组症候群.自从此综合征的严重后果可导致截肢以来,人们便认识到此综合征的重要性.此综合征多发生于年轻人在运动后,尤其是在军事训练活动中,出现下肢痉挛明显局部缺血时[1].现就对此综合征的解剖与临床研究进展综述如下.
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地塞米松对离体培养肌管内长寿命蛋白降解的影响及其机制探讨
目的:研究地塞米松对体外培养的骨骼肌肌管内长寿命蛋白降解的影响及其可能的作用机制.方法:无菌分离Wistar大鼠(2d龄)下肢肌肉,组织块培养法增殖、传代纯化成肌细胞,融合形成肌管.L-[3,5-3H]-酪氨酸标记肌管蛋白后,随机分成两组,A组:分别应用不含地塞米松(对照组)和含有地塞米松10nmol/L(A1组)、100nmol/L(A2组)、1000nmol/L(A3组)的培养液培养肌管,12h、24h、36h和48h后使用液体闪铄计数仪测定培养液和细胞内L[3,5-3H]-酪氨酸的含量,计算肌管长寿命蛋白的降解率.B组:分别应用含蛋白酶体抑制剂MG132(50μmol/L,B1组)或含有MG132(50μmol/L)和地塞米松100nmol/L(B2组)的培养液培养肌管24h,相同方法测定肌管长寿命蛋白降解率.结果:A1组、A2组和A3组长寿命蛋白降解率均较对照组显著增加,差异有显著性(P＜0.01).A2组和A3组长寿命蛋白降解率均较A1组增加显著,差异有显著性(P＜0.01).A2组和A3组间相比长寿命蛋白降解率差异无显著性(P＞0.05).B1组长寿命蛋白降解率较对照组(24h)降低明显,差异有显著性(P＜0.01).B2组长寿命蛋白降解率较A2组(24h)显著降低,差异有显著性(P＜0.01).结论:实验结果提示:(1)泛素蛋白酶途径是骨骼肌肌管长寿命蛋白的重要降解途径之一.(2)地塞米松能通过激活肌管内泛素蛋白酶途径而增强长寿命蛋白的降解,此效应在一定范围内呈剂量依赖关系.
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股骨收肌管骨化一例
患者男31岁,因左股骨取钢板及左大腿内侧肿物于2001年3月22日住院.3年前患者被油丝绳打伤致双股骨粉碎骨折,左尺桡骨骨折,伤后于沧州某医院行双股骨钢板内固定治疗.术后第14天拆线,双足趾踝自主活动良好,以后逐渐出现左足趾、踝背伸无力,至伤后4个月出现左大腿内侧坚硬肿物,并伴有左小腿感觉异常及足迹屈内翻畸形.
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中央核肌病的研究进展
先天性肌病是一组病理上以先天性肌纤维结构异常为特征,临床表现为全身性肌张力低下,肌肉萎缩、力弱,病情进展缓慢或相对稳定的一组肌肉疾病.单纯从临床表现很难区分具体的先天性肌病类型,而病理特征性表现可作为鉴别诊断的重要依据.中央核肌病( centronuclear myopathy)作为先天性肌病中的一类疾病,病理突出特征是具中央核的肌纤维比例明显增高.该病1966年由Spiro等[1]首先报道,由于病理表现类似胎儿期的肌管,故命名为肌管肌病(myotubular myopathy).然而尚未能证实该病是由于肌肉在肌管发育阶段停止而形成的,所以命名为中央核肌病更合适.
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TNF对离体培养肌管蛋白降解率的影响及其机制的研究
目的研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对体外培养的骨骼肌肌管内长寿命蛋白降解的影响及其可能的作用机制.方法通过无菌分离Wistar大鼠(2日龄)下肢肌肉,组织块培养法增殖、传代纯化成肌细胞,融合形成肌管,使用L--酪氨酸标记肌管蛋白后,随机分成四组:对照组和TNF组分别应用不含TNF和含有TNF-α(2 000U/mL)的培养液培养肌管12、24、36和48h.MG132组和TNF + MG132组则分别使用含蛋白酶体抑制剂MG132(50μmol/L)或含有MG132(50μmol/L)+TNF-α(2 000U/mL)的培养液培养肌管24h.应用液体闪烁计数仪测定培养液和细胞内L--酪氨酸的含量,计算肌管长寿命蛋白的降解率.结果长寿命蛋白降解率TNF组各时间点均较对照组显著增加(P＜0.01),MG132组较对照组显著降低(P＜0.01),TNF + MG132组显著低于TNF组,差异有显著性意义(P＜0.01).结论泛素-蛋白酶体途径是骨骼肌肌管长寿命蛋白的重要降解途径之一;TNF-α能作用于骨骼肌肌管,增强蛋白降解率;泛素蛋白酶途径是TNF-α增强骨骼肌蛋白降解的主要途径之一.
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地塞米松对离体培养肌管泛素系统基因表达的调节及意义
目的研究地塞米松对体外培养的骨骼肌肌管内泛素-蛋白酶体途径基因表达的调节及其意义.方法无菌分离Wistar大鼠(2日龄)下肢肌肉,组织块培养法增殖、传代成肌细胞,融合形成肌管,并随机分为4组,分别应用含有地塞米松10ng/ml(A组)、100ng/ml(B组)、1 000ng/ml(C组)和不含地塞米松(D组)的培养液培养肌管,24h后收集肌管,核糖核酸印迹法测定肌管内泛素和蛋白酶体C2亚基mRNA的表达变化.结果肌管内泛素mRNA(2.4kb)和蛋白酶体C2亚基mRNA的表达A组、B组和C组均较D组显著增强(P<0.01),B组和C组均较A组显著增强(P<均0.01),而B组与C组相比无显著差异.结论地塞米松能增强体外培养的骨骼肌肌管内选择性蛋白降解途径--泛素系统的基因表达,此效应在一定范围内呈剂量依赖关系.
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结蛋白N端结构域决定其在分化的肌母细胞中的负向运输
目的:在分化的肌母细胞或肌管中,研究结蛋白的运输机制.方法:利用荧光漂白恢复的方法,在野生型肌管细胞中直接观察绿色荧光蛋白标记的结蛋白desmin-EGFP的运动;通过过表达dynamitin,抑制胞浆动力蛋白cytoplasmic dynein介导的沿微管向负极的运输,观察结蛋白在微管驱动蛋白Kinesin-1重链Kif5b敲除细胞中定位的改变;构建Flag tag标记的不同结构域缺失的结蛋白表达载体,转染野生型及Kif5b敲除细胞,通过免疫荧光染色检测不同结构域缺失对结蛋白定位的影响.结果:在野生型肌管细胞内,desmin-EGFP沿正向和负向同时进入被漂白的区域.在Kif5b敲除细胞内,结蛋白聚集于细胞中心；抑制动力蛋白的活性使得结蛋白在该细胞中的聚集程度减轻.结蛋白N端蛋白结构域缺失对其在野生型细胞中的定位没有影响,但使其在Kif5b敲除细胞中心的聚集明显减弱.结论:结蛋白在分化的肌母细胞或肌管中的定位是正向运输和负向运输双重作用的结果,其中负向运输可能由动力蛋白负责,并依赖于结蛋白N端蛋白结构域的表达.
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地塞米松对骨骼肌细胞蛋白降解的调节及其机制研究
目的研究地塞米松对体外培养的骨骼肌肌管内长寿命蛋白降解的影响及其可能的作用机制.方法无菌分离(2日龄)Wistar大鼠双下肢肌肉,组织块法培养、增殖、传代纯化成肌细胞,融合形成肌管,使用L [3,5 -3H]-酪氨酸标记肌管长寿命蛋白后,随机分成两组.A组:分别用不含地塞米松(对照组)或含地塞米松10 nmol/L(A1组)、100 nmol/L(A2组)、1 000 nmol/L(A3组)的培养液培养肌管,12、24、36和48 h后使用液体闪烁计数仪测定培养液和细胞内L -[3,5 -3H] -酪氨酸的含量,计算肌管长寿命蛋白的降解率.B组:分别用含蛋白酶体抑制剂MG132(50 μmol/L,B1组)或含MG132(50 μmol/L)和地塞米松100 nmol/L(B2组)的培养液培养肌管24 h,相同方法测定肌管长寿命蛋白降解率.结果 A1、A2和A3组长寿命蛋白降解率均较对照组显著增加,差异有显著性(P均<0.01).A2组和A3组长寿命蛋白降解率均较A1组显著增加,差异有显著性(P均<0.01).A2组和A3组比较,长寿命蛋白降解率差异无显著性(P>0.05).B1组长寿命蛋白降解率较对照组(24 h)降低明显,B2组长寿命蛋白降解率较A2组(24 h)显著降低,差异均有显著性(P均<0.01).结论泛素-蛋白酶体途径是骨骼肌肌管长寿命蛋白的重要降解途径之一.地塞米松能通过激活肌管内泛素-蛋白酶体途径而增强长寿命蛋白的降解,此效应在一定范围内呈量-效依赖关系.
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中央核性肌病1例
中央核性肌病由Spiro等1966年首先报告, 其中主要临床特点为儿童期出现肢体肌肉无力, 呈缓慢进行, 组织化学改变特点为具有中心核的Ⅰ型纤维占优势, 由于其结构与肌管相似, 故又称肌管肌病Myotubularmyopathy.
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应力作用下成肌细胞分化的信号转导研究
1成肌细胞分化
肌肉发生主要是指在胚胎发育的过程中，其中涉及诸多的生物学过程。在时间上，这一过程可以大致分为以下三个阶段：定向分化、细胞增殖和终极分化［1］。
2成肌细胞分化过程中细胞周期的调节
成肌细胞分化形成肌管的过程中，成肌细胞从细胞周期中退出，相互融合形成多核的肌管细胞。因此，细胞周期在肌肉发生中起着相当重要的作用。CDK 抑制因子 p21和眼癌蛋白（pRb）对肌肉发生中的有丝分裂后状态的建立起重要作用［2］。溴脱氧尿苷标记实验显示上调 p21伴随着退出细胞周期的开始和骨骼肌分化信号通路的早期事件。缺少 pRb ，一个CDK 抑制剂的下游靶蛋白，肌细胞不能产生不可逆的细胞周期的退出和分化。骨骼肌特异性基因的转录可被cyclins和CDKs或 E2F1的强制性表达所抑制，此抑制作用可被激活突变型的pRb的表达所逆转［3］。 -
肌卫星细胞体外融合成自主收缩肌管的方式
目的 探讨骨骼肌肌卫星细胞在体外融合成肌管的方式和肌管收缩特点.方法 取新生2d的SD大鼠6只,无菌条件下取股四头肌处的肌卫星细胞进行细胞培养和免疫荧光鉴定;倒置显微镜下观察并记录细胞融合方式和收缩特点.结果 经免疫荧光鉴定,肌卫星细胞表达特异性蛋白Pax7,其纯度为90.3%.观察到单细胞间、单细胞与肌管间和肌管与肌管间的细胞融合方式.在无乙酰胆碱、电刺激和其他细胞接触的条件下,存在自主收缩的肌管.结论 肌卫星细胞在体外可经3种方式融合成自主收缩的肌管.
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去细胞外钙对培养鸡胚肌管磷脂酰肌醇水解的影响
本工作研究了去细胞外钙对取自9天来亨鸡胚的培养肌管磷脂酰肌醇水解的影响.80 mmol/L K+暴露可以显著升高磷脂酰肌醇的水解.在暴露于无钙任氏液的肌管中,磷脂酰肌醇的水解随时间延长而呈指数递减,时间常数约为26分钟.在胞外无钙时,80 mmol/L K+ 引起的磷脂酰肌醇水解与对照(正常任氏液)相比略有下降.结果表明,高钾暴露能够增强培养肌管的磷脂酰肌醇的水解;但与成熟的肌纤维不同,细胞外钙是必须的.
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收肌管阻滞用于全膝关节置换术后镇痛的研究进展
全膝关节置换术（total knee arthroplasty，TKA）常导致术后剧烈疼痛，影响术后早期活动和功能锻炼［1］，增加术后膝关节僵直［2］、深静脉血栓等围术期并发症的风险，影响手术效果。因此，充分的 TKA 术后镇痛显得尤为重要。
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大鼠颏舌肌成肌细胞的分离和鉴定
目的建立大鼠颏舌肌成肌细胞体外培养方法，观察成肌细胞生物学特性。方法取新生3 d 内SD 大鼠，机械法分离颏舌肌组织，应用胶原酶、胰蛋白酶两步消化法获得成肌细胞，差速贴壁法纯化细胞，细胞计数法绘制生长曲线，α－ sarcomeric actin 免疫细胞化学鉴定细胞来源。结果成功获得大鼠颏舌肌成肌细胞，超过90％的细胞α－ sarcomeric actin 染色阳性，证明其为骨骼肌细胞来源。体外培养的成肌细胞呈现良好的增殖和分化能力，在生长培养基中细胞的倍增时间为4～5d，高密度时细胞相互接触融合形成肌管。结论消化法与差速贴壁法结合能够获得足量、纯净的颏舌肌成肌细胞，所得细胞增殖力强，能表达骨骼肌特异性蛋白。
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骨髓间充质干细胞在骨科中的应用研究进展
在骨髓基质中存在一种非造血系的干细胞称为间充质干细胞(bone marrowderived mesenchymal stem cells简称BMSCs).在不同的理化环境和细胞因子的诱导下,BMSCs具有可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌腱细胞、肌管细胞、肌肉细胞甚至神经元样细胞,即多系分化潜能,且分化后各种组织细胞有很强的增殖能力.
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臀下动脉移行为腘动脉罕见变异1例
正常情况下,人体下肢的动脉主干为髂外动脉.髂外动脉在股前区移行为股动脉,股动脉向下穿收肌管至腘窝上界续为腘动脉[1,2].而我们在解剖一具成年女性尸体时,发现其右下肢股动脉终于股前区,股深动脉缺如;臀下动脉向下行于股后区,至腘窝上界移行为腘动脉(图1).因此,髂外动脉-股动脉和由髂内动脉发出的臀下动脉共同成为其右下肢的供血动脉主干,现报道如下:
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对掌肌管处尺神经深支卡压征九例
小指对掌肌浅头腱性起点近侧缘形成的锐利腱弓样结构称为小指对掌肌腱弓,小指对掌肌浅深两头腱性起点和钩骨钩之间的间隙为小指对掌肌间隙,即小指对掌肌管[1].钩骨钩及附近的病变卡压尺神经深支所引起的临床病症,就称为对掌肌管综合征[2].临床上腕尺管综合征并不多见,其病因各种各样,临床症状和体征也不尽相同,可伴有其它疾病,诊断困难.在腕尺管段内的尺神经卡压称为腕尺管综合征.对掌肌管为腕尺管的重要组成部分,对掌肌管处尺神经深支的卡压称为对掌肌管综合征.自1998年1月至2010年1月,我科收治非外伤性对掌肌管综合征9例,下面就其诊治体会加以阐述.
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1-磷酸神经鞘氨醇对大鼠骨骼肌成肌细胞分化的影响
[目的]观察1-磷酸神经鞘氨醇(S1P)对大鼠骨骼肌成肌细胞向成熟肌细胞分化、形成肌管的作用,探索定向诱导肌分化的途径及其分子机制.[方法]分离和培养大鼠骨骼肌成肌细胞,含不同浓度S1P的高糖DMEM培养基培养,收集细胞,在相差显微镜和共焦显微镜下观察形态变化,并通过免疫细胞化学方法分别检测成肌细胞分化的早期特异性标志-肌球蛋白和生肌素表达的改变.使用磷酸神经鞘氨醇激酶(SphK)活性抑制剂DMS和HACPT后观察S1P对骨骼肌成肌细胞的生肌素表达的作用.[结果]S1P能明显促进骨骼肌成肌细胞细胞形成肌小管,诱导2～3d开始有肌管形成,之后肌管越来越多,到6～7d达高峰；同对照组相比随S1P浓度增高,细胞核生肌素阳性率逐渐增高(P ＜0.01)；SphK活性抑制剂抑制S1P促进骨骼肌成肌细胞生肌素阳性率的增高(P＜0.01).[结论]体外S1P可能通过提高SphK活性调节成肌细胞向成熟肌细胞分化.
