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乳鼠肌源干细胞的培养及其成肌分化的实验研究
目的 体外培养乳鼠肌源干细胞,探讨其成肌分化的能力. 方法 采用混合酶消化法制备乳鼠肌源干细胞,反复差速贴壁法纯化,利用银环蛇毒素鉴定肌管表面的乙酰胆碱受体,并对相应的与肌分化相关的蛋白进行免疫荧光分析. 结果 体外培养的肌源干细胞分化成肌管,表达乙酰胆碱受体,且表达骨骼肌和心肌特异性蛋白. 结论 采用混合酶消化法消化,反复差速贴壁法纯化可以得到多数量高纯度的肌源干细胞.
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肌源干细胞治疗女性压力性尿失禁研究进展
压力性尿失禁(SUI)的治疗方法包括手术与非手术治疗,其中注射疗法以其简便、安全、微创而广受欢迎,但由于注射材料的局限,该疗法近期效果好,远期效果较差.肌源干细胞作为多能干细胞,不仅具有多向分化潜能,且具低免疫原性、无变应原性,能诱导分化成肌而具收缩性,是理想的注射材料,对它们的研究和发现为注射治疗SUI提供了广阔的应用前景.
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肌源干细胞联合脂肪移植长期存活的实验研究
在本实验中我们从微观与宏观两方面同时阐释了肌源干细胞(muscle-derived stem cells,MDSC)对肌肉内脂肪移植的辅助异化作用.实验组为MDSC细胞悬液与自体脂肪组织联合移植在小鼠的右侧后肢.对照组用PBS液取代了细胞悬液植入在左侧后肢.通过大体观察治疗组小鼠后肢体积明显大于对照组.MRI成像发现MDSC治疗组的脂肪移植物显影显著强于对照组.组织学染色进一步发现MDSC治疗组多数由细胞结构完整,细胞形态良好的脂肪细胞组成.与之相反,对照组组织学染色可见广泛的纤维增生和大量的脂肪液化坏死.通过毛细血管计数我们发现,MDSC治疗组含有的毛细血管数量约是对照组的3倍.我们总结认为:将MDSC与自体脂肪组织联合移植可以通过促进毛细血管新生而达到提高肌肉内脂肪移植物的长期存活率.
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应用改良差速贴壁法和有限稀释技术分离培养小鼠来源肌源干细胞
背景:研究者们通过多种方法从肌组织中分离得到肌源干细胞,并应用于各类组织工程和再生医学研究.目的:结合改良的差速贴壁法和有限稀释技术分离小鼠来源肌源干细胞,并培养其单细胞克隆和亚克隆集落.方法:以新生C57BL/6小鼠四肢作为肌组织取材对象,经三重酶消化和细胞筛过滤,运用改良的差速贴壁法分离出肌源干细胞,予细胞特异标记物以免疫组织化学染色;以有限稀释技术克隆培养的方法,获得稳定的肌源干细胞单克隆和亚克隆集落.结果与结论:差速贴壁培养过程中,肌性细胞占比逐渐增高,首次贴壁1 h可以获得足够数量的细胞进行第6次贴壁培养;肌源干细胞需72 h左右贴壁生长,经10 d左右可以增殖为300~500细胞数量的集落,细胞形态以小圆形细胞为主,并有少量梭形细胞,肌源干细胞能够维持形态并持续增殖;应用有限稀释技术可获得肌源干细胞单克隆和亚克隆集落,肌源干细胞克隆细胞均呈现Desmin染色阳性,Sca-1染色阳性,阳性率为(92.3±4.1)%.提示应用preplate法和有限稀释技术可以分离得到小鼠来源肌源干细胞及其克隆集落.
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肌源干细胞联合移植促进脂肪存活性的实验研究
目的 从微观与宏观两方面同时探讨肌源干细胞(muscle-derived stem cells,MDSC)对肌肉内脂肪移植的辅助异化作用.方法 实验共分A、B、C三组:A组为实验组:用MDSC细胞悬液与自体脂肪组织联合移植在小鼠的右侧后肢.B组为对照组:用PBS液取代了细胞悬液植入在左侧后肢.C组为健康雄性成年C57小鼠(15～20 g)的胫前肌作为空白对照组.通过大体观察、MRI成像、组织学染色比较各组之间的差异.结果 大体观察治疗组小鼠后肢体积明显大于对照组；MRI成像发现MDSC治疗组的脂肪移植物显影显著强于对照组；组织学染色进一步发现MDSC治疗组多数由细胞结构完整,细胞形态良好的脂肪细胞组成.与之相反,对照组组织学染色可见广泛的纤维增生和大量的脂肪液化坏死.毛细血管计数结果显示,MDSC治疗组含有的毛细血管数量约是对照组的3倍.结论 MDSC与自体脂肪组织联合移植可以通过促进毛细血管新生而达到提高肌肉内脂肪移植物的长期存活率.
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肌源干细胞治疗周围神经损伤的研究进展
周围神经损伤是常见的外科疾病之一,为了寻求促进周围神经损伤修复的途径,临床医生和科学工作者长期致力于提高外科技术和改进手术方法,但术后功能恢复仍不如意.近年来飞速发展的组织工程学为此提供了一种新的解决途径,其中雪旺细胞目前被认为是周围神经损伤修复中重要的种子细胞,但其很多方面的应用都受到限制.所以,需寻找雪旺细胞的替代细胞.近年来被发现并逐渐成为研究热点的新型种子细胞之一便是肌源干细胞(muscle-derived stem cell,MDSC).在本文中作者通过大量阅读相关文献,并结合自己的相关实验经验,对肌源干细胞诱导分化治疗周围神经损伤的理论依据、实验方法、新突破及面临的问题进行综述.
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肌源干细胞的原代培养及量子点标记
目的 探讨大鼠肌源干细胞(MDSCs)的分离、培养新方法,并应用量子点进行标记.方法 应用差速贴壁法对10只新生SD大鼠腓肠肌进行原代培养获取肌源干细胞(MDSC),然后量子点对其进行标记,荧光显微镜下观察效果.结果 应用新生SD大鼠取材,消化时间25 min,可明显提高获取细胞数量(每高倍视野增加约25％)；荧光显微镜下观察量子点标记后的肌源干细胞,紫外光激发(激发波长≤400 nm)呈现明亮的橘红色.结论 应用新生SD大鼠取材缩短消化时间可明显提高肌源干细胞的获取量,量子点可成功标记肌源干细胞.
