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女性生殖道局部黏膜免疫微环境
1 女性生殖道黏膜免疫系统黏膜免疫系统(Mucosal immune system, MIS)是指分布于呼吸道、胃肠道、泌尿生殖道黏膜及一些外分泌腺体的淋巴组织,是执行局部特异性免疫功能的主要场所.黏膜免疫系统在结构和功能上均不同于系统免疫系统,是机体免疫系统的重要组成部分.女性生殖道黏膜因受性激素影响及缺乏典型的集合淋巴结,是一个独特的免疫位点.黏膜表面同时存在固有和适应性免疫保护;固有免疫成分包括黏液层,上皮间紧密连接,抗微生物肽,固有免疫细胞以及各种分泌因子等[1,2].适应性免疫应答主要由T、B淋巴细胞完成.触发的固有免疫可作为桥梁,将适应性免疫联系起来,产生病原体特异的体液/细胞免疫应答.
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羧甲基茯苓多糖对肿瘤坏死因子-α调控体外Caco-2细胞系生物学特性的影响
目的:体外实验研究羧甲基茯苓多糖(Carboxytmethylpachymaran,CMP)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)调控体外Caco-2细胞系生物学特性的影响,并初步探讨其机理.方法:TNF-α诱导Caco-2细胞建立损伤模型,100 μg/ml CMP干预上述模型,分别从细胞单层跨膜电阻(TER)、酚红透过率、紧密连接蛋白Claudin-1表达量以及分布方面评价造模情况和CMP干预情况.结果:TNF-α诱导Caco-2细胞TER明显下降(P＜0.01),酚红透过率明显升高(P＜ 0.01),Claudin-1蛋白表达降低、Claudin-1蛋白分布毛糙、锯齿样改变、荧光强度变弱,提示造模成功;CMP干预后,TER明显升高(P＜0.01),酚红透过率明显降低(P＜0.01),Claudin-1蛋白的表达量升高,Caudin蛋白的分布变得光滑、荧光强度增强.结论:CMP能够有效的逆转TNF-α调控的体外Caco-2细胞系生物学特性,可能与恢复Claudin-1蛋白表达和分布有关,CMP可能是治疗炎症性肠病的潜在有效药物.
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介绍一种引流袋接口与胃管连接的方法
鼻饲是一种将胃管经一侧鼻腔插入胃内,从胃管内注入流质食物、水和药物的方法。常规采用注射器连接胃管可以完成鼻饲,临床使用14号透明硅胶胃管置入胃内,用50 ml 注射器灌注鼻饲流质,但由于胃管接口的内直径为8 mm,与普通注射器乳头3 mm不能紧密连接,致使鼻饲液外溢,灌注量不准确,且易污染床单元,影响了患者的鼻饲质量。我科室找到了一种方法,经过试用效果满意,现报告如下。
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冀南地区胃癌组织中 Claudin-7、MT1-MMP的表达及临床意义
胃癌是我国常见的消化系统恶性肿瘤，在河北南部更是高发，多数患者发现时已是进展期，预后较差。紧密连接（tight junction，TJ）是表层细胞间的连接，具有调节上皮细胞极性和分化的重要作用。细胞间连接的结构异常以及伴随发生的相关蛋白的表达变化可能导致恶性肿瘤细胞的分离和脱落，从而形成浸润和转移。浸润和转移是胃癌高死亡率的主要原因。癌细胞在转移形成之前，要多次穿过基底膜才能完成浸润，因此基底膜的完整性和酶对基质的降解是目前研究的热点。Claudin 蛋白是构成紧密连接的重要的跨膜糖蛋白，能够维持细胞的黏附和极性。Claudin7是其家族的一员，其异常表达与肿瘤发生、发展相关［1］。MT1-MMP 是基质金属蛋白酶家族中（MMPs）的一员，可以降解多种细胞外基质成分，在肿瘤的演进过程中也发挥着重要的作用。本实验联合检测 Claudin-7、MT1-MMP 蛋白在冀南地区胃癌中的表达，探讨其表达与该地区胃癌的临床病理特点的关系及意义。
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VE-cad 与 Pard3在血管内皮中的相关研究进展
血管内皮是存在于血流与血管壁之间的一层上皮细胞，在血液与组织液之间起着天然屏障［1］。血管内皮还是人体大的内分泌器官以及多种血管活性物质的靶器官，具有维持血液正常流动、调节血管的舒缩状态、抑制血小板聚集、抗炎等重要作用。在某些病理状态下，血管内皮容易受到各种理化因素的刺激而受损，引起内皮功能障碍。内皮细胞连接处有许多黏附分子，VE-cad 是黏附连接的主要黏附分子，是维持血管内皮细胞极性和完整性必不可少的内皮细胞特异性钙黏蛋白［2］，Pard3对维持细胞极性及紧密连接起重要作用起重要作［3］，细胞极性的形成和紧密连接的建立均是血管形成的关键过程。
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血脑屏障紧密连接在脑转移癌和胶质细胞瘤中的变化和意义
目的：探讨血脑屏障紧密结构在胶质瘤及脑转移瘤中的变化及对瘤周水肿的影响。方法该院2006～2012年收治的脑转移癌患者16例和随机调取同时期脑胶质瘤术后标本16例作对照，采用免疫组化的方法检测S-100、胶质纤维酸性蛋白（ GFAP）。同时对两种标本进行电镜和磁共振成像方法检查，观察两组标本中血脑屏障紧密连接的变化。结果 S-100、GFAP在脑转移癌和低分化的脑胶质瘤中无阳性表达，高分化的脑胶质瘤中表达降低；电镜检查脑转移癌和低分化的脑胶质瘤有窗孔样结构，脑转移癌和高分化的脑胶质瘤无窗孔样结。强化磁共振影像结果，脑转移癌和低分化胶质细胞瘤的增强作用非常明显，而高分化胶质细胞瘤没有明显增强作用。结论脑转移癌和高分化胶质细胞瘤的血脑屏障紧密连接已经破坏，为靶向治疗脑转移癌提供新的思路。
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阿尔茨海默病血脑屏障研究进展
阿尔茨海默病（ AD）临床表现以进行性认知障碍、人格及行为损害为主。 AD主要的病理改变为β-淀粉样蛋白（ Aβ）沉积形成老年斑（SP），tau蛋白过度磷酸化，神经元突触功能异常及椎体细胞丢失。研究显示90％以上的AD患者均存在血脑屏障（BBB）损伤〔1〕，Aβ损伤脑微血管内皮细胞（ BMEC）而引起BBB破坏可能是AD新的特征性病理改变〔2，3〕。
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疾病状态下血脑屏障对大分子物质的转运途径
血脑屏障是一个弥散屏障,大多数化合物难以透过此屏障从血液流向大脑,它的血管内皮细胞与机体其它部位不同,是无窗孔的血管内皮细胞,细胞间有更广泛的紧密连接,其胞饮小泡转运活性弱.内皮细胞间的紧密连接限制亲水分子从胞间空隙穿过血脑屏障流入.然而,小的脂溶性分子如O2和CO2却能顺着浓度梯度自由穿过内皮细胞膜.较大分子量的营养物质包括葡萄糖和氨基酸通过载体转运入脑,而包括胰岛素、肝素和转铁蛋白在内的大分子的摄取通过受体介导的入胞作用调节[1,2].以前的研究者大多认为肽类和蛋白等亲水性大分子物质难以透过血脑屏障,近年的研究却发现,许多疾病状态下,血脑屏障对这些大分子物质是开放的,也就是说,许多治疗性的大分子物质(如多肽类生长因子)有可能透过血脑屏障发挥其治疗中枢神经系统(CNS)疾病的作用.
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星形胶质细胞与脑水肿的形成
星形胶质细胞在哺乳动物脑内是神经元数量的5倍,参与了营养代谢、脑内离子和水平衡、脑血流量和突触传递的调节、血脑屏障正常功能的维持、胶质瘢痕修复和灰白质发育[1,2].星形胶质细胞足突,脑血管内皮细胞以及相邻内皮细胞之间的紧密连接,周围细胞和基质一起构成了血脑屏障.除了与脑微血管密切的接触,星形胶质细胞大量的突起包绕在突触周围以及延伸到脑室腔表面形成胶质界膜,共同构成了对脑内液体调节的结构基础.脑内液体在脑血管腔、细胞间隙和脑细胞内不停交换,若在脑内代谢失衡,过度积聚即可能发生脑水肿.星形胶质细胞上存在大量水通道蛋白,离子通道和转运体,现就其参与脑内水、离子代谢及脑水肿形成方面简要综述.
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双酚A干扰大鼠生精过程时TJ渗透性屏障的体外研究
目的:研究体外大鼠睾丸支持细胞紧密连接蛋白(SCJP)在类雌激素-双酚A(BPA)干扰下的损伤机制.方法:对Wistar大鼠睾丸支持细胞(Sertoli细胞)离体原代培养4-5d,通过双室培养模型建立体外紧密连接(TJ)渗透性屏障,并测量其跨上皮电阻值(TER)反应紧密连接结构的形成及BPA对紧密连接的损害程度.设溶剂(DMSO)做阴性对照,以终浓度为25μM、100μM的BPA作用于支持细胞24h,MTT法测不同浓度BPA作用的Sertoli细胞增殖活性.Western bloting观察oecludin、ZO-1、Cx43表达的变化.结果:成功分离并培养Wistar大鼠睾丸支持细胞,并建立良好的体外TJ屏障模型.双室培养支持细胞上皮TER值在培养的d4达到顶峰,然后在d4-9维持相对较稳定的状态,d4以200μM,100μM,25μM BPA染毒,分别于染毒后24,48,72,96和120h测TER:与DMSO溶剂对照组相比,200μM,100μM的BPA组TER值明显下降(P＜0.05),而25μM的BPA组在染毒后TER值无明显变化(P＞0.05).MTT结果显示:经不同浓度BPA作用24h后,Sertoli细胞的吸光度(OD值)随着染毒剂量的增加而逐渐降低.1 02、103μM浓度组与溶剂对照组有显著性差异(P＜0.05),而10-2、10-1、100、101μM组和溶剂对照组无显著性差异(P＞0.05).Western blot结果显示:occludin、ZO-l、Cx43在各剂量组均有表达,与溶剂对照组相比,occludin、ZO-1表达均分别随作用剂量的增加而降低:25μM组、100μM组与溶剂对照组相比,差异均存在显著性(P＜0.05)；100μM组与25μM组相比,差异亦存在显著性(P＜0.05).Cx43的表达却随染毒剂量的增加而增加,与溶剂对照组相比,25μM组表达无明显增加(P＞0.05),而100μM组则明显增加(P＜0.05)；与25μM组相比,100μM组表达明显增加(P＜0.05).结论:双酚A可通过损伤支持细胞连接蛋白正常表达,破坏了TJ屏障渗透性,从而影响正常的精子形成过程.
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松胞菌素B开放血脑屏障的研究进展
血脑屏障的是人体自然屏障之一.其主要作用是阻止有害物质通过颅内血管进入脑实质,并同时辅助排出脑内代谢物质等.对相当多的颅内恶性肿瘤术后患者,血脑屏障在一定程度上阻碍了化疗药物进入脑实质,从而影响化疗效果.因此近年来越来越多的学者将研究重点放在如何开放血脑屏障这个问题上.血脑屏障构成主要为毛细血管的内皮细胞、基膜周细胞和星状胶质细胞的足突,其中血管内皮细胞处于重要的地位.原因归结于它自身的一个特殊结构-紧密连接.紧密连接是否完整,功能是否可以正常发挥关系到内皮细胞的完整性,因此对血脑屏障的开放有着举足轻重的作用.维持紧密连接结构中功能蛋白功能的能量物质为葡萄糖.脑血管中的葡萄糖进入脑实质需载体或通道,脑组织负责此过程的物质为葡萄糖转运蛋白1 (GLUT1).本文作者通过松胞菌素B抑制葡萄糖转运蛋白1,降低能量供应从而影响紧密连接功能,终引起血脑屏障开放角度做一综述.
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脂筏、紧密连接和血脑屏障的关系
血脑屏障破坏是缺血性脑卒中急性期发生脑水肿及神经元毒性损害的核心病理过程之一,目前尚无特效保护方法.血脑屏障通透性调节的中心环节是内皮细胞的紧密连接,而紧密连接结构蛋白表达水平和位置分布的变化与脑微血管通透性的改变及脑水肿的程度密切相关.脂筏是高流动性的细胞膜脂质双层内富含胆固醇的特殊脂质和蛋白质的动态微区,它参与细胞蛋白转运.血脑屏障上有大量的脂筏存在,紧密连接结构蛋白分布于脂筏中,其功能受胆固醇调节,且脂筏上紧密结合的脂质有利于蛋白质的寡聚化.因此,基于脂筏调节血脑屏障紧密连接可能为脑保护研究提供新的药物靶点.
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急性重症胰腺炎大鼠肠黏膜超微结构的改变
目的 探讨肠黏膜超微结构改变在急性重症胰腺炎时肠黏膜屏障功能障碍中的意义.方法 对急性重症胰腺炎(ASP)模型大鼠及假手术组大鼠(SO)于术后6、12 h取回肠黏膜组织进行光镜及电镜(利用辣根过氧化酶作为黏膜通透性改变的示踪剂)观察.同时对血、肠系膜淋巴结(LMN)、肝、脾、肺组织进行了细菌培养及鉴定,测定门静脉血中内毒素水平.结果 ASP大鼠6及12 h时相点肠黏膜组织结构基本正常;电镜观察制膜12 h肠上皮细胞紧密连接间有高密度电子物质沉着,细胞紧密连接开放;假手术组肠黏膜上皮细胞紧密连接完整,细胞间隙无示踪剂沉着.12 h时相点ASP组大鼠远隔部位细菌移位率较假手术组显著增加,培养出的细菌为大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌、芳香杆菌、枯草杆菌及肺炎克雷伯杆菌,几乎均为肠源性细菌;12 h时相点ASP组大鼠血浆内毒水平较SO组显著增加.结论 肠黏膜上皮细胞间紧密连接开放,通透性增加是ASP早期肠道细菌、内毒素移位,肠黏膜屏障功能障碍的形态学基础.
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不同声强经颅多普勒对兔大脑中动脉组织学的影响
目的 观察不同声强的TCD连续照射兔大脑中动脉2 h对血管组织学的影响.方法 40只新西兰白兔随机分为四组,每组10只:RV-1组(0 mW/cm2)、RV-2组(70 mW/cm2)、RV-3组(420 mW/cm2)、RV-4组(720 mW/cm2).应用TCD经兔眼窗连续照射2 h后,透射电镜观察大脑中动脉的变化.结果 RV-1组:血管内皮细胞正常,内皮间紧密连接致密.RV-2组:内皮细胞下大的空泡形成,考虑为内皮下的水肿,内皮细胞胞质内线粒体空泡变性,内质网扩张脱颗粒,细胞间紧密连接区呈毛絮状.RV-3组:内皮细胞有灶性脱落,部分未脱落区细胞内膜结构变性,胞质内线粒体空泡变性,粗面内质网脱颗粒扩张,细胞连接部分区域可见相邻细胞膜间有轻度间隙,部分区域毛絮状.RV-4组:内皮细胞弥漫性改变脱落,细胞胞质内粗面内质网病理性扩张,呈囊泡状脱颗粒,线粒体空泡变性,相邻细胞间可见明显的间隙,细胞膜呈灶性溶解.结论 TCD连续照射兔大脑中动脉2 h,声强越大对大脑中动脉内皮细胞及紧密连接的破坏越大.
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脓毒症大鼠血脑屏障通透性及脑组织 ZO -1表达的实验研究
目的：观察脓毒症大鼠血脑屏障通透性及脑组织胞质附着蛋白（ ZO-1）的变化。方法50只健康SD大鼠随机分为假手术组（ n＝10）及脓毒症模型组（ n＝40），脓毒症模型组又分为脓毒症制模后6、12、24、48 h 4个亚组，每组10只，采用盲肠结扎穿孔（ CLP）法制作脓毒症模型。于相应时间点处死取材，伊文思蓝（ EB）外渗分光光度分析法检测血脑屏障通透性；RT-PCR法测定脑组织ZO-1 mRNA表达、Western-blot免疫印迹方法检测ZO-1表达。结果脓毒症组各时间点大鼠脑内EB含量均明显高于假手术组（ P＜0．01）；脓毒症各时间点组大鼠脑内ZO-1 mRNA、ZO-1的表达均明显下降，与假手术组比较差异有统计学意义（P＜0．01），且随着脓毒症时间延长下降越明显。结论脓毒症大鼠脑内ZO-1 mRNA、ZO-1的表达均显著下降，可能是脓毒症血脑屏障受损的机制之一。
关键词： 脓毒症 脓毒性脑病 血脑屏障 胞质附着蛋白(ZO-1) 紧密连接 -
一种体外培养兔眼色素上皮细胞的新方法
可见细胞形态基本呈多边形,紧密连接基本形成.结论 兔眼RPE细胞能够用Dispase成功分离并培养.
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人视网膜色素上皮(RPE)细胞的体外纯化培养
视网膜色素上皮(RPE)和脉络膜毛细血管位于Brush's膜两侧,RPE细胞的紧密连接构成血-视网膜外屏障,且对排除废物和供给视网膜营养是必要的.RPE细胞的任何必要生理紊乱都对视网膜不利.RPE的功能之一就是通过产生神经营养的GF而营养支持视网膜,这些GF有神经生长因子(NGF)、脑源性生长因子(BDNF)和色素上皮源性生长因子(PEDF)等[1].已证实RPE功能的破坏会对视力造成威胁,如AMD、糖尿病视网膜病变和PVR[2].为进一步研究RPE在眼病发病中的作用以及探讨与其相关疾病的有效治疗方法,体外分离培养完整的RPE细胞避免其他细胞污染至关重要,本文对此进行研究探讨.
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一次性胃管在临床鼻饲中两种改进方法的应用比较
鼻饲法是将导管经鼻腔插入胃内.从管内注入流质食物,营养、水分和药物的方法.是一种安全、方便、符合人体生理的营养支持方法.目前部分医院在操作时要使用60ml注射器(注射用的)作为鼻饲用器.在临床工作中我们发现有些一次性硅橡胶胃管(如:扬州市永宁医疗器械有限公司生产的.产品标准:YZB/苏0394-2003,规格为:16号),其开口端有长约2.6cm的接头,内径较大,不能与注射用的注射器的乳头紧密连接.
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气腹针在无气腹腹腔镜下巨大卵巢囊肿剥除术中的巧用
气腹针是一种具有安全装置的特殊的腹腔穿刺针，由针芯和套管鞘两部分组成，主要用于腹腔镜检查和其他行低侵袭腹部手术中气腹的建立。我院在无气腹腹腔镜下行巨大卵巢囊肿剥除术中巧用气腹针抽吸收集囊液，操作简单、便捷，并有效保持无菌、无瘤技术，现介绍如下。
1操作方法患者硬膜外麻醉成功后，取膀胱截石位，常规消毒、铺巾，于脐下四指横行上悬吊器。常规脐上缘做一纵切口，置镜观察；下腹正中做2 cm纵行切口，上切口保护套，用3-0可吸收线缝合囊肿前壁牵拉囊肿；气腹针紧密连接20 m l注射器，经下腹切口进入腹腔刺破囊壁，探入囊腔，抽吸囊液；抽满20 m l后关闭气腹针开关，取下注射器，排空后继续连接反复抽吸。台上可准备2个20 m l注射器以便交替使用。抽吸出的囊液可收集在容器内，或直接注入吸引器管中弃之。囊液充分吸出后缝合关闭囊腔，充分止血，纱布、器械清点无误后逐层关闭腹腔，皮肤行免拆线缝合。 -
血管内皮钙黏蛋白在内皮细胞中的作用
内皮细胞掌管血管对血浆蛋白和循环细胞通透性,此功能是通过细胞内和细胞旁的通透途径实现的.细胞内通透途径是通过复杂的囊泡系统实现循环蛋白的转运,而细胞旁通透途径是通过细胞间连接的特殊黏附分子和内皮细胞的收缩实现的[1].目前尚未知这两种途径有何相互联系.已知在内皮细胞连接处聚集着许多黏附分子,尽管血管内皮细胞的类型各不相同,但总能区分两种类型的连接结构即黏附连接(AJ)和紧密连接(TJ).血管内皮钙黏蛋白(Vascularendothelial cell cadherin;VE-cadherin;VECD),又名CD144,Cadherin-5,是AJ连接的主要黏附分子,是维持血管内皮细胞极性和完整性必不可少的内皮细胞特异性钙黏蛋白,以下对其在内皮细胞中的作用作一综述.
