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山姜素对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠溃疡性结肠炎的保护作用及其作用机制研究
目的 探讨山姜素对葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎小鼠的保护作用及其作用机制.方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和25、50、100 mg/kg山姜素组.模型组和治疗组每天给予3％葡聚糖硫酸钠溶液,连续7 d.治疗组每日ip生理盐水0.5 mL+25、50、100 mg/kg山姜素,对照组和模型组每天ip生理盐水0.5 mL,连续7 d.观察小鼠体质量变化、结肠长度、疾病活动指数(DAI)评分、组织学损伤评分等炎症反应;透射电镜观察肠上皮细胞间连接;免疫组织化学法、Western blotting法检测肠道紧密连接蛋白claudin-2、occludin、ZO-1、STAT3、pSTAT3、IL-6的表达和STAT3/IL-6信号通路的表达情况.结果 与模型组比较,山姜素能够显著缓解小鼠体质量减轻和肠管缩短,降低DAI和组织学评分.山姜素可增强小鼠肠黏膜occludin、ZO-1表达,减弱claudin-2表达,并能够抑制STAT3/IL-6信号通路.结论 山姜素能够上调葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎小鼠结肠组织occludin、ZO-1的表达,下调claudin-2的表达,通过调节紧密连接蛋白的表达,保护肠上皮细胞屏障的完整性和通透性.通过抑制IL-6/STAT3通路,减轻结肠炎症反应.
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DEHP体外对大鼠睾丸支持细胞紧密连接作用及相关基因表达影响
目的探讨邻苯二甲酸二乙基己酯( di-2-ethylhexyl phthalate, DEHP)体外对大鼠睾丸支持细胞紧密连接的作用以及相关基因表达的影响。方法体外分离和原代培养大鼠睾丸支持细胞,建立支持细胞原代双室培养模型,以只加入二甲基亚砜(DMSO)的细胞孔作为对照,以10、50、100 nmol/L浓度的DEHP(DEHP低、中、高剂量组)染毒24 h。应用跨上皮电阻测定法检测单层细胞两侧跨上皮细胞电阻值( TER),荧光定量聚合酶链反应( PCR)法检测支持细胞闭锁蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白1(Zonula occluden-1, ZO-1)、紧密连接蛋白11(Claudin 11)基因mRNA表达,应用Weastern blot检测支持细胞Occludin、ZO-1、Claudin 11蛋白的表达。结果与对照组比较,不同浓度的DEHP各组细胞TER值均降低。同时大鼠睾丸支持细胞Occludin、ZO-1、Claudin 11基因mRNA表达随DEHP浓度增加而降低(P<0.05),Occludin、ZO-1、Claudin 11蛋白表达也随DEHP浓度增加而降低(P<0.05)。结论 DEHP可通过下调Occludin、ZO-1、Claudin 11基因表达而影响大鼠睾丸支持细胞的紧密连接,进而影响支持细胞的功能。
关键词： 二乙基己基邻苯二甲酸 睾丸 支持细胞 紧密连接 基因表达 -
一次性头皮针在胃管注入石蜡油中的应用
经胃管注入石蜡油是肠梗阻等消化道疾病治疗的手段之一,尤其是肠梗阻保守治疗病人,由于肠内容物在肠道中通过受阻,经胃管注入石蜡油有助于润滑肠内容物,促进胃肠蠕动,便于肠内容物排出,也可防止便秘等.因此,临床常采用经胃管注入石蜡油方法,促进胃肠残渣排出.但在经胃管注入石蜡油时注射器往往不能与胃管紧密连接,使得药物外溢、外漏.为此,我科使用一次性头皮针与注射器连接再经胃管注入石蜡油,取得满意效果.现介绍如下.
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气道上皮屏障在支气管哮喘防御机制中的研究进展
支气管哮喘(简称哮喘)是一种气道慢性炎症性疾病,但是它的发病机制还不完全清楚.哮喘是由多种因素引起的复杂的疾病,气道上皮屏障的损伤是其主要特征.本文将对气道上皮屏障在哮喘中的防御机制作一综述.
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紧密连接蛋白occludin与肺部疾病关系的研究进展
紧密连接(tight junction,TJ)是正常上皮细胞或内皮细胞间机械屏障的重要结构基础,由多种蛋白质组成,呈连续带状分布,连接相邻的细胞,在维持机体内环境的稳定和发挥机体正常生理功能等方面具有重要作用.Occludin蛋白是紧密连接中重要的结构蛋白,本文就occludin蛋白的结构与功能、调控机制及其与肺部疾病关系的研究进展作一综述.
关键词： 紧密连接 occludin蛋白 肺部疾病 -
上皮膜蛋白1在实验性糖尿病大鼠模型中额叶皮质血-脑屏障上的表达
目的：测定不同时间点实验性糖尿病大鼠额叶皮质血—脑屏障（BBB）上皮膜蛋白1（EMP1）的表达。方法选成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病组（STZ组）和对照组（CON组），每组分为2w、4w、8w3个亚组，采用免疫组织化学法检测EMP1的表达。结果STZ大鼠与CON大鼠比较，4w组中STZ大鼠上EMP1的表达显著增多（P<0.01），2w组和8w组中差异无统计学意义；EMP1的表达在STZ大鼠各亚组之间及CON大鼠各亚组之间比较差异无统计学意义（P<0.05）。结论 EMP1在实验性糖尿病大鼠额叶皮质BBB上的表达改变，在模型建立成功后4w时表达显著增加。
关键词： 紧密连接 血-脑屏障 上皮膜蛋白1 链脲佐菌素诱导的糖尿病 -
脑胶质瘤血肿瘤屏障特点的研究
血肿瘤屏障(blood-tumor-barrier,BTB)与正常的血脑屏障(blood-brain-barrier,BBB)是不同的[1].正常脑组织的微血管是连续的并且由紧密连接贯连,不具有胞饮小泡和膜孔.药物透过BBB的基本原理是单纯扩散,BTB是由肿瘤组织中的三种微血管亚群组成的,与BBB相似的连续的、不具有膜孔的微血管,连续的、具有膜孔的微血管,以及具有直径约1微米的血管内皮通道(inter endothelial gaps)的毛细血管[2].在1977年Vick等[3]就认为BBB不是脑肿瘤化学治疗的阻碍因素.因此,到目前为止已有大量的实验尝试使用更大浓度的药物聚集在脑肿瘤组织以达到杀伤肿瘤细胞的作用.本文将从血肿瘤屏障的通透性、超微结构及其开放途径三个方面进行研究.
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盐酸小檗碱对肠易激综合征大鼠肠上皮紧密连接的影响
目的：观察盐酸小檗碱( Berberine, BER)对肠易激综合征( IBS)大鼠肠上皮紧密连接的影响,探讨其机制。方法将50只SD大鼠随机分为5组,每组10只。除对照组正常进食水外,其他4组采用醋酸灌肠法建立IBS模型,造模成功后予如下方法处理：BER 组予盐酸 BER (100 mg/kg )灌胃；氨基胍组予高度选择性一氧化氮合酶(NOs)阻断剂氨基胍(100 mg/kg)腹腔注射；BER+氨基胍组予BER(100 mg/kg)灌胃,同时氨基胍(100 mg/kg)腹腔注射；生理盐水组予3 ml 生理盐水灌胃。造模后第7天比较5组大鼠腹部回撤反应( abnominal withdrawl reflex, AWR)评分(直结肠扩张试验)、束缚应激试验后排便次数、血浆D-乳酸水平、肠上皮紧密连接( tight junction, TJ)蛋白(Occludin、ZO-1)的表达。结果与对照组比较,BER组、BER+氨基胍组、氨基胍组、生理盐水组4组AWR评分升高,束缚应激后排便增多,D-乳酸水平升高,肠上皮TJ蛋白Occludin、ZO-1表达下降,差异有统计学意义( P<0．05)。BER组AWR评分比生理盐水组明显降低(P<0．05),氨基胍组、BER+氨基胍组AWR评分与生理盐水组比较,差异无统计学意义(P>0．05),BER组AWR评分比BER+氨基胍组明显降低(P<0．05)；与生理盐水组比较,BER组和BER+氨基胍组排便次数减少, D-乳酸水平降低,肠上皮蛋白；Occludin、ZO-1表达升高,差异有统计学意义( P <0．05)。排便次数、D-乳酸水平、肠上皮TJ蛋白Occludin与ZO-1表达比较氨基胍组与生理盐水组差异均无统计学意义(P>0．05)。结论 BER影响IBS大鼠肠上皮紧密连接,其机制与一氧化氮有关。
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固定三通式输液器的研制与应用
传统的输液器是由瓶口插针、上输液管、墨菲滴管、下输液管、液体过滤器、流量控制器紧密连接组成,静脉输液时,需要将输液管液体过滤器的前端与头皮针连接来完成普通的静脉输液和用药,以达到治疗的目的.
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病毒感染与哮喘患者症状加重机制的相关性
急性呼吸道感染是哮喘加重的常见原因，而呼吸道感染的主要病原体是病毒，病毒与喘息性呼吸道疾病和（或）哮喘有密切的关系。
呼吸道在结构上是一个开放的系统，气管、支气管黏膜上皮细胞是抵御病原体的第一道屏障。病毒侵入呼吸道黏膜上皮细胞，在细胞内复制，引起上皮细胞变性、坏死和脱落，屏障功能被破坏。上皮细胞屏障功能受损使细胞间的紧密连接中断，固有的免疫受损，抗氧化能力减弱，使机体对感染和过敏原的敏感性增强，表现为气道反应性增加。病毒感染后的呼吸道上皮细胞更容易遭受其他病原体感染并引起进一步损伤。 -
一次性导尿管的妙用
临床工作中,患儿血胸、气胸常采用一次性胸腔引流管接水封瓶引流气体及液体,但由于一次性胸腔引流管价格高、质地坚硬、无弹性、不易于固定,使用不方便,患儿很难接受.经临床实践,笔者发现一次性导尿管可以代替一次性胸腔引流管,经过49例患儿的应用,效果满意.其价格低,质地柔软,易于水封瓶的紧密连接.
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Nephrin与肾脏疾病
蛋白尿是肾脏疾病常见的表现,在肾脏疾病的慢性进展中发挥重要作用.近来认为,蛋白尿形成与肾小球滤过屏障受损密切相关.肾小球滤过屏障由三层组成:具有窗孔的内皮细胞,肾小球基底膜(GBM),以及外层的足细胞(podocyte)足突及其间的裂孔隔膜.滤过屏障对于分子大小、形状及电荷有选择性通透,严格限制血浆中大分子蛋白的滤过.GBM是一种分子支架,由紧密连接的Ⅳ型胶原、层粘连蛋白、巢蛋白以及蛋白聚糖组成,带负电荷的黏多糖在电荷屏障中起主要作用.裂孔隔膜是Rodewald和Karnovsky于1974年首次提出,为一种交错连接于足细胞足突间的拉链样膜状电子致密结构[1].大多数研究表明,裂孔隔膜是一种宽度相对恒定(20～50 nm)的刚性结构,但其分子组成及特性至今仍不清楚.1998年,瑞典科学家Karl及其研究小组经过9年的努力定位克隆出一个人类新基因,该基因产物编码一种由1 241个氨基酸组成的跨膜蛋白,属于细胞黏附分子中的免疫球蛋白(Ig)超家族成员,特异性定位于肾小球裂孔隔膜区,将其命名为nephrin[2].
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乙醇对肠黏膜屏障功能的影响及作用机制
目的 探讨乙醇对肠上皮细胞屏障功能的影响及作用机制.方法 将不同浓度的乙醇与肠上皮细胞株Caco-2细胞共培养4h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法及乳酸脱氢酶法(LDH)检测细胞存活率.应用Caco-2细胞建立肠上皮细胞屏障模型,不同浓度乙醇溶液处理后,测定其跨上皮细胞电阻值(TEER)及荧光黄透过率的变化.应用蛋白印迹法及免疫荧光染色法检测紧密连接蛋白occludin的表达和分布.结果 乙醇浓度≤5％时,不影响Caco-2细胞的生存率.乙醇诱导肠上皮细胞屏障通透性增加,呈浓度-时间依赖性；乙醇作用后,细胞膜上occludin表达逐渐降低,60 min时达低值,细胞膜上呈点状分布,此后部分可逐渐恢复,趋势与TEER值及荧光黄透过率一致.结论 乙醇可破坏细胞间紧密连接蛋白,进而诱导肠上皮细胞屏障通透性增加.
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生长发育期氯化镧暴露对大鼠海马紧密连接蛋白表达影响
目的 探讨氯化镧(LaC13)暴露对仔鼠海马紧密连接蛋白表达和基因转录水平影响.方法 将40只Wistar孕鼠随机分为对照组(蒸馏水)和0.25％、0.50％、1.00％ (w/v)氯化镧组,从仔鼠出生起孕鼠通过饮水染毒LaC13,断乳后仔鼠继续饮用原浓度LaC13溶液1个月;采用Western blot法检测仔鼠海马claudin-5、occludin和紧密连接蛋白-1(ZO-1)蛋白表达,real-time PCR法检测仔鼠海马Cldn5、Ocln和Tjpl mRNA表达.结果 与对照组比较,0.50％和1.00％氯化镧组仔鼠海马claudin-5蛋白表达水平[分别为(0.059 ±0.007)、(0.041 ±0.003)]与oc-cludin蛋白表达水平[分别为(0.085±0.004)、(0.067 ±0.004)]均明显降低(P＜0.05);1.00％氯化镧组仔鼠海马Cldn5、Ocln和Tjp1 mRNA表达水平分别为(0.743±0.026)、(0.900±0.119)、(0.931±0.100),与对照组比较,1.00％氯化镧组仔鼠海马Cldn5 mRNA表达下降(P＜0.05).结论 生长发育期暴露氯化镧可下调仔鼠海马claudin-5和occludin表达,导致血脑屏障紧密连接受损.
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HCG11靶向结合miR-543调节血肿瘤屏障通透性
目的 研究HCG11和miR-543对血肿瘤屏障通透性的作用及可能机制.方法 应用Real-time PCR检测人脑微血管内皮细胞(endothelial cells,ECs)和人胶质瘤微血管内皮细胞(glioma endothelial cells,GECs)中HCG 11和miR-543的表达以及二者的结合作用.应用Lipo3000将HCG11表达沉默和/或miR-543过表达质粒载体分别转染GECs,验证转染效率后,通过测量跨内皮细胞阻抗值(transendothelial electric resistance,TEER)和辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)渗透量,检测血肿瘤屏障通透性.应用Real-time PCR和Western blot检测紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的表达.荧光素梅报告基因系统分析miR-543与HCG11的结合作用.结果 HCG11在GECs中表达显著增加,miR-543在GECs中表达显著降低;HCG11表达沉默、miR-543过表达均显著降低TEER值,增加HRP渗透量,降低ZO-1、Occludin和Claudin-5的蛋白表达水平.MiR-543与HCG11存在靶向结合作用.HCG11表达沉默显著增加miR-543的表达,增加血肿瘤屏障通透性.结论 HCG11通过靶向结合miR-543调节血肿瘤屏障通透性.
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支持细胞波形蛋白及紧密连接结构蛋白在染锰大鼠睾丸中的表达
目的 研究染锰诱导的大鼠睾丸超微结构改变及支持细胞vimentin(VM)和紧密连接OccludinsmRNA和Claudin-11 mRNA表达,探讨锰对支持细胞骨架蛋白和紧密连接蛋白的破坏机制.方法 雄性SD大鼠随机分为空白对照组,低剂量(15 mg/kg MnCl2)和高剂量(30 mg/kg MnCl2)组,8只/组.实验组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水,给药途径均为腹腔注射,电镜观察睾丸支持细胞及血睾屏障超微结构,免疫组织化学(SABC)法检测支持细胞VM表达,实时定量PCR反应检测血睾屏障紧密连接Occludins,Claudin-11 mRNA表达.结果 随着染锰时间延长和剂量增加,各组支持细胞数量及VM阳性细胞率、OccludinsmRNA和Claudin-11 mRNA表达水平均显著降低.各组大鼠睾丸支持细胞数量与VM阳性细胞率及OccludinsmRNA和Claudin-1 l mRNA表达水平均成正相关.结论 锰可抑制大鼠睾丸支持细胞骨架蛋白及紧密连接相关蛋白表达,产生生殖毒性效应.
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小细胞肺癌细胞诱发人脑微血管内皮细胞紧密连接的开放
目的 小细胞肺癌易发牛脑转移,但其机制尚不完全清楚,本文探讨小细胞肺癌细胞对人脑微血管内皮细胞单层细胞间紧密连接开放的作用.方法 应用免疫荧光技术观察人脑微血管内皮细胞间紧密连接结构改变;应用Western blot技术分析小细胞肺癌细胞与微血管内皮细胞单层共培养时紧密连接蛋白occludin的可溶性片段和不可溶性片段在内皮细胞紧密连接处的分布情况;应用跨内皮迁移实验及辣根过氧化物酶渗漏实验分析小细胞肺癌细胞与内皮细胞单层共培养后其跨内皮细胞单层的迁移能力和内皮单层渗透性的改变;利用ROCK特异性抑制剂Y27632,分析Rho/ROCK信号通路是否参与小细胞肺癌细胞跨内皮单层迁移.结果 小细胞肺癌细胞能够通过人脑微血管内皮细胞单层迁移,在0 h到12 h之间随培养时间的延长小细胞肺癌细胞的迁移率逐渐增加;共培养8 h时人脑微血管内皮细胞紧密连接处紧密连接结构蛋(ZO-1和occludin)表达减少,通透性明显增加;ROCK特异性抑制剂Y27632能够阻断小细胞肺癌细胞引起的内皮细胞间紧密连接处紧密连接结构蛋白ZO-1和occludin表达减少、内皮单层通透性的增加及小细胞肺癌细胞跨内皮单层迁移.结论 小细胞肺痛细胞与人脑微血管内皮细胞单层共培养诱发人脑微血管内皮细胞间紧密连接的开放,利于小细胞肺癌细胞的跨内皮单层迁移.
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ROCK介导缓激肽开放SD大鼠血肿瘤屏障
目的 利用ROCK的特异性抑制剂Y-27632,研究ROCK是否介导缓激肽开放血肿瘤屏障.方法 应用ROCK的特异性抑制剂Y-27632预处理大鼠原代脑微血管内皮细胞后,用缓激肽诱导血肿瘤屏障开放,测量跨内皮阻抗值(TEER),辣根过氧化物酶(HRP)渗漏量,分析血肿瘤屏障的通透性的改变；应用Westernblot法检测紧密连接相关蛋白ZO-1的表达；应用免疫荧光方法观察原代大鼠脑微血管内皮细胞紧密连接相关蛋白ZO-1和丝状肌动蛋白结构和分布的改变.结果 Y-27632显著抑制缓激肽诱导TEER值的降低,HRP的升高；Y-27632显著抑制ZO-1的表达；Y-27632抑制ZO-1由内皮细胞的边缘向细胞质转移,抑制丝状肌动蛋白由细胞膜边缘向细胞中央区分布,应力纤维形成明显减少.结论 ROCK介导缓激肽开放血肿瘤屏障.
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内皮-单核细胞激活多肽酶Ⅱ增强血肿瘤屏障通透性的机制
目的 研究内皮-单核细胞激活多肽Ⅱ(endothelial monocyte activating polypeptide-Ⅱ,EMAP-Ⅱ)选择性开放血肿瘤屏障(blood-tumor barrier,BTB)的作用机制.方法 荷瘤大鼠被随机分成4组(每组12只):对照组,EMAP-Ⅱ组,寡霉素组和寡霉素+EMAP-Ⅱ组.采用伊文思蓝(Evans blue,EB)渗透性实验评估各组BTB通透性变化情况;Western Blot法检测脑微血管内皮细胞上紧密连接相关蛋白ZO-1的表达水平变化;双重免疫荧光法检测EMAP-Ⅱ和α-ATP合成酶在脑微血管内皮细胞上的分布.结果 EMAP-Ⅱ组BTB通透性显著高于对照组和寡霉素组(P＜0.01),紧密连接相关蛋白ZO-1的表达水平显著降低(P＜0.01),其作用受到ATP合成酶抑制剂寡霉素( Oligomycin)的显著抑制(P＜0.05);EMAP-Ⅱ与α-ATP合成酶在胶质瘤微血管内皮细胞上共定位.结论 EMAP-Ⅱ可能通过开放紧密连接增强BTB的通透性,脑微血管内皮细胞上的α-ATP合成酶是其可能的作用位点.
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RMP7介导血肿瘤屏障通透性增加的机制研究
目的 研究miR-200b是否参与RMP7介导的血肿瘤屏障(BTB)通透性增加及可能机制.方法 测量跨内皮阻抗值(TEER)、辣根过氧化物酶(HRP)渗漏量,分析血肿瘤屏障的通透性的改变,应用Real-Time PCR检测RMP7作用BTB后大鼠脑微血管内皮细胞(ECs)miR-200b的表达,应用miR-200b mimic和miR-200b inhibitor分别转染GECs (ECs和U87脑胶质瘤细胞共培养的细胞)后分析血肿瘤屏障的通透性的改变;应用Western blot检测紧密连接相关蛋白zonula occludens-1(ZO-1)的表达;应用免疫荧光方法观察GECs紧密连接相关蛋白ZO-1和丝状肌动蛋白(F-actin)结构和分布的改变.结果 CRMP7诱导TEER值显著降低,HRP显著升高;RMP作用GECs后,使GECs内源性miR-200b表达显著降低;miR-200b-mimic和miR-200b inhibitor成功转染到GECs中;miR-200b mimic显著抑制RMP7诱导TEER值的降低,HRP的升高,以及ZO-1的表达,抑制ZO-1由内皮细胞的边缘向细胞质转移,抑制丝状肌动蛋白由细胞膜边缘向细胞中央区分布,分布于细胞边缘的F-actin明显增加,应力纤维形成明显减少;miR-200b inhibitor结果与miR-200c mimic实验结果相反.结论 MiR-200b参与RMP-7介导的B1B通透性增加.
