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黏附因子N-cadherin在体外骨髓间质细胞诱导分化中的表达
目的:探讨黏附因子N-cadherin在骨髓间质细胞诱导分化中的表达及其转化机制.方法:体外分离,扩增Wistar大鼠骨髓间质细胞,按一定浓度种植于24孔板内,并加入TGF-β诱导剂,于不同时间点取材固定.用免疫组化方法动态观察N-cadherin在骨髓间质细胞诱导分化中表达时相.同时加入抗N-cadherin抗体干扰细胞聚集.结果:N-cadherin主要表达于加入诱导剂后24 h,之后呈下调控趋势,并呈现时间依赖性.加入抗体后可明显干扰细胞聚集,当浓度为300μl/孔时,未见细胞小结形成.结论:N-cadherin介导了细胞与细胞之间的相互作用,在体外间质细胞转化中发挥重要作用.
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金匮肾气丸对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠的影响
目的:研究金匮肾气丸对腺嘌呤致大鼠肾间质纤维化的保护作用,并探讨其作用机制.方法:96只SD大鼠随机分成正常组、模型组、氯沙坦组(5 mg·kg-1)和金匮肾气丸高、中、低剂量组(2.4,1.2,0.6g·kg-1),采用腺嘌呤灌胃(200 mg·kg-1·d-1)诱导肾间质纤维化大鼠模型,2h后灌胃给予相应药物,造模连续9周;给药连续16周.采用生化法测定血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾脏组织病理改变情况;马松(Masson)染色观察大鼠肾脏胶原沉积情况;以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定大鼠肾脏组组转化生长因子-β(TGF-β1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),钙黏蛋白(E-cadherin),Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ),Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ),Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ),基质金属蛋白酶-1(MMP-1),基质金属蛋白酶-2(MMP-2),基质金属蛋白酶-9(MMP-9),基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1),基质金属蛋白酶抑制剂-2 (TIMP-2) mRNA的表达;以免疫组化法测定大鼠肾脏TGF-β1,α-SMA和E-cadherin的表达.结果:与正常组比较,模型组中SCr和BUN显著升高(P＜0.01),给予金匮肾气丸干预后SCr和BUN水平降低(P＜0.05);HE染色和Masson染色结果显示,与正常组比较,模型组肾间质损伤严重且肾间质胶原物质大量沉积,给予金匮肾气丸干预后肾间质小管损伤减轻,肾间质胶原物质沉积减少;Real-time PCR结果显示,与正常组比较,模型组TGF-1,α-SMA,Col-Ⅰ,Col-Ⅲ,Col-Ⅳ,TIMP-1,TIMP-2mRNA表达上调(P＜0.05),模型组E-cadherin,MMP-1,MMP-2,MMP-9 mRNA表达下调(P＜0.05),给予金匮肾气丸干预后E-cadhenn,MMP-1,MMP-2,MMP-9 mRNA的表达上调(P＜0.05),TGF-1,α-SMA,Col-Ⅰ,Col-Ⅲ,Col-Ⅳ,TIMP-1,TIMP-2mRNA的表达明显下调(P＜0.05);免疫组化结果显示,与正常组比较,模型组E-cadherin蛋白表达下调(P＜0.01),TGF-β1和α-SMA蛋白表达上调,金匮肾气丸干预后E-cadherin蛋白表达上调(P＜0.05),TGF-和α-SMA蛋白表达下调(P＜0.05).结论:金匮肾气丸可有效改善肾间质纤维化并对肾脏有一定的保护作用,其改善肾间质纤维化的机制可能与降低基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1,TIMP-2)活性,TGF-β1蛋白表达,α-SMA蛋白表达,升高基质金属蛋白酶(MMP-1,MMP-2,MMP-9)活性,E-cadherin蛋白表达,从而减少胶原物质的沉积有关.
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人参皂苷Rg3体外抑制胰腺癌sw-1990细胞血管生成拟态形成的作用
目的:研究人参皂苷Rg3对胰腺癌sw-1990细胞体外血管形成的作用.方法:采用不同浓度人参皂苷Rg3作用sw-1990细胞,观察sw-1990细胞在鼠尾Ⅰ型胶原蛋白形成血管网状结构特点;采用体外管道形成抑制实验检测不同浓度人参皂苷Rg3对sw-1990细胞管道形成能力;采用荧光定量PCR技术和Western blot检测不同浓度人参皂苷Rg3作用sw-1990细胞72h后VE-Cadherin和EphA2的表达情况.结果:胰腺癌sw-1990细胞在用鼠尾Ⅰ型胶原蛋白上能够形成血管生成拟态.0、25、50、100、200μm/L人参皂苷Rg3作用sw-1990细胞72h后,血管生成拟态数分别为(81.03±6.17)、(63.57±5.19)、(55.39±8.97)、(32.65±3.07)和(21.17±4.73)个,与人参皂苷Rg3负相关r=-0.344(P＜0.05).荧光PCR技术和Western blot检测发现,与对照组比较,各用药组VE-Cadherin、EphA2 mRNA水平和蛋白水平表达均下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:人参皂苷Rg3能够抑sw-1990细胞体外血管生成拟态的形成,其机制可能与人参皂苷Rg3下调sw-1990细胞VE-Cadherin和EphA2表达有关.
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益气活血方对肺癌细胞株E-CD表达及侵袭能力的影响
目的:观察益气活血中药对肺癌细胞株体外生长抑制、E-CD表达及侵袭能力的影响.方法:采用细胞计数、S-P免疫组织化学、图像分析及侵袭小室等方法,观察小细胞肺癌细胞株NC-H446在益气活血中药、全反式维甲酸(ARTA)处理不同时间后细胞生长状况、E-CD表达及侵袭能力的影响.结果:在两干预因素下细胞生长抑制,形态改变.中药干预下,NC-H446细胞株E-CD阳性表达率由原来的12%±8%提高到34%±9%,积分光密度(I0D)由78.5±16.9增加到200.3±21.7,前后相比具有明显差异(P＜0.01);穿过基质胶的细胞数分别为126.5±43.61,与对照组相比差异显著(P＜0.01),与ARTA相比无明显差异.结论:益气活血中药能明显抑制NC-H466细胞株的生长,能促进E-CD的正常表达,减弱肿瘤细胞的侵袭转移能力,中药在上述作用方面可代替AR-TA.
关键词： 钙黏蛋白 益气活血中药 肺癌细胞/NC-H446培养 侵袭 全反式维甲酸 -
腺样囊性癌E-cad、LN、FN和PCNA表达的临床意义
目的探讨腺样囊性癌(ACC)上皮细胞黏附分子钙黏蛋白(E-cad)、层黏连蛋白(LN)、纤维黏连蛋白(FN)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达与预后的关系.方法应用免疫组化方法对34例腺样囊性癌E-cad、LN、FN和PCNA的表达进行检测.结果E-cad低表达率为50%(17/34),E-cad低表达与ACC组织类型、临床分期、复发/转移及5年生存率显著相关(P＜0.05).实体型、临床Ⅲ～Ⅳ期、有复发/转移及术后生存期＜5年的ACC,基底膜缺损程度显著高于筛状管状型、Ⅰ～Ⅱ期、无复发/转移及术后生存期＞5年者(P＜0.05).PCNA计数标记指数平均为30.9%,前者中PCNA指数均显著增高(P＜0.01).结论E-cad、LN、PCNA的表达可作为临床判断ACC恶性程度、评估预后的有价值指标.
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肾脏肿瘤的病理诊断
肾透明细胞癌、肾母细胞瘤是成人及儿童常见的肿瘤,一直以来,关于这两类肿瘤病理诊断的认识没有很大变化,但近年来随着免疫组织化学及分子遗传生物学技术的发展,许多新的肾脏肿瘤类型已被确认.此外,由于影像学技术的发展,良性病变(良性肿瘤及瘤样病变)的检出率也逐年增加,有些良性病变临床表现及病理形态与肾脏恶性肿瘤相似,如果认识不足可能造成误诊,因此应引起足够的重视.注:Xpll RCC为Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾癌;KSC为肾脏特异性钙黏蛋白;E-cad为E-钙黏蛋白;EMA为上皮细胞膜抗原;"+"表示阳性;"-":表示阴性;"/"表示"不详"
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血管内皮钙黏蛋白在自身免疫性疾病中的作用研究进展
VE-cadherin是内皮细胞特异性钙黏蛋白,主要分布在细胞间连接部位的细胞膜上,其表达依赖于血管内皮细胞的完整性；反过来,其正常表达与功能为维持血管内皮的完成性所必需。简言之,VE-cadherin在正常血管发生、形成、保持血管内皮完整性、细胞内的信号转导的各个过程中均起着重要作用。现有的研究提示,除血管内皮外, VE-cadherin还在某些肿瘤细胞中发挥作用。近年来发现,在自身免疫性疾病中,往往伴随着抗 VE-cadherin 自身抗体的出现,这预示着VE-cadherin可能在免疫功能紊乱的疾病中同样发挥重要作用。以下对VE-cadherin的生物学特性及其与自身免疫性疾病的一些相关研究进展做一综述。
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E-钙黏蛋白复合体与胃癌
E-钙黏蛋白是一类介导细胞-细胞间相互黏附、具有维持组织结构完整性和极性的钙依赖性跨膜蛋白.E-钙黏蛋白功能的发挥,有赖于与连接素共同构成复合体.研究发现,上皮型恶性肿瘤的分化、侵袭和转移与E-钙黏蛋白-连接素复合体的表达及功能障碍有关.众多研究表明,E-钙黏蛋白-连接素复合体介导的黏附功能下降可能存在三个机制:E-钙黏蛋白表达下调或基因突变;α-连接素表达异常或基因缺失;β-连接素分子异常生化修饰.因β-连接素是APC-β-catenin-Tef/Lef信号转导通路的关键分子,E-钙黏蛋白-连接素复合体介导的黏附功能下降还可能涉及癌细胞生物学中更深、更广的层面.对E-钙黏蛋白-连接素复合体的深入研究将有助于进一步揭示胃癌等恶性肿瘤的发生、发展机制.
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胃癌E-钙黏蛋白表达与临床病理学的关系
目的:细胞黏附功能下降在上皮型恶性肿瘤发展过程中起关键作用,E-钙黏蛋白是重要的黏附分子我们检测E-钙黏蛋白在胃癌及癌前的表达,并分析其与胃癌临床病理学的关系.方法:采用免疫组织化学方法检测163例胃癌、44例异型增生、25例肠化生、28例萎缩性胃炎石蜡标本的E-钙黏蛋白表达水平.结果:萎缩性胃炎、肠化生以及对照组胃黏膜均保留正常的细胞膜染色.E-钙黏蛋白在胃癌异常表达率为46%,异型增生为36%,萎缩性胃炎和肠化生E-钙黏蛋白表达正常.BorrmannⅢ型和BorrnannⅣ型E-钙黏蛋白异常表达率显著高于Borrmann Ⅰ型和BorrmannⅡ型(P<0.01).E-钙黏蛋白在管状腺癌、黏液腺癌及印戒细胞癌的异常表达率分别为44%、54%和73%,显著高于乳头状腺癌(19%)(P<0.05).E-钙黏蛋白在肠型胃癌和弥漫型胃癌的异常表达率分别为33%(36/108)和73%(29/40),两者之间具有显著性差异(P<0.01).E-钙黏蛋白表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移和远处转移无关(分别P＞0.05).结论:胃癌存在E-钙黏蛋白表达异常,E-钙黏蛋白表达异常与胃癌组织学发生密切相关,E-Cad表达异常可能是胃癌发生、发展过程中的早期事件.
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解离素-金属蛋白酶10在胃癌组织中的表达及其与浸润转移及预后的关系
解离素-金属蛋白酶10(ADAM10)是一种跨膜金属蛋白,通过调节Notch、上皮细胞型钙黏蛋白(E-cadhefin)、表皮 生长因子(EGF)、表皮生长因子受体2(erbB2)和炎性细胞因子,参与肿瘤的形成和炎性疾病的发病.研究表明,ADAM10可能是肿瘤和炎性疾病的一个潜在治疗靶点.ADAM10在肝癌、前列腺癌、基底细胞癌、结肠癌和口腔鳞状 上皮细胞癌组织中高表达,并在肿瘤的形成过程中起重要作用.为了明确ADAM10在胃癌组织及非肿瘤胃黏膜组织中 的表达情况及其与胃癌临床病理学指标、患者预后的关系,本研究应用免疫组化分析了ADAM10在胃癌组织中的表达情况.
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非小细胞肺癌组织中上皮钙黏蛋白的表达及与预后的关系
目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中上皮钙黏蛋白(E-cadherin)的表达及与预后的关系.方法用组织阵列仪构建365例NSCLC患者手术切除癌组织标本的组织芯片,对该芯片进行E-cadherin免疫组化染色,并分析E-cadherin表达与临床病理资料及生存预后的关系.365例中,鳞癌116例、腺癌199例、腺鳞癌等组织类型50例.结果 E-cadherin蛋白主要在肿瘤细胞的胞膜和细胞质中表达,有32.1%(117/365)为E-cadherin低表达.E-cadherin低表达与淋巴结转移(χ2 = 16.430,P= 0.001)、肿瘤细胞低分化(χ2 = 9.243,P= 0.010)以及临床病理分期(χ2= 9.421,P= 0.024)呈正相关,而与病理类型无明显关系;E-cadherin表达与NSCLC预后差密切相关(P<0.0001).多因素生存分析表明,E-cadherin表达是NSCLC预后差的独立预后因素(P<0.001).结论 E-cadherin可能与NSCLC的进展有关,其表达状态是NSCLC独立预后因素.
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原钙黏蛋白19（PCDH19）基因突变相关的癫痫性脑病一例
患儿,女,6岁,因“反复抽搐5年余,发热、抽搐再发1d”入福建省泉州市儿童医院小儿神经科住院治疗。患儿系 G2 P2,足月顺产,围生期无异常,家族史无异常。患儿10个月始出现抽搐发作,表现为睡眠时突发觉醒,双眼向一侧凝视,口唇发绀,四肢不对称强直抽动,历时5~6 min 缓解,无发热。此后抽搐反复发作,伴或不伴发热,但发热时必出现抽搐,且1次热程可出现7~10余次发作,呈短暂丛集性发作,形式及历时同前。发病后多次求诊我院门诊,行颅脑磁共振成像检查：未见异常,多次脑电图检查示：未见异常,诊断：癫痫,部分性发作。先后口服“丙戊酸钠、左乙拉西坦、托吡酯”抗癫痫治疗,抽搐控制不理想,遇感染发热时即出现多次抽搐。患儿发病前精神运动发育正常,发病后精神发育迟滞,特别是语言发育较正常同龄儿落后。入院查体：神志清楚,对答切题,但发音不清,言语内容单一幼稚,皮肤黏膜未见牛奶咖啡斑、色素脱失斑,心、肺、腹部无阳性体征,四肢肌力Ⅴ级,肌张力正常,双膝腱反射、跟腱反射对称引出,双侧巴氏征阴性。入院后脑脊液常规检查正常；复查脑电图：右后颞区棘波、棘慢波,见图1；IQ测试：45分。诊断：癫痫,部分性发作；智力低下(中度)。予减停“丙戊酸钠”,继续口服“托吡酯、左乙拉西坦”,加用“氯硝安定”抗癫痫治疗,随访观察2个月,抽搐发作频率较前有所减少,但发热时仍出现抽搐发作。患儿进行癫痫相关的基因检测(委托广州金域医学检验中心),应用过柱法( QIAamp Blood DNA Mini Kit,QIAGEN公司,美国)提取外周血DNA,应用Primer Premier 5．0软件针对包括PCDH19基因在内的与癫痫相关的142个基因的外显子编码区设计引物,应用2 X PCR MasterMix 聚合酶( TIANGEN,天根)进行PCR 扩增( ABI9700型 PCR 仪, Life technolo-gy,美国),然后对 PCR 产物进行直接测序(ABI3500测序仪,Life technology,美国),与参考序列( NM_020766．2与NG_021319．1)进行比较,从而发现可能存在的基因突变,并确定其父母起源。患儿的基因检测结果显示：PCDH19基因杂合突变：c．918 delC p．( Tyr306?)；父亲具有相同基因半合子突变,但临床无症状；母亲未发现该基因突变,见图2。患儿家族史：无其他癫痫患者。
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锰超氧化物歧化酶和E-钙黏蛋白在鼻咽癌组织中的表达及意义
目的 观察锰超氧化物歧化酶(MnSOD)和E-钙黏蛋白(E-Cad)在鼻咽癌组织中的表达及其生物学意义.方法 应用免疫组织化学S-P法,对60例鼻咽癌组织中MnSOD及E-Cad的表达水平进行检测和评价.结果 MnSOD强阳性表达率全组的为47%(28例),淋巴结阳性者(51例)中的为49%(25例),淋巴结阴性者(9例)中的为33%(3例)(x2=0.76,P=0.382).E-Cad强阳性表达率全组的为47%(28例),淋巴结阳性者中的为43%(22例),淋巴结阴性者中的为78%(7例)(x2=3.69,P=0.047).随T、N分期增加MnSOD表达水平上升,且仅与转移淋巴结大小呈正相关(r=0.46,P=0.002),与淋巴结转移区域无关(r=0.22,P=0.116);MnSOD高表达时放射敏感性低、疗效差.E-Cad表达越低N分期越晚,其表达水平与淋巴结转移区域呈负相关(r=0.33,P=0.020),但与T分期、转移淋巴结大小及放射敏感性无关(r=-2.19,P=0.093;r=-0.07,P=0.623;r=-0.18,P=0.170).多因素分析显示MnSOD、E-Cad表达水平升高与预后生存有关(x2=4.45,P=0.035;x2=5.12,P=0.024).结论 MnSOD高表达可能促进肿瘤生长,降低鼻咽癌放射敏感性.ECad高表达可抑制癌细胞淋巴转移,但与肿瘤生长、浸润无关.MnSOD、E-Cad表达水平有可能影响鼻咽癌预后.
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胎盘型钙黏蛋白在寻常性银屑病患者血清和皮损中的表达及意义
目的 探讨胎盘型钙黏蛋白(P-cadherin,P-cad)在寻常性银屑病发病中的作用和意义.方法 选择寻常性银屑病患者40例,分别采用酶联免疫吸附法和免疫组化法检测患者血清和皮损中P-cad的表达,另40名正常人作为对照.结果 寻常性银屑病患者血清中P-cad表达水平明显高于正常对照者(P＜ 0.01),表达水平与病情严重程度呈正相关；寻常性银屑病患者皮损中P-cad在角质形成细胞(keratinocyte,KC)各层均有表达,而正常对照组仅在表皮基底层表达,表达水平差异有统计学意义,且与银屑病皮损严重程度指数(PASI)呈正相关.结论 P-cad在寻常性银屑病呈高表达,且与疾病严重程度呈正相关.
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EphA2因与先天性白内障
先天性白内障多因与晶状体发育相关基因突变造成,其中EphA2基因位于人类染色体1p36,其编码的EphA2酪氨酸激酶受体是一种存在于哺乳动物细胞中的特异性激酶受体,在人类许多组织细胞中都有表达.EphA2酪氨酸激酶受体与晶状体细胞间交流、细胞内蛋白质结构稳定性等多方面相关,其内的SAM结构域可调控晶状体纤维细胞内蛋白募集过程有序.同时,ephrin配体-EphA2受体复合物正常结合是晶状体纤维细胞纵向排列的先决条件.只有晶状体纤维细胞内蛋白质稳定,相互间规则排列,晶状体才能维持透明性;反之先天性白内障形成.
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T-钙黏蛋白与某些皮肤病的研究进展
钙黏素是Ca依赖性跨膜的细胞间黏附分子,通过在细胞膜表面表达钙粘素配体介导同型细胞间及细胞与基质间的黏附,参与桥粒的构成,维持组织结构的完整,在细胞识别信号转导,细胞的连接和生长分化、组织发育、器官形成等过程中发挥重要的作用.
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小鼠心脏侧群细胞在体内的分化迁移及其机制探讨
目的 探讨小鼠心脏的SCA1-/CD31-侧群(cardiac side population,cSP)细胞在体内的分化、迁移及其机制.方法 将标记PKH26的SCA1-/CD31-CSP细胞注射到小鼠心肌梗死模型心肌内,观察这些细胞的迁移和定位;组织染色、逆转录酶聚合酶链反应检测细胞的分化和钙黏蛋白的表达水平;趋化实验检测SDF-1 α/CXCR4通路的作用.结果 SCA1-/CD31-CSP细胞能够从穿刺部位迁移到缺血区域,荧光标记显示已分化成血管内皮细胞并形成血管样结构.与对照组相比,SCA1-/CD31-CSP细胞上表达的钙黏蛋白在心肌梗死后显著下降;SDF-1 d诱导迁移反应呈明显的剂量依赖关系且能够被anti-CXCR4抗体阻断.结论 在小鼠的心脏中SCA1-/CD31-CSP细胞可作为内皮祖细胞.SDF-1 α/CXCR4通路在心肌梗死后,对这些细胞的迁移可能发挥重要作用.
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E-cad、LN、ColⅣ和PCNA与乳腺癌浸润转移的关系
目的 探讨细胞黏附分子钙黏蛋白(E-cad)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达与乳腺癌的关系.方法采用免疫组织化学技术对80例乳腺癌E-cad、LN、ColⅣ和PCNA的表达进行检测.结果 E-cad低表达率与乳腺癌组织类型、分化程度、临床分期、转移及生存期短显著相关(P ＜ 0.01);基底膜缺损程度在分化低、临床Ⅲ～Ⅳ期、有转移及生存期<5年的乳腺癌组,显著高于分化高、临床Ⅰ～Ⅱ期、无转移及生存期≥5年组(P ＜ 0.01),而PCNA的表达在前组中显著增高(P ＜ 0.01).结论 E-cad、LN、ColⅣ和PCNA的表达可作为临床判断乳腺癌浸润转移及预后的重要指标.
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Cripto-1高表达以及E-cadherin低表达与晚期胃癌转移有关
目的 联合分析Cripto-1和E-cadherin在胃癌中的表达情况,并进一步确定Cripto-1的上调以及E-cadherin的下调与胃癌生物学行为的关系.方法 免疫组化检测75例胃癌组织的Cripto-1和E-cadherin的表达情况.结果 Cripto-1在胃癌组织中高表达(48%,36/75)与远处转移、TNM分期相关,而E-cadherin的缺失表达(68%,51/75)与淋巴结转移、TNM分期相关.综合分析Cripto-1以及E-cadherin的表达情况,重新分组后,Cripto-1(+)/E-cadherin(-)的肿瘤与淋巴结转移、远处转移以及TNM分期呈明显相关.结论 联合检测Cripto-1与E-cadherin的表达能更好的分析胃癌转移情况.
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子宫内膜异位症中着床相关因子的研究进展
胚胎着床是包括人类在内的哺乳动物生命形成和持续发育的关键的步骤.着床过程需胚胎和母体双方的同步发育,涉及一系列因子的变化.子宫内膜在月经周期中有一个适于胚胎着床的时间段称"种植窗",在这个阶段,人类子宫内膜细胞增殖分化活动以及与胚胎相互作用的机制,一直是生殖生理和生殖病理研究的热点问题.目前认为,整合素等与子宫内膜容受性相关,研究这些相关因子在种植窗时期的表达及在子宫内膜异位症患者中的变化情况,可能有助于子宫内膜异位症相关性不孕患者的治疗.
