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大鼠胚胎神经上皮细胞侧脑室移植后存活及分化的实验研究
目的观察大鼠胚胎神经上皮细胞同种脑移植后的存活及生长分化状况. 方法孕12 d大鼠剖腹取胚胎,剥离神经管,胰酶消化后获取神经管壁上的神经上皮细胞,然后植入其父体侧脑室中.分别于移植后10 d、14 d、21 d、28 d灌注取脑,用HE染色及神经元特异烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学方法检测胚胎神经上皮细胞移植后的存活及分化状况. 结果神经上皮细胞侧脑室移植后多贴附于脑室壁形成细胞团块,有的随脑脊液循环至第三脑室生长.随时间延长移植物增大.HE染色见脑室内有成团的移植细胞 ;免疫组织化学染色显示移植细胞团内既有NSE-免疫阳性细胞,也有GFAP-免疫阳性细胞 .移植物周围多为GFAP-免疫阳性细胞. 结论胚胎神经上皮细胞侧脑室移植后能够贴附脑室壁存活,并能分化为神经元和神经胶质细胞.
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牛磺酸对高温处理后神经上皮细胞存活和分化的影响
目的 探讨牛磺酸对高温处理后神经上皮细胞存活和分化的作用. 方法 取孕12.5d小鼠胚胎神经管上皮细胞进行原代培养,将其分为正常对照组、高温组和牛磺酸保护Ⅰ、Ⅱ组.显微镜下观察细胞的形态学变化,用四甲基偶氮唑盐(MTT)自动比色法测定细胞增殖活性,二脒基苯基吲哚(DAPI)染色法测定细胞凋亡率,免疫荧光法检测细胞中Caspase-3、微管相关蛋白-2(MAP-2)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达. 结果 与正常对照组比较,高温组细胞增殖活性明显降低,细胞凋亡率明显升高,Caspase-3阳性细胞数明显增多,MAP-2阳性细胞数明显减少;与高温组比较,牛磺酸保护Ⅰ、Ⅱ组细胞活性显著升高,凋亡率显著降低,Caspase-3阳性细胞数明显减少,MAP-2表达明显增多;4个组比较,GFAP的表达差异无显著性. 结论 牛磺酸对高温处理后神经管上皮细胞的存活具有保护作用,并可能促进其向神经元方向分化.
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大鼠胚胎神经上皮细胞脑内移植治疗帕金森病的实验研究
目的观察大鼠胚胎神经上皮细胞植入帕金森病大鼠纹状体后的存活、分化情况及治疗作用. 方法孕11?d大鼠剖腹取胚胎,剥离神经管,胰酶消化后获取神经管壁上的神经上皮细胞,在脑立体定位仪下植入帕金森病大鼠毁损侧纹状体内,于移植后不同时间诱发旋转实验,观察症状的改善,并灌注取脑,切片后做酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学染色,检测胚胎神经上皮细胞的存活及分化状况. 结果胚胎神经上皮细胞脑内移植后,帕金森病鼠的旋转行为有明显改善.移植后2、4及8周时可检测到成片或散在的TH-免疫阳性细胞. 结论胚胎神经上皮细胞移植至帕金森病大鼠纹状体后,可分化为多巴胺能神经元并能改善旋转症状.
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癫癎相关性局灶性皮质发育异常的病理学分类及研究进展
大脑皮质的形成经历3个主要阶段:①原始神经上皮细胞的分裂增殖;②神经母细胞的迁移、分化;③皮质结构形成.其中任何一个阶段受到遗传因素或周围环境中有害因素的影响均会导致皮质发育异常(malformations of cortical development,MCD)的发生,由于影响因素作用的环节及影响程度不同,所产生的MCD的病理学表现也各不相同,故MCD是一组局灶性或弥漫性皮质结构异常的病变的总称[1].
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鼻内镜下中鼻甲部分切除对嗅觉功能的影响
自开展鼻内镜手术以来,涉及中鼻甲对嗅觉影响的报道较少.中鼻甲自身是否存在嗅神经上皮细胞没有终确认,中鼻甲部分切除对嗅觉的影响没有定论.本研究目的是探讨鼻内镜下中鼻甲部分切除后对其嗅觉功能的影响.
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气管神经纤维瘤1例并文献复习
神经纤维瘤病(neurofibromatosis, NF)为常染色体显性遗传病,是神经皮肤综合征(neurocutaneous syndromes)的一种。该病多起源于神经上皮细胞,常累及中枢神经系统,主要因基因缺陷导致神经嵴细胞发育异常,从而引起机体多系统损害,目前尚无临床治愈方案。神经纤维瘤多造成皮肤、中枢神经、骨骼及眼部病变,发生于气管内较少见,一旦发生于气管内,常引起患者气道狭窄或阻塞,出现呼吸困难、咳嗽咳痰及反复肺部感染[1],常规治疗效果不佳或无效。现报告气管神经纤维瘤1例并文献复习。
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急性中心性浆液性脉络膜视网膜病变黄斑区形态学改变与视功能的关系
目的:探讨急性中心性浆液性脉络膜视网膜病变(CSC)的形态学改变与视功能变化的相关性.方法:选取急性CSC患者36例(36只眼),应用光学相干断层扫描(OCT)和多焦视网膜电图(mfERG)进行检查.OCT测量CSC患者黄斑区神经上皮层脱离的高度、水平范围、黄斑体积.mfERG测量视网膜后极部不同区域的N1波、P1波的潜伏期和反应密度.采用Pearson相关分析和Spearman相关分析,分析急性CSC的黄斑区形态学改变与视功能变化的相互关系.结果:急性CSC患者黄斑区神经上皮层脱离高度、神经上皮层脱离水平范围与佳矫正视力(BCVA)呈负相关(r分别为-0.922和-0.896,均P<0.001),黄斑体积与BCVA无相关(r=0.014,P>0.05).mfERGPI波1~3环,N1波2环的潜伏期与BCVA呈负相关(r,分别为-0.488、-0.514、-0.452及-0.445,均P<0.05);N1波1、2环的反应密度与BC-VA呈负相关((r,分别为-0.497和-0.502,均P<0.05),N1波2环、P1波1环的潜伏期与神经上皮层脱离高度呈正相关(r,分别为0.486和0.421,均P<0.05).结论:OCT和mfERG联合应用可准确检测CSC患者的黄斑区形态和功能的变化,CSC患者神经上皮层脱离的高度与黄斑区功能的变化关系密切.
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胃腺癌组织中NET1 FHIT Ki67的表达与淋巴结转移的关系及预后生存观察
胃癌的发生、发展是多种原癌基因的活化和多种抑癌基因的失活造成的,是多种遗传改变累积的结果.胃癌淋巴结转移(LNM)以及转移程度是影响胃癌预后的重要因素之一.本研究通过胃腺癌组织中神经上皮细胞转化基因1(NET-1)、脆性组氨酸三联体基因(FHIT)、Ki67的表达,了解其与LNM的关系,并观察胃癌术后生存时间,为研究胃腺癌的发展、转移及预后提供可靠的理论依据.
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大豆异黄酮对神经管畸形细胞氧化损伤保护作用
神经管上皮细胞的增生是神经管形成的关键,任何抑制神经上皮细胞增生的因素均会导致神经管畸形(neural tube defects,NTDs).环磷酰胺可通过抑制神经上皮细胞DNA的合成和细胞分裂而引起细胞的过度凋亡,进而影响细胞的增殖、分化和神经管的闭合,导致NTDs的发生[1].虽然细胞凋亡的确切机制仍不十分清楚,但机体氧化应激与细胞凋亡关系密切,而过度氧化又可引起蛋白质和脂质膜的损伤,破坏DNA的双螺旋结构或抑制DNA复制过程中一些关键酶,导致DNA损伤[2].本文在前期体外研究[3]的基础上,从动物在体水平检测NTDs发生和大豆异黄酮对凋亡细胞和DNA损伤的保护作用,为有效防治神经管畸形提供理论依据.
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小脑发育及其基因调节
小脑由后脑发育而来,初始于第四脑室侧壁的菱唇,此后菱唇上部突入第四脑室腔形成小脑板,两侧小脑板向外侧突起形成两个小脑半球.而位于室管层的神经上皮细胞,经过不同形式的增殖和迁移,形成了典型的小脑皮质的三层结构.多种基因可以调控小脑的发生和发育,例如调控小脑原基峡区组织者的基因otx2和gbx2,调控小脑神经元数量的基因ru49/zipro1、zic1/2,调控小脑神经元迁移的reelin,rcm以及小脑纤维联系的基因ephrin-A,Wnt3/7等.
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儿童中枢神经系统影像学诊断第6讲颅内肿瘤(二)
(上接本刊2006年第5期400页)2神经上皮性肿瘤广义的神经上皮性肿瘤(neuroepithelial tumors)是指所有起源于神经上皮细胞的一大类肿瘤;而狭义上特指过去通称为胶质瘤(glioma)的一类肿瘤,包括星形细胞瘤、室管膜瘤和髓母细胞瘤等,是常见的原发性脑肿瘤,约占全部颅脑肿瘤的40%~50%.在影像学检查中,平片与造影诊断价值有限,主要靠CT和MRI.
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bHLH Olig基因在少突胶质细胞形成过程中的作用及与脑室周围白质软化症的关系
少突胶质细胞是中枢神经系统中形成髓鞘的细胞,是由神经发育过程中的神经上皮细胞亚区产生的神经胶质细胞祖细胞发育而来的.少突胶质细胞因子(Oligodendrocyte lineage gene,Olig)家族属于碱性螺旋-环-螺旋结构(Basic-helix-loop-helix,bHLH)转录因子,其碱性区域与DNA相结合,HLH结构区域参与形成二聚体.Olig基因参与少突胶质祖细胞的分化.在人类脑肿瘤和脱髓鞘损伤修复的研究中表明Olig在多种神经系统疾病中都可能发挥作用,本综述着重介绍Olig基因和脑室周围白质软化症(Periventricular leukomalacia,PVL)的关系.
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轴突导向因子EphA5沉默后抑制中脑神经上皮细胞投射
目的:探讨轴突导向因子EphA5在中脑神经上皮细胞向纹状体投射中的作用.方法:从孕11d大鼠胚胎取材并培养中脑神经上皮细胞;设计EphA5基因干扰序列,构建RNA干扰载体,采用电转染技术将EphA5干扰载体转入中脑神经上皮细胞,电转后将中脑神经上皮细胞与纹状体共培养,观察转染后中脑神经上皮细胞向纹状体组织的靶向生长情况.结果:中脑神经上皮细胞与纹状体组织块联合培养,神经突起明显朝向组织块生长;EphA5基因干扰载体转染中脑神经上皮细胞可降低EphA5蛋白表达,EphA5基因沉默后神经上皮细胞突起朝向纹状体生长趋势不明显.结论:EphA5基因沉默后中脑神经上皮细胞向纹状体投射减弱,EphA5基因可调控中脑神经上皮细胞向纹状体的靶向投射.
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成人鼻腔嗅黏膜嗅鞘细胞的分离、培养与纯化
目的自成人鼻腔嗅黏膜中培养纯化嗅鞘细胞,并进行免疫细胞化学鉴定,探讨嗅黏膜中嗅鞘细胞的培养方法.方法取成人嗅黏膜,采用差速贴壁法获得较高纯度的嗅鞘细胞,并采用免疫细胞化学法进行形态学观察.结果通过纯化,可获得纯度约为75%的嗅鞘细胞,并表达P75NGFr,光镜下细胞形态以带有细长突起的双极细胞及三极细胞为主,有少量的扁平"煎蛋样"细胞.结论自成人鼻腔嗅黏膜可成功分离培养出嗅鞘细胞,为开展自体嗅黏膜嗅鞘细胞移植修复脊髓损伤提供了技术与方法.
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特异性诱导人诱导多能干细胞向神经上皮细胞分化
目的:通过慢病毒转染技术成功建立了人诱导分化多能干细胞系(induced pluripotent stem cell, iPSC)并诱导它们向神经上皮细胞 (neuroepithelial cells, NECs)定向分化,为研究人胚胎早期神经发育建立一种新的模型,并有望为临床神经系统病变的治疗提供一种新的移植选择.方法:采用慢病毒将转录因子八聚体结合转录因子-4(octamer-binding transcription factor-4, OCT4)、性别决定Y区域转录因子2 [sex determining region Y (SRY)-box 2, SOX2]、Nanog 同源盒(Nanog homebox, NANOG)、Lin-28 同源因子(Lin-28 homolog, LIN28)、原癌基因c-Myc和Kruppel 样因子4(Kruppel-like factor 4,KLF4)导入到人胎肺成纤维细胞中,经过筛选得到重编程后的人iPSC,并在体外通过加入数种生长因子将其诱导成为NECs.结果:成功获得与成纤维细胞相同遗传背景的iPSC,具有与人胚干细胞(human embryonic stem cell, hESC)相似的形态学及多向分化潜能,且能在体外被诱导分化成为NECs,分化效率与hESC相似.结论:通过重编程技术成功建立人iPSC并将其定向诱导分化为NECs,为iPSC在神经系统疾病特别是遗传性或退行性神经病变的治疗和机制研究中的应用推广奠定了实验基础.
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外周原始神经外胚层肿瘤13例诊治体会
外周原始神经外胚层肿瘤(peripheral primitive neuroectodermal minor,PNET)起源于原始未分化的神经上皮细胞,高度恶性,易复发转移、预后差.我们就2001年6月至2007年6月收治的13例PNET患者报告如下,以加深对PNET认识,改善预后.
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小鼠神经管发生中PCD与原癌基因bcl-2表达的相关性
神经胚形成neur ulation)中关键的形态学变化是神经管的形成,在此过程中,正常PCD是不可缺少的因素之一.在神经管关闭过程中发生率很高的各种神经管关闭缺陷(neural tube closure defect,NTCD),大多数亦与凋亡异常有关.已知神经管发生是一个多因素参与的高度复杂的胚胎学事件,其中原癌基因bcl-2可能参与其中的关键环节.但关于bcl-2在正常神经管发生和神经管缺陷的作用及调控机制仍不清楚.本实验用全胚胎原位杂交技术和TUNEL染色对小鼠神经管发生中bcl-2 m RNA的表达与细胞凋亡的关系进行研究,原位杂交对照实验用sense-bcl-2 cRNA探针代替anti-sense bcl-2 cRNA进行对照实验,结果显示 ,1)9.0dPC神经上皮细胞的凋亡率高,提示9.0dPC神经管的高细胞凋亡率有利于神经管的关闭.从空间分布看,神经管头端的凋亡细胞多于中段和尾段,提示颅侧的细胞凋亡率与脑泡的塑形有关.2)用全胚胎原位杂交研究了小鼠神经管形成过程中原癌基因b cl-2表达及与PCD的关系,7.5dPC鼠胚的bcl-2 mRNA杂交信号弥散于整个胚体,以原条区域较强,提示bcl-2有利于原条细胞向中胚层细胞的分化,8. 5dPC鼠胚bcl-2 mRNA升高,有助于神经上皮顺利进入有丝分裂.以后bcl -2 mRNA表达下降并伴有细胞凋亡率的升高,提示有利于神经上皮进入正常的细胞死亡而利于神经管的关闭.
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转染重组bcl-2基因缓解RA介导NTCD的电镜观察
神经胚形成(neurulation)中关键的形态学变化是神经管的形成,在此过程中, 正常PCD是不可缺少的因素之一.在神经管关闭过程中发生率很高的各种神经管关闭缺陷 (neural tube closure defect,NTCD),大多数亦与凋亡异常有关.研究发现PCD广泛存在于发育中的神经系统,其意义在于对神经系统进行雕塑 ,终使人神经系统的发育达到结构的高度精细和功能的尽善尽美.但目前关于早期神经管发育中的PCD及与原癌基因bcl-2的关系研究极少.为此本实验用电镜技术结合全胚胎培养技术和重组基因转染技术研究转染bcl-2基因能否减轻PA介导NTCD中的细胞凋亡,旨在揭示bcl-2在神经管缺陷中的作用及可能的机制.结果显示正常神经管上皮细胞呈未分化状态,核浆比例大,胞质内细胞器少,主要为核糖体.在RA介导的神经管缺陷组,电镜下神经上皮细胞呈现典型的凋亡特征,早期为染色质的边聚,以后核膜发生凹陷和皱缩,进一步是核在胞浆内的断裂,后形成凋亡小体.在凋亡的全部过程中,细胞膜一直保持完整.我们还观察到,在凋亡的早期有大量空泡(vacuoles)出现在胞浆 ,高倍电镜下这些空泡是由于线粒体内膜嵴的断裂而导致线粒体的气球样变(balloo ned)而形成.经转染正义bcl-2基因后,虽然也偶见凋亡早期的细胞,但多数基本呈现正常的结构,与正常全胚胎培养的鼠胚神经管上皮细胞形态接近.我们将全胚胎培养的正常鼠胚转染反义bcl-2基因后,神经管上皮又呈现出细胞凋亡特征,如核的断裂、线粒体嵴的崩解和空泡形成.过去认为线粒体在凋亡中基本没有变化,故人们即使观察到凋亡细胞内的大量空泡,也不知道这种空泡的来源和意义.这一现象由Sasaki等于199 7年首次描述,认为线粒体的空泡形成是细胞凋亡级联反应的一个组成部分,我们观察到线粒体的破坏和凋亡现象共存在于RA介导的细胞凋亡.转染bcl-2基因后,能缓解部分细胞的凋亡,随之线粒体的损伤也缓解.故我们认为转染外源性bcl-2基因能通过维持线粒体膜的稳定来抑制凋亡.
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业余拳击运动致视网膜损伤和脱离4例报告
外伤性视网膜损伤是指眼球在外力钝击作用下视网膜产生的病理性损害,以裂孔为特征.而视网膜脱离是指视网膜神经上皮细胞和色素上皮细胞分离的病理状态,视网膜裂孔是视网膜脱离的常见原因.跳水运动引起视网膜损伤常有报道,拳击运动引起的视网膜损伤在国内却少见.作者从1987年7月至2001年12月期间发现4例患者,现予以报道.
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灌服中药补阳还五汤的大鼠血清促进胚胎神经上皮细胞存活与分化的研究
为了观察灌服中药补阳还五汤的大鼠血清对胚胎神经上皮细胞生长分化的影响,在给Wistar大鼠灌服中药后,麻醉后取血并分离血清;取孕11 d大鼠胚胎神经管上皮细胞,分别接种于含有补阳还五汤药物血清和对照鼠血清的培养基内,于培养后不同时间观察细胞的生长状况,测量细胞突起长度,并用免疫组化技术检测胚胎神经上皮细胞的分化状况.结果显示:药物血清组神经上皮细胞的生长明显优于对照组,细胞突起长度也大于对照组;免疫组化反应显示,药物血清组神经元及神经胶质细胞数量均多于对照组.结论:灌服补阳还五汤的鼠血清既可促进胚胎神经上皮细胞的生长也可诱导其分化.