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bHLH Olig基因在少突胶质细胞形成过程中的作用及与脑室周围白质软化症的关系
少突胶质细胞是中枢神经系统中形成髓鞘的细胞,是由神经发育过程中的神经上皮细胞亚区产生的神经胶质细胞祖细胞发育而来的.少突胶质细胞因子(Oligodendrocyte lineage gene,Olig)家族属于碱性螺旋-环-螺旋结构(Basic-helix-loop-helix,bHLH)转录因子,其碱性区域与DNA相结合,HLH结构区域参与形成二聚体.Olig基因参与少突胶质祖细胞的分化.在人类脑肿瘤和脱髓鞘损伤修复的研究中表明Olig在多种神经系统疾病中都可能发挥作用,本综述着重介绍Olig基因和脑室周围白质软化症(Periventricular leukomalacia,PVL)的关系.
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过表达少突胶质细胞转录因子2加速小鼠胚胎干细胞分化为神经元-胶质细胞抗原2阳性少突胶质祖细胞样细胞
目的:观察少突胶质细胞转录因子2(O1ig2)过表达对小鼠胚胎干细胞(mESCs)向少突胶质祖细胞(OPCs)分化的影响.方法:将体外培养的mESCs分为空载体感染和Olig2-GFP慢病毒感染组,免疫荧光显色检测Olig2的表达.感染后9、14、21 d和28 d神经元-胶质细胞抗原2(NG2)免疫荧光显色观察mESCs向OPCs的分化情况.结果:Olig2-GFP慢病毒感染组mESCs经筛选后均为Olig2+/GFP+,而空载体感染组mESCs无Olig2表达.感染后9d,两组细胞均无NG2表达;感染后14d,Olig2-GFP慢病毒感染组NG2高表达,空载体感染组仅有少数细胞为NG2弱阳性;感染后21d与14 d相比,两组均无明显变化;感染后28d,两组细胞均有较强的NG2表达,组间无差异.结论:过表达Olig2能够加速mESCs分化为NG2+的OPCs样细胞.
关键词： 少突胶质细胞转录因子2 基因过表达 小鼠胚胎干细胞 少突胶质祖细胞 分化 -
脐血单个核细胞移植对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠促红细胞生成素蛋白及少突胶质祖细胞的影响
目的 探讨脐血单个核细胞(UCBMC)移植对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑促红细胞生成素(EPO)蛋白及少突胶质祖细胞的影响.方法 7日龄健康Sprague-Dawley新生大鼠40只随机分为正常对照组、HI组、UCBMC对照组和HI+UCBMC组,每组10只.采用经典Rice法制成HIBD模型,造模24 h后,正常对照组和HI组经侧脑室注入2μLPBS,UCBMC对照组和HI+UCBMC组经侧脑室注入3×106 UCBMC.移植后7d,采用EPO/DAPI与NG2/DAPI免疫荧光双标法观察损伤侧室管膜下区(SVZ) EPO蛋白及少突胶质祖细胞的变化,并进行相关性分析.结果 移植后7d,HI+UCBMC组NG2+DAPI+及EPO+DAPI+细胞数均显著高于UCBMC对照组(均P＜0.05)、HI组及正常对照组(均P＜0.01),UCBMC对照组NG2+DAPI+及EPO+DAPI+细胞数均显著高于正常对照组和HI组(均P＜0.01),正常对照组NG2+DAPI+细胞数显著高于HI组(P＜0.01).HI+UCBMC组NG2+DAPI+细胞数与EPO+DAPI+细胞数呈正相关(r=0.898)及直线回归(β=1.4604,P＜0.01).结论 UCBMC可促进HIBD新生大鼠少突胶质祖细胞的表达,其机制与EPO蛋白的表达增加相关,从而修复脑白质损伤.
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IGF-1诱导脐血间充质干细胞向少突胶质祖细胞分化的研究
目的 探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对脐血间充质干细胞(MSCs)诱导分化的影响.方法 第3代纯化的脐血MSCs在含有或无IGF-1的培养基条件下贴壁培养10d,免疫荧光显色,观察分化为少突胶质祖细胞(02A)的数量.结果 脐血MSCs在不含IGF-1培养基的条件下分化为少突胶质祖细胞的数量较少,而在含有IGF-1的培养基的条件下分化为少突胶质祖细胞的数量明显增加.结论 IGF-1可以诱导脐血MSCs向少突胶质祖细胞分化.
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少突胶质祖细胞移植对新生鼠缺氧缺血脑损伤学习记忆功能的影响
目的 探讨原代少突胶质祖细胞(O2A)的培养方法,并移植入缺氧缺血新生鼠脑内,为细胞干预早产儿白质软化病的研究提供细胞学基础.方法 根据O2A的生长时间、生长方式及细胞对培养层粘附等特性的差异,采用两次恒温摇床振荡分离纯化法和条件限定培养基培养,获得高纯度的O2A,经脑室移植人缺氧缺血性脑白质损伤的新生鼠脑内.结果 体外培养24 h后,细胞成堆聚集形成克隆球;第2～3天,细胞呈圆形或椭圆形,多数具有双极突起.实验新生鼠由脑室移植O2A后,测定平均逃避潜伏期:PVL+O2A移植组为(7.33±1.41)s,PVL+PBS组为(16.24±1.63)s,PVL组为(11.75+1.50)s;PVL+O2A移植组的平均逃避潜伏期比PVL+PBS组和PVL组缩短,与PVL+PBS组、PVL组比较差异均有统计学意义(P＜0.001).结论 两次恒温摇床振荡分离纯化法和条件限定培养基培养可获取高纯度的O2A;平均逃避潜伏期测定提示,移植O2A在脑内可分化为成熟的少突胶质细胞,使轴突重新髓鞘化,促进脑功能的修复.
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骨形成蛋白对少突胶质祖细胞体外定向分化的影响
目的 观察体外培养的少突胶质祖细胞(OPCs)在不同定向分化培养基中骨形成蛋白(BMP)的表达,以及BMP的拮抗剂Noggin对OPCs定向分化的影响,进而探讨脱髓鞘疾病治疗的新靶点.方法 选取新生1～2d的SD大鼠,应用选择性分离程序,通过细胞选择性贴壁培养和不同频率的振荡,分离纯化OPCs,分别用无血清和有血清的定向分化培养基培养,并在定向分化培养基中给予Noggin干预.应用免疫荧光法进行细胞鉴定,观察细胞分化状况.用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测定向分化细胞的BMP2、BMP4mRNA的表达.结果 纯化后的OPCs细胞达95％.在无血清的情况下,OPCs定向分化为少突胶质细胞;在有血清的情况下,定向分化为2-型星形胶质细胞,并且细胞BMP2/4mRNA表达增加.Noggin抑制OPCs向星形胶质细胞的分化.结论 OPCs具有增殖和双向分化的潜能.BMP2/4参与了OPCs定向分化的调控.
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少突胶质祖细胞的体外分离、培养和定向分化
目的 探索体外培养获得高纯度少突胶质祖细胞的方法,观察少突胶质祖细胞的形态学特点以及增殖和分化规律.方法 选取新生1～2 d SD大鼠,应用选择性分离程序,根据细胞的不同贴壁特性,通过2次细胞选择性贴壁培养和2次不同频率的振荡,分离纯化少突胶质祖细胞.应用物理振荡方法进行细胞传代,进一步纯化细胞.传代细胞分别用无血清和有血清的培养基培养,应用免疫荧光法进行细胞鉴定.结果 纯化后的少突胶质祖细胞达95%.在无血清的情况下,少突胶质祖细胞定向分化为少突胶质细胞;在有血清的情况下,定向分化为2-型星形胶质细胞,并且细胞骨形态形成性蛋白质4(BMP4)表达增加.结论 应用选择性分离程序,通过振荡分离的方法可以获得高纯度的少突胶质祖细胞.少突胶质祖细胞具有增殖和双向分化的潜能.BMP4参与了祖细胞定向分化的调控.
