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miR-130b促进小鼠胚胎发育过程中大脑皮质神经元的迁移
目的 通过胚胎在体电转染技术,在胚胎小鼠大脑皮质神经元中过表达miR-130b,探讨其对神经元迁移的影响.方法 利用miR-130b过表达载体,在昆明小鼠E15.5胚胎大脑中电转染,并于E17.5处死母鼠,取胚胎进行冰冻切片,于荧光显微镜下观察阳性神经元的迁移情况.结果 过表达miR-130b的小鼠胚胎,大脑皮质神经元的迁移速率上升,终迁移到达MZ层的神经元占总阳性神经元的75.1％,远高于对照组的22.1％;且停留在VZ/SVZ层的神经元(7.9％)远低于对照组(69.3％).结论 miR-130b在神经发育过程中能够促进神经元的迁移.在未来的研究中需要进一步探索其深层机制.
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寨卡病毒NS4A蛋白影响小鼠大脑皮质神经元的迁移
目的 在体研究寨卡病毒(Zika virus) NS3和NS4A蛋白对大脑皮质神经元迁移的影响.方法 通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)及反转录PCR测定Zika病毒SZ01株基因组的开放阅读框,确定NS3和NS4A蛋白编码序列,构建融合Flag标签的pCIG蛋白表达载体.通过子宫内电转技术在E13.5 d小鼠的大脑皮质的神经前体细胞中表达病毒蛋白.免疫组化检测Flag标签、TBR1与eGFP,观察表达NS3和NS4A蛋白的细胞在E18.5 d大脑皮质中的分布,评估Zika病毒蛋白对大脑皮质神经元迁移的影响.结果 1)NS4A的氨基酸序列与NCBI数据库一致,NS3存在1处氨基酸位点突变.2)Flag标签荧光信号与eGFP荧光共定位,提示eGFP可以指示病毒蛋白在皮质中的表达.3)TBR1荧光显示在体表达NS4A后,神经元的分布与pCIG对照组及表达NS3相比有显著差异(P＜0.001).结论 在体表达Zika病毒的NS4A蛋白可能影响神经元迁移.
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Znf804a基因在发育期鼠脑神经元的迁移、增殖及分化中的功能
目的:以小鼠为模型研究精神分裂症易感基因Znf804a在神经发育中的功能.方法:利用胚胎电转技术,将Znf804a的shRNA (shZnf804a)质粒及其对照质粒(pSUPER)电转进入E14.5的癌症研究所(ICR)小鼠脑室区,每种质粒电转3只,分别为敲低(knock down) Znf804a组和对照组,比较两组神经元在皮层板(CP)区的比例来评价神经元的迁移速度;比较两组神经元前体细胞形成神经球的直径来评估神经元增殖速度;比较体外培养神经元前体细胞中Nestin染色阳性神经元的比例检测神经元分化速度.结果:敲低Znf804a小鼠的神经元迁移到CP区的比例比对照组低(11.8％ vs.75.4％,P＜0.001);神经元前体细胞形成神经球的直径比对照组大(295μmvs.172μm,P＜0.01);神经元前体细胞中,Nestin染色阳性的神经元比例比对照组高(31.5％ vs.9.6％,P＜0.01).结论:敲低Znf804a小鼠神经元迁移速度和分化速度比对照组神经元慢,增殖速度比对照组神经元快,提示Znf804a在小鼠脑发育过程中发挥重要功能.
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甲状腺激素对氚致神经元迁移障碍的改善作用
目的 探讨甲状腺激素对氚辐射所致大鼠海马神经元迁移障碍的改善作用.方法 取新生大鼠进行海马神经元培养,培养7d后将细胞随机分为对照组、氚水组、甲状腺激素组和氚水+甲状腺激素组(同时加入3.7×105 Bq/ml氚水与0.3μg/ml甲状腺激素),作用24 h后,用Leica AF 6000活细胞工作站测神经细胞迁移距离；RT-PCR法检测reelin mRNA、BDNFmRNA的变化；Western blot、免疫细胞化学染色法观察神经细胞内β-微管蛋白变化.结果 与对照组相比,氚水组Reelin mRNA、BDNFmRNA和β-微管蛋白的表达量均显著减少(=5.80、5.48、5.47,P＜0.01)；而氚水+甲状腺激素组、甲状腺激素组的表达量均显著增加(t=7.75、12.06、13.65,P＜0.01;t=4.34、5.47、5.65,P＜0.01),并明显高于氚水组(t=2.92、10.32、8.76,P＜0.01;t=18.07、20.55、40.13,P＜0.01).氚水组细胞迁移距离明显缩短(t=8.62,P＜0.01)；而氚水+甲状腺激素组、甲状腺激素组细胞迁移距离明显延长(t=7.64、4.93,P＜0.01),并明显大于氚水组(t=11.32、12.31,P＜0.01).结论 甲状腺激素对氚辐射造成的神经元迁移障碍具有改善作用.
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小脑发育及其基因调节
小脑由后脑发育而来,初始于第四脑室侧壁的菱唇,此后菱唇上部突入第四脑室腔形成小脑板,两侧小脑板向外侧突起形成两个小脑半球.而位于室管层的神经上皮细胞,经过不同形式的增殖和迁移,形成了典型的小脑皮质的三层结构.多种基因可以调控小脑的发生和发育,例如调控小脑原基峡区组织者的基因otx2和gbx2,调控小脑神经元数量的基因ru49/zipro1、zic1/2,调控小脑神经元迁移的reelin,rcm以及小脑纤维联系的基因ephrin-A,Wnt3/7等.
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小鼠胚胎发育过程中N-Cadherin异常表达对大脑皮层神经元迁移的影响
目的:探究N-Cadhetin异常表达对小鼠大脑皮层发育过程中神经元迁移的影响.方法:通过小鼠活体子宫电转基因技术和RNA干扰技术相结合,在小鼠胚胎大脑皮层发育过程中实现对N-Cadherin的超表达和抑制表达,荧光免疫组化检测超表达结果,用GFP示踪N-Cadherin超表达和抑制表达后神经元在大脑皮层发育过程中的迁移特征.结果:与对照组相比,N-Cadherin超表达后有更多的GFP阳性神经元迁移到皮层的Ⅱ-Ⅳ层；N-Cadherin被抑制后大量GFP阳性神经元停滞在SVZ区.结论:N-Cadherin在小鼠大脑皮层发育过程中对神经元的迁移具有影响作用.
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鸡胚发育过程GFP标记视顶盖神经元迁移规律及NF分布特点的研究
目的:阐明鸡胚发育过程视顶盖层的组织学结构,神经元迁移的模式及神经丝蛋白的分布特点.方法:鸡胚正常培养到第3天(E3),采用鸡胚带壳开窗培养方法,取出3~4 ml蛋清,开窗培养至E5,将质粒pCAGGS-GFP通过活体原位电转基因技术导入视顶盖,电转后继续培养到胚胎发育的E8~E12,取材、固定、包埋、切片后进行荧光免疫组化分析不同时期各层结构的形成和神经丝蛋白的分布.结果:在鸡胚发育过程,视顶盖从内向外终共形成6层结构,大部分神经元垂直于视顶盖平面迁移至视神经纤维层终止,部分细胞沿视神经纤维层继续水平迁移,在中央灰质层(SGC)层,细胞迁移复杂,既存在纵向也存在横向迁移模式,NF的表达具有明显层的特点.结论:鸡胚发育过程视顶盖神经元不但存在从内向外垂直迁移的模式,而且还存在水平横向迁移的模式.
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鸡胚视顶盖早期产生的神经元迁移规律和层定位研究
目的:阐明鸡胚胎发育过程中视顶盖层的形成以及神经元的迁移模式.方法:新鲜种蛋正常发育到第4.5天～第5天(E4.5-E5),将质粒pCAG-GFP通过活体原位电转技术转入视顶盖,继续培养到E8、E10和E12,取材、固定、包埋、切片后用PI复染核.结果:到E12鸡胚胎视顶盖从内向外终形成6层结构,大部分神经元进行放射状迁移,部分神经元进行切向迁移,不同层的神经元有各自的形态特点.结论:鸡胚胎发育过程中不但存在由内向外的放射状迁移,还存在切向迁移模式.
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鸡胚视顶发育过程中神经元增殖、迁移和分层形成的规律
目的:采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记鸡胚发育过程巾视顶新生神经元,阐明鸡胚发育过程巾视顶盖神经元增殖、迁移规律.方法:采用鸡胚开窗带壳培养的方式,在培养过程巾,分别在胚胎发育的第E4天至E18.5 d滴加1 mg/ml浓度的BrdU各10μl,每组5个胚胎,滴加BrdU后密封开口,继续培养,当培养到胚胎发育的E18.5 d时,取材、甲醛固定、震荡切片,采用硫堇染色,观察视顶盖层的结构,免疫组织化学显示BrdU标记的新生细胞；显微拍照,分析不同时期表面灰质纤维层增殖细胞的数量、总面积、灰度平均值、平均光密度和平均积分光密度等参数,综合分析各阶段新生神经元的差异.结果:鸡胚视顶结构通过硫堇染色可以明显分成6层,在胚胎发育的E4 d～8 d是细胞大量增殖阶段,新生细胞数明显高于其他阶段；新生细胞在胚胎发育的E12 d后明显减少.结论:鸡胚发育过程中,视顶从胚胎发育的E4 d开始到E12 d时,6层结构已经基本形成,新生神经元E12 d后明显减少,其视顶盖6层结构的形成规律是从内向外.
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卡尔曼综合征的临诊应对
卡尔曼综合征(Kallmann syndrome,KS)是一种罕见的疾病,典型的临床表现为青春期缺失、不能生育及嗅觉受损(嗅觉缺失或嗅觉减退).本文通过对1例临床诊断的KS患者的临床特点进行分析,并对该病发病机制、分子遗传学特点、临床表现、诊断及治疗等进行文献复习.
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三氧化二砷对大鼠皮质神经元迁移的影响及其机制
目的 通过构建大鼠乳鼠神经元原代细胞培养模型,探讨三氧化二砷(As2O3)对神经元迁移的影响及其机制.方法 取SD大鼠新生乳鼠脑组织进行皮质神经元原代培养,建立细胞培养模型.实验分为4组:正常对照组、1 μmol/L As2O3组、10 μmol/L As2O3组和20 μmol/L As2O3组.加入不同浓度As2 O3培养24 h,采用Boyden趋化小室检测各组神经元的迁移情况,免疫荧光激光共聚焦显微镜观察肌动蛋白的结构.结果 正常对照组神经元分布规律;1 μmol/L As2O3组、10 μmoL/L As2O3组和20 μmol/L As2O3组神经元生长稀疏,杂乱分布,其中20 μmol/L As2O3组为明显.正常对照组、1μmol/L As2O3组、10 μmol/L As2O3组和20 μmol/L AS2O3组神经元在相同单位时间内迁移的平均细胞数分别为64.6±4.3、63.0±7.0、54.8 ±3.6、21.6±3.9.组间比较差异有统计学意义(F =49.31,P＜0.01).共聚焦显微镜下观察到正常对照组和1 μmol/L As2O3组神经元内的肌动蛋白呈纤维状条带分布,10 μmol/L As2O3组和20 μmol/L As2O3组神经元肌动蛋白断裂、散在分布.结论 As2O3可以干扰神经元的迁移,与As2O3的浓度有关,肌动蛋白的结构破坏可能是其潜在机制.
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言语相关基因FOXP2研究进展
目的 综述FOXP2基因近几年来的研究现状和有待于解决的问题.方法 参阅国内外相关文献对FOXP2基因的发现、在不同物种之间的进化、结构和功能做以综述.结果 FOXP2的突变使其编码产物丧失了作为一种调控因子诱导大脑神经元迁移后分化的重要功能,影响了个体言语能力的发展.结论 FOXP2基因是目前发现的第一个与语言有关的基因,该基因是人类进化过程中的选择性标记之一,与语言功能密切有关.
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Slit：一种新的神经生长导向因子
神经纤维生长和神经细胞迁移的靶位导向是神经发育和再生研究的基本问题之一。轴突和神经元朝靶部位的定向移动是在神经生长导向因子的协同作用下完成的。Slit是近发现的第一种对轴突生长和神经元迁移都有导向作用的因子。它对神经生长的导向作用是神经发育和再生研究领域的重大突破。已经证明，Slit还能促进背根神经节轴突的延伸和分枝，抑制白细胞的化学趋向性运动。
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Slit2／Robo4信号通路在神经元迁移中的活力与凋亡影响
目的：探讨Slit2／Robo4信号通路在神经元迁移中的活力与凋亡影响，为阐明脑缺血后神经血管新生的机制提供理论和实验依据。方法选择成年雄性远交群（SD ）大鼠，建立缺血性脑卒中动物模型，采用Western blot方法测定梗死侧与非梗死侧Slit2和Robo4的表达。取原代培养10～14 d的神经元种六孔板，分为加药组H2 O2（100μmol／L ）、对照组、H2 O2（100μmol／L ）＋Slit2（3μg／mL ）组，行M T T方法检测细胞活力与双染流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 Western blot结果显示，梗死侧Slit2和Robo4表达均较非梗死侧明显升高，差异有统计学意义（P＜0．05）。100μmol／L H2 O2处理原代培养神经元24 h会导致Slit2和Robo4表达升高（P＜0．05）。M T T结果示，H2 O2、H2 O2＋Slit2组细胞活力都有明显下降，其中，H2 O2＋ Slit2组的细胞存活率明显高于单纯H2O2组（P＜0．05）。流式细胞学显示，H2O2＋Slit2组的细胞凋亡率明显低于 H2O2组，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论缺血性脑卒中有内源性Slit2／Robo4信号通路的激活，而外源性Slit2可以促进氧化应激时神经元的存活能力，抑制其凋亡作用，从而起到神经保护作用。
关键词： Slit2/Robo4信号通路 缺血性脑卒中 神经元迁移
