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miR-130b促进小鼠胚胎发育过程中大脑皮质神经元的迁移
目的 通过胚胎在体电转染技术,在胚胎小鼠大脑皮质神经元中过表达miR-130b,探讨其对神经元迁移的影响.方法 利用miR-130b过表达载体,在昆明小鼠E15.5胚胎大脑中电转染,并于E17.5处死母鼠,取胚胎进行冰冻切片,于荧光显微镜下观察阳性神经元的迁移情况.结果 过表达miR-130b的小鼠胚胎,大脑皮质神经元的迁移速率上升,终迁移到达MZ层的神经元占总阳性神经元的75.1％,远高于对照组的22.1％;且停留在VZ/SVZ层的神经元(7.9％)远低于对照组(69.3％).结论 miR-130b在神经发育过程中能够促进神经元的迁移.在未来的研究中需要进一步探索其深层机制.
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miR-130b通过调控PTEN在人视网膜母细胞瘤发挥促癌作用
目的 探讨miR-130b在人视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中的作用,并阐明其分子机制c设计实验研究.研究对象人RB癌组织及细胞系.方法 采用荧光定量PCR检测40例RB患者癌组织及相应癌旁组织中miR-130b的表达情况.采用噻唑蓝比色法(MTT)和蛋白印迹法检测miR-130b对RB细胞增殖及凋亡能力的影响.通过生物信息学分析预测miR-130b的靶基因,并利用双荧光素酶报告基因实验和蛋白印迹验证.主要指标细胞生存率、细胞凋亡率及荧光素酶活性.结果 miR-130b在人RB癌组织的表达量明显高于配对的癌旁组织(P=0.023);miR-130b在HXO-Rb44(P=0.008)和Y79(P=0.012)细胞系中的表达量亦高于正常视网膜血管内皮细胞(ACBRI-181).体外功能实验发现,转染miR-130b抑制物可显著抑制HXO-Rb44(P=0.004)和Y79(P=0.001)细胞的增殖,并增加HXO-Rb44(P=0.011)和Y79(P=0.027)细胞凋亡.生物信息学分析发现“与张力蛋白同源10号染色体缺失的磷酸酶”(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10,PTEN)是miR-130b的靶基因.双荧光素酶报告基因试验和蛋白印迹结果显示,miR-130b可直接与PTEN mNRA 3’-非编码区结合,并抑制其翻译,并终降低HXO-Rb44(P=0.038)和Y79(P=0.025)细胞中PTEN蛋白表达水平.结论 miR-130b在RB组织表达上调,miR-130b通过下调PTEN的表达可促进RB细胞的增殖并减少其凋亡,提示miR-130b可作为RB基因治疗的一个新的分子靶点.
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OVCAR细胞转染miR-130b下调多梳基因-1蛋白表达增加对卡铂敏感性
目的 观察miR-130b对卡铂抗卵巢癌的增敏作用,探讨其相关的作用机制.方法 OVCAR细胞Lipofectiamine 2000转染miR-130b模拟物和无miR-130b基因功能的miR-130b阴性对照,荧光定量PCR检测转染效果.转染细胞给予对倍稀释卡铂100,50,25,12.5,6.25,3.12,1.56和0.78 μmol·L-1处理68 h.MTT法检测OVCAR细胞存活;Western印迹法检测多梳基因-1(Bmi-1)蛋白表达.结果 荧光定量PCR结果显示,正常对照组、miR-130b模拟物转染组和阴性对照组miR-130b表达的相对值分别为0.22±0.08,0.46±0.12和0.23±0.10,miR-130b模拟物转染组显著高于正常对照组和阴性对照组(P<0.01),正常对照组和阴性对照组之间无统计学差异.卡铂对正常对照组、miR-130b模拟物转染组和阴性对照组卵巢癌OVCAR细胞的IC50值分别为32.4±4.6,14.7±2.1和(31.4±4.2)μmol·L-1,miR-130b模拟物转染组IC50值显著低于正常对照组和阴性对照组(P<0.01).正常对照组、miR-130b模拟物转染组和阴性对照组细胞多梳基因-1蛋白的相对表达量分别为0.75±0.16,0.21±0.12和0.77±0.18,miR-130b模拟物转染组显著降低(P<0.01).结论 OVCAR细胞转染miR-130b可以显著增加卡铂对其敏感性,下调多梳基因-1蛋白表达可能是miR-130b增敏的作用机制之一.
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miR-130b对胃癌细胞BGC823迁移和侵袭能力的影响
目的 探讨microRNA-130b(miR-130b)对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响及作用机制.方法 体外培养BGC-823胃癌细胞,通过Lipofectamine?2000试剂盒将培养基、miR-130b错义链、miR-130b抑制剂,分别转染进入正常组、对照组、抑制组肿瘤细胞株中.应用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐实验法(MTT)检测转染后胃癌细胞存活率增殖能力变化,划痕实验(wound-healing assay)和侵袭实验(Transwell invasion chamber assay)检测肿瘤细胞迁移、侵袭能力变化,western blot实验检测肿瘤细胞迁移、侵袭相关蛋白分子(Slug、matrix metalloproteinase-9(MMP-9))表达变化情况.结果BGC-823胃癌细胞转染后,与正常组和对照组比较,抑制组细胞增殖能力、迁移和侵袭能力均明显降低(P<0.01).同时,抑制组细胞迁移、侵袭能力相关蛋白表达水平较正常组和对照组降低(P<0.05).结论靶向抑制miR-130b可以降低BGC-823胃癌细胞的增值、迁移和侵袭能力.
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microRNA-130b促进三阴性乳腺癌细胞及其作用机制
目的：探讨microRNA-130b（miR-130b）的表达差异对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer, TNBC) MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及机制。方法：通过LipofectamineTM 2000将miR-130b抑制剂或模拟物及阴性对照转染到MDA-MB-231细胞中。应用实时定量聚合酶链反应(quantitative real time-polymerase chain re-action，qRT-PCR)检测miR-130b表达和转染效率。应用MTT实验、克隆形成实验、划痕实验以及transwell实验，检测miR-130b模拟物或抑制剂对MDA-MB-231细胞功能影响。应用生物信息学网站寻找miR-130b可能的靶基因。应用双荧光素酶载体实验验证预测的靶基因，并通过qRT-PCR以及Western印迹实验进一步证实。结果：MDA-MB-231细胞转染miR-130b抑制剂或模拟物。与阴性对照组相比，模拟物组miR-130b的表达显著升高，抑制剂组miR-130b的表达显著下降，差异有统计学意义（P<0.01）。与阴性对照组相比，模拟物组细胞增殖（P<0.05）、克隆形成（P<0.05）、侵袭（P<0.01）及迁移（划痕试验P<0.05，transwell试验P<0.05）能力明显增高。相反，抑制剂组细胞增殖（P<0.05）、克隆形成（P<0.05）、侵袭及迁移（划痕试验P<0.05，transwell试验P<0.01）能力较阴性对照组明显受抑制。生物信息学技术预测 CYLD 为 miR-130b 的潜在靶基因。双荧光素酶载体实验结果显示转染 miR-130b 模拟物＋psciCHECK2-CYLD 3′UTR（野生型）后荧光素酶活性较转染阴性对照＋psciCHECK2-CYLD 3′UTR（野生型）降低57.21%（P<0.001）。此外，与阴性对照组相比，CYLD基因mRNA水平在抑制剂组或模拟物组均无明显改变(P>0.05）；但CYLD蛋白表达在抑制剂组明显上调，模拟物组的表达明显下降（P<0.001）。结论：miR-130b可促进TNBC MDA-MB-231细胞的增殖、侵袭及迁移，其作用至少部分通过抑制CYLD基因实现。
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miR-10b、miR-18b及miR-130b在肺癌中的表达研究
目的 探讨miR-10b、miR-18b及miR-130b在肺癌中的表达特征及其在肺癌发生发展过程中的作用.方法 收集47例肺癌住院患者的癌组织和癌旁组织,利用Trizol提取总RNA,实时荧光定量PCR检测基因相对表达量.结果 肺癌组织与癌旁组织中miR-10b(t=2.83,P＜0.05)、miR-18b(t=2.88,P＜0.05)及miR-130b(t =2.46,P＜0.05)表达量均差异存在显著性.比较鳞癌、腺癌和癌旁组织中miR-10b(F =7.16,P＜0.05)、miR-18b(F =4.11,P＜0.05)及miR-130b(F =3.43,P＜0.05)的表达量也有显著性.癌组织中miR-10b与pri-miR-10b表达量存在负相关关系(r=-0.50,P＜0.05) . 癌组织与临床指标之间的关系中miR-18b、miR-130b与KI67呈正相关(P＜0.05),pri-miR-10b与TOPOⅡ、pri-miR-130b与MRP呈负相关(P＜0.05).结论 miR-10b、miR-18b及miR-130b在癌组织中表达量上调,可能具有促进肺癌发生发展的作用.
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骨肉瘤组织中miR-494、miR-130b下游靶基因的探究
目的 :研究骨肉瘤组织中miR-494、miR-130b的表达量并探究下游靶基因.方法 :收集在延安大学附属医院手术切除的骨肉瘤组织,另取同期关节置换术后的正常骨组织作为对照;抽提miRNA后测定miR-494、miR-130b的表达量,抽提RNA后测定增殖基因 、侵袭基因的mRNA表达量,抽提蛋白后测定血管新生分子的蛋白含量.结果 :骨肉瘤组织中miR-494、Runx3、ELL2、p16、RECK、TIMP1的表达量以及TSSC3的蛋白含量显著低于正常骨组织,miR-130b、β-catenin、CyclinD1、Sox9、AD-AM TS18、CatD、STMN1的表达量以及CEACAM6、VEGF、Ang-2的蛋白含量显著高于正常骨组织;骨肉瘤组织中miR-494与Runx3、ELL2、p16、RECK、TIMP1、TSSC3呈正相关,与 β-catenin、Cy-clinD1、Sox9、ADAM TS18、CatD、STM N1、CEACAM6、VEGF、Ang-2呈负相关,miR-130b与Runx3、ELL2、p16、RECK、TIMP1、TSSC3呈负相关,与 β-catenin、CyclinD1、Sox9、ADAM TS18、CatD、ST-MN1、CEACAM6、VEGF、Ang-2呈正相关.结论 :骨肉瘤组织中miR-494的低表达以及miR-130b的高表达能够调控增殖 、侵袭基因的表达及血管新生分子的生成.
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miR-130a/b与肿瘤关系的研究进展
目的:总结国内外miR-130a和miR-130b在肿瘤学领域研究的现状.方法:应用PubMed和中国知网数据库检索系统,以“microRNA、miR-130a、miR-130b和肿瘤”等为关键词,联合检索1993-01-2013-12的相关文献.纳入标准:1)microRNA在肿瘤研究中的新进展;2)miR-130a;3)miR-130b;4)肿瘤.根据纳入标准,符合分析的文献47篇.结果:miR-130a和miR-130b是高度同源的microRNA,通过干扰靶mRNA转录或降解靶基因来调控基因表达,它们在不同的肿瘤中差异表达,并在多种肿瘤细胞的增殖、凋亡、转移和肿瘤耐药方面发挥着重要作用.结论:miR-130a/b在肿瘤发生发展中发挥促癌或抑癌的作用,其在肿瘤耐药方面的研究可以为多重耐药的患者提供新的视角.
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miR-130b在肝细胞癌中的表达及临床病理意义
目的 探讨miR-130b在人肝细胞癌(HCC)中的表达、与临床病理特征的关系及可能机制.方法 用实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-130b在86例HCC及癌旁组织、不同肝癌细胞系的表达;免疫组织化学染色检测miR-130b不同表达水平的HCC组织中上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达情况;qRT-PCR检测miR-130b在L02人正常永生化肝细胞及HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Hu7肝癌细胞系的表达水平;应用人工合成的miR-130b抑制物转染SMMC-7721细胞,TranswellTM实验检测SMMC-7721细胞侵袭能力变化;应用人工合成的miR-130b抑制物及PPARγ小干扰RNA(siRNA)转染SMMC-7721人肝癌细胞,qRT-PCR检测癌细胞中miR-130b、PPARγ、E-cadherin、vimentin的mRNA水平,Western blot法检测癌细胞中PPARγ、 E-cadherin、vimentin的蛋白水平.结果 miR-130b在HCC组织中表达水平显著高于对应癌旁组织;肝癌组织中miR-130b异常表达与门静脉侵犯、原发肿瘤分级、肿瘤TNM分期显著相关;miR-130b在不同肝癌细胞系中表达均高于L02细胞;miR-130b高表达组PPARγ及E-cadherin蛋白水平显著低于miR-130低表达组,而vimentin水平显著高于miR-130b低表达组,相关性分析结果显示肝癌组织中miR-130b与PPARγ蛋白、E-cadherin蛋白水平呈显著负相关,与vimentin蛋白水平呈显著正相关;抑制miR-130b水平,可上调PPARγ蛋白的水平,E-cadherin蛋白的表达显著增加,而vimentin蛋白表达显著降低,SMMC-7721细胞的侵袭能力降低.PPARγ siRNA可部分逆转miR-130b抑制物对SMMC-7721细胞的作用.结论 miR-130b在HCC组织中表达上调并与HCC恶性临床病理特征有关,miR-130b可能通过抑制PPARγ表达及诱导上皮间质转化促进肝癌细胞侵袭.
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MiR-130b调控巨噬细胞极化的分子机制研究
目的:研究miR-130b对巨噬细胞极化的调控作用及机制.方法:选用人白血病单核THP-1细胞,通过PMA使其诱导为Mφ巨噬细胞,然后加入LPS诱导为M1或加入IL-4诱导为M2巨噬细胞;流式细胞仪检测标记物比例;应用Real-time PCR和Western blot方法检测特异性标志物和目的蛋白的mRNA和蛋白表达水平;ELISA法检测特异性分泌因子的表达水平.结果:与Mφ巨噬细胞比较,LPS诱导的巨噬细胞中CD86高表达,TNF α和IL-1β表达和分泌水平均增多,符合M1巨噬细胞特征;IL-4诱导的巨噬细胞中CD206的阳性表达率升高,CCL22、CCL17表达和分泌水平均增多,符合M2巨噬细胞特征;M1细胞中miR-130b表达明显高于M2细胞(P＜0.05);miR-130b过表达后的M2细胞中,CCL22 mRNA和蛋白表达减少,IL-1β mRNA和蛋白表达增多,PPAR-γ的蛋白表达降低.结论:MiR-130b可能通过靶向抑制PPAR-γ表达调节巨噬细胞极化.
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miR-130b在人视网膜母细胞瘤中的表达及促癌机制研究
目的:检测miR-130b在人视网膜母细胞瘤(RB)中的表达并初步探究其促癌机制.方法:采用qRT-PCR检测miR-130b在人RB癌组织及癌旁组织、人RB细胞系(HXO-Rb44与Y79)中的表达;采用qRT-PCR、Western Blot及免疫荧光实验检测miR-130b过表达及干扰前后HXO-Rb44与Y79细胞中PTEN的表达水平;采用双荧光素酶报告基因试验验证miR-130b与PTEN的靶向关系;采用共转染实验考察PTEN与miR-130b影响RB细胞系PI3K/Akt信号通路表达的关系.结果:miR-130b在RB癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05).与ACBRI-181细胞比较,miR-130b在HXO-Rb44与Y79细胞中的表达水平显著增高(P<0.05).与RB癌组织比较,PTEN在其癌旁组织中的表达水平显著增高(P<0.05);miR-130b表达水平与PTEN表达水平呈负相关性(P<0.001).过表达miR-130b后的HXO-Rb44细胞PTEN mRNA与蛋白表达水平均显著降低,而干扰miR-130b后的Y79细胞PTEN mRNA与蛋白表达水平均显著升高(P<0.05).与miR-130b mimics+PTEN-NC组比较,miR-130b mimics+wt-PTEN组荧光素酶活性明显降低(P<0.05).共转染miR-130b mimics+PTEN-NC HXO-Rb44细胞p-Akt 308与p-Akt 473蛋白表达水平显著增高(P<0.05),PTEN蛋白表达水平显著降低(P<0.05);共转染miR-130b mimics+PTEN HXO-Rb44细胞中,以上三种蛋白表达水平均未发生明显改变.结论:miR-130b在RB组织及细胞系中呈高水平表达,PTEN为miR-130b的靶基因,miR-130b可能是经负向调控PTEN对PI3K/Akt信号通路的表达产生影响,终发挥促癌作用.
关键词： 人视网膜母细胞瘤 miR-130b PTEN PI3K/Akt信号通路
