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参莲提取物对M1巨噬细胞的影响
该实验探讨参莲提取物对动脉粥样硬化发展中的M1巨噬细胞的影响.MTT法检测参莲提取物对RAW264.7细胞的毒性作用;γ干扰素(IFN-γ)及脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞成M1型巨噬细胞,然后加入高、中、低剂量的参莲提取物(50,25,12.5 mg·L-1)作用,流式细胞术检测M1巨噬细胞膜分子CD86的表达,RT-PCR法检测M1巨噬细胞中iNOS和TNF-α mRNA的水平,ELISA法检测M1巨噬细胞上清中IL-6和TNF-α的含量.结果发现IFN-γ及LPS能诱导RAW264.7细胞极化为M1型巨噬细胞,M1巨噬细胞膜分子CD86的表达、细胞中iNOS和TNF-α mRNA的表达以及细胞分泌的IL-6和TNF-α的含量均有显著性地提高;参莲提取物各剂量均可抑制M1型巨噬细胞膜分子CD86、细胞中iNOS及TNF-α mRNA的表达,降低细胞分泌炎症细胞因子IL-6及TNF-α的含量.通过以上研究表明IFN-γ及LPS能诱导RAW264.7细胞极化为M1型巨噬细胞;参莲提取物对M1型巨噬细胞有一定的抑制作用.
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不同方法诱导THP?1细胞分化效果比较
目的 优化不同方法刺激THP?1细胞定向分化为M1、M2巨噬细胞及DC细胞,为M1、M2和DC三种体外细胞模型研究奠定基础.方法 首先用PMA和GM?CSF/M?CSF两种方法刺激诱导THP?1细胞分化,再分别添加不同细胞因子诱导其分化为M1、M2和DC细胞,观察细胞形态的变化,并用流式细胞术检测细胞表面分子的表达情况.结果 两种方法刺激细胞CD分子表达的整体趋势基本一致.THP?1?M1细胞表面CD80和CD86表达量显著增加;THP?1?M2细胞高表达CD163和CD209;THP?1?DC细胞CD14表达量显著降低,高表达CD80、CD86和CD11c.PMA刺激后,M1、M2和DC细胞均贴壁生长;GM?CSF/M?CSF刺激后,只有DC细胞部分贴壁生长,M1和M2细胞仍呈悬浮生长.结论 两种方法均能成功地诱导THP?1细胞向不同细胞亚型分化,但是诱导出来的细胞在形态上存在一定差异,可根据实验需求选择刺激方法.
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猪苓多糖诱导M2亚型巨噬细胞向M1巨噬细胞转化
目的：：研究猪苓多糖对IL-4诱导的M2亚型巨噬细胞膜表面分子的阳性表达率的影响和相关炎症因子的作用。方法：实验分为5组：空白对照组，模型组，猪苓多糖低、中、高剂量组(50、100、200μg／ml）。用20 ng／ml的IL4-诱导为M2亚型巨噬细胞，采用流式细胞术检测CD206、CD16／32阳性表达率，实时荧光定量PCR( qRT-PCR）检测相关因子mRNA表达量，造模成功后予猪苓多糖干预M2亚型巨噬细胞，检测猪苓多糖对巨噬细胞膜分子的影响和相关因子的mRNA的影响。结果：IL-4可以稳定建立M2亚型巨噬细胞模型，猪苓多糖可以明显提高CD16／32、CD40的阳性表达率，并显著增加相关炎症因子的表达率。结论：猪苓多糖可以逆转M2亚型巨噬细胞为M1巨噬细胞，提高巨噬细胞的免疫功能。
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人羊膜上皮细胞对脂多糖刺激下的RAW264.7细胞向M1极化的预防作用及其初步作用机制
目的:本实验探讨人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,hAECs)预防RAW264.7细胞在脂多糖(LPS)刺激后向M1极化的作用以及可能机制.方法:采用流式细胞仪检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,ELISA检测细胞释放NO浓度,Real-time PCR检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、精氨酸酶1(arginase-1,Agr-1)及甘露糖受体(mannose receptor,MR又称CD206)等基因表达情况,Western blotting检测RAW264.7胞质蛋白p-IκBα以及胞核蛋白NF-κB的表达.结果:RAW264.7培养基组与hAECs条件培养基干预组的凋亡率分别为5.68％±2.3％、6.68％±2.1％(p＞0.05).LPS刺激组与hAECs条件培养基干预组两组的迁移率分别为42.03±0.07％、14.71±0.04％ (p＜0.05);LPS刺激组与hAECs干预组两组NO释放量分别为27.73± 10 μM、13.33±6.43 μM(p＜0.05);Real Time-PCR结果显示,hAECs干预组M1型巨噬细胞相关基因如IL-1β、TNF-α、iNOS以及rNF-β的表达显著下调,M2型巨噬细胞相关基因如Arg-1、CD206、CD36等表达上调(p＜0.01).Western blotting结果显示,hAECs干预组RAW264.7中胞质蛋白p-IκBa以及胞核蛋白NF-κB的蛋白含量降低.结论:hAECs与RAW264.7预培养能有效预防LPS刺激下RAW264.7向M1极化,其机制可能是通过抑制IκBα蛋白磷酸化来降低核内NF-κB的含量,从而抑制了M1型相关基因的表达.
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巨噬细胞表型转换及其在肾缺血再灌注损伤中作用的研究进展
肾移植术是治疗肾功能衰竭的重要方法,但移植后肾缺血再灌注损伤(RIRI)的发生又不可避免.研究发现,巨噬细胞与RIRI密切相关,在RIRI进程的炎症反应中发挥着重要作用.巨噬细胞极具可塑性和异质性,可极化为M1、M2两类亚型,分泌或促进多种细胞因子的生成以响应不同微环境的刺激.巨噬细胞及其表型转换在RIRI过程中发挥损伤与修复的双重作用,通过促进炎症反应、修复、纤维化等机制参与RIRI.
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MiR-130b调控巨噬细胞极化的分子机制研究
目的:研究miR-130b对巨噬细胞极化的调控作用及机制.方法:选用人白血病单核THP-1细胞,通过PMA使其诱导为Mφ巨噬细胞,然后加入LPS诱导为M1或加入IL-4诱导为M2巨噬细胞;流式细胞仪检测标记物比例;应用Real-time PCR和Western blot方法检测特异性标志物和目的蛋白的mRNA和蛋白表达水平;ELISA法检测特异性分泌因子的表达水平.结果:与Mφ巨噬细胞比较,LPS诱导的巨噬细胞中CD86高表达,TNF α和IL-1β表达和分泌水平均增多,符合M1巨噬细胞特征;IL-4诱导的巨噬细胞中CD206的阳性表达率升高,CCL22、CCL17表达和分泌水平均增多,符合M2巨噬细胞特征;M1细胞中miR-130b表达明显高于M2细胞(P＜0.05);miR-130b过表达后的M2细胞中,CCL22 mRNA和蛋白表达减少,IL-1β mRNA和蛋白表达增多,PPAR-γ的蛋白表达降低.结论:MiR-130b可能通过靶向抑制PPAR-γ表达调节巨噬细胞极化.
