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灵芝孢子在降低维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对Cdk4表达的影响
目的 探讨灵芝孢子在降低维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对依赖细胞周期蛋白激酶4(CDk4)表达的影响.方法 给予实验对照组和灵芝孢子组妊娠E7.75d的小鼠一次性胃饲维甲酸,造成这2组孕鼠的胚胎出现神经管畸形.然后,给予灵芝孢子组孕鼠胃饲灵芝孢子溶液.在孕期E10.5d时取出2组孕鼠的胚胎,应用免疫荧光组织化学染色和Western blotting检测胚胎神经管神经上皮依赖细胞周期蛋白激酶4(Cdk4)的表达情况.结果 在灵芝孢子组可以观察到形态正常的胚胎中,神经管的神经上皮细胞有Cdk4的表达,其表达水平与空白对照组及正常对照组相比较没有明显差异.在灵芝孢子组形态异常的胚胎中,其神经管的神经上皮细胞也有cdk4的表达,但其表达水平与空白对照组及正常对照组相比较是低的.结论 灵芝孢子可能是通过促进神经管神经上皮细胞上调Cdk4的表达来减轻维甲酸诱导的胚胎小鼠神经管畸形.
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小鼠胚胎食管和肠上皮的体视学研究
目的研究消化管上皮发生的影响因素. 方法用体视学法观测了11～17d ICR胎鼠连续切片中食管、十二指肠和结肠的管腔与上皮.部分切片用TUNEL法标记细胞凋亡作对照. 结果 (1)3段消化管的管腔面积与上皮面积比值均随胎龄增加而增高;上皮的凋亡小体密度(DAB)峰值均在分裂细胞密度(DMC)峰值之后;上皮细胞密度与DMC和DAB间未见一致的相关性;(2)食管的DAB峰值高于肠.食管上皮中凋亡小体分布于上皮各层,而肠上皮中主要在上皮游离面. 结论 (1)3段的管腔面积增长均快于上皮面积的增长.上皮大量增殖后凋亡,以适应其形态发生;(2)食管和肠扩大管腔的方式不同,而两者上皮中凋亡小体分布的不同可能与上皮隆起的形成有关;(3)胚胎消化管上皮细胞密度对上皮细胞分裂和凋亡的影响不明显.
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胚胎小鼠听皮层区域神经干细胞的分离培养及鉴定
目的 通过剖腹手术从C57BL/6胎鼠(El4左右)中获得听皮层区域组织,进行神经干细胞体外培养和分化鉴定,探索新的自体NSC移植治疗来源.方法 选取孕14天左右的C57BL/6小鼠,剖腹取出胎鼠,分离听皮层区域组织,在体外无血清培养得到NSC,用免疫荧光细胞染色法进行NSC特异性标记物(Nestin)、增殖能力(BrdU)及多向分化潜能的鉴定.结果 听皮层区域组织在体外通过无血清培养能够得到大量细胞球,经Nestin及Brdu鉴定为NSC球且具有较高增殖能力.NSC球在体外分化后产生β微管蛋白(β-TubulinⅢ)阳性的神经元以及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性的星形胶质细胞.结论 胎鼠听皮层区域在体外无血清培养可获得大量具有增殖能力和多向分化潜能NSCs,是自体NSCs移植治疗新的种子来源.
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E16.5d胚胎小鼠皮肤细胞作为毛囊重建模型种子细胞的可行性研究
目的 研究胚胎小鼠皮肤及其毛囊的发育规律,探讨胚胎小鼠的皮肤细胞作为毛囊重建模型种子细胞的可行性.方法 对80只胎龄14.5-18.5 d小鼠及新出生的小鼠皮肤进行连续石蜡切片,连续切片进行HE染色,观察其组织学结构并了解其附件形成情况.免疫荧光染色观察胚胎表皮特异性蛋白细胞角蛋白8(cytokeratin 8,CK8)和18(CK18)在胚胎小鼠皮肤表达.结果 胎龄14.5 d(embryonic day 14.5,E14.5 d)的胚胎小鼠,表皮层形成表皮细胞仅为1-2层;E16.5 d的胎鼠背部皮肤较薄,表面凹凸不平并形成褶皱,未见毛囊形成;E18.5 d胎鼠毛囊发育达到旺盛的时期,毛囊数量明显增加;新出生的小鼠皮肤附件基本发育成熟.E16.5 d小鼠皮肤中表皮干细胞标记物CK8和CK18为阳性.结论 16.5 d胚胎小鼠(E16.5)的皮肤细胞可以作为毛囊重建模型的种子细胞.
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胚胎小鼠肾脏发育中神经型一氧化氮合酶的定量分析
目的:探讨神经型一氧化氮合酶在胚胎小鼠妊娠不同时期肾脏发育中的意义.方法:选用成年健康昆明小白鼠,按雌雄比例3:1同窝饲养,采用检查阴道栓脱落的方法确定雌鼠受孕时间.选取胚龄12天(ED12)、14天(ED14)、16天(ED16)、18天(ED18)的胎鼠及出生时(PD0)仔鼠,分5组,每组各6只母鼠,每只母鼠取2只胎鼠或仔鼠,剖腹取肾脏,用免疫印迹技术(Westermblot)及光密度分析系统分别对各组胎鼠或仔鼠肾脏内nNOS进行定量检测.结果:Western blot及光密度分析显示,ED14组肾脏nNOS含量少,随后逐渐增多,PD0组肾脏nNOS含量多.结论:胚胎小鼠肾脏nNOS在胚胎第14天开始呈阳性表达,以后含量逐渐升高,出生时含量高,表明nNOS在胚胎小鼠肾脏发育的早期阶段起重要作用.
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小鼠胚胎肠神经嵴干细胞的分离培养及鉴定
目的 建立分离培养及鉴定小鼠肠神经嵴干细胞(gut neural crest stem cells,GNCSCs)的方法,为临床应用奠定基础.方法 分离胚鼠肠管,消化后接种于添加N2、B27和碱性成纤维细胞生长因子的DMEM/F12培养基,贴壁培养;连续传代后用血清促进GNCSCs分化;后用免疫细胞化学方法染色鉴定.结果 分离培养的细胞聚集生长,形成的克隆球可以传代;克隆球p75染色阳性;分化后的细胞分别表达肠神经元、神经胶质细胞和平滑肌细胞特异性抗原.结论 分离培养的克隆球具有自我更新和多向分化的能力,表达肠神经嵴干细胞的特异性抗原p75,是肠神经嵴干细胞.
