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脑缺血早期谷氨酰胺合成酶时程变化的免疫组织化学研究
谷氨酰胺合成酶是谷氨酸的降解酶,在神经系统主要存在于星形胶质细胞内.为了探讨星形胶质细胞在脑缺血早期的保护作用,本研究用雄性SD大鼠35只,体重230~270g,利用圆柱型尼龙线栓塞一侧大脑中动脉制备可再灌脑缺血模型,用免疫组织化学ABC法观察了脑缺血后15min至24h之间不同时间点缺血区谷氨酰胺合成酶(GS)的变化情况.
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细胞外基质与肝脏肿瘤
0 引言近年来,随着对细胞外基质(extracelular matrix,ECM)研究的不断深入,对其功能也有了进一步的了解.目前认为细胞外基质不只是对细胞和组织起支架或骨架作用,而且对生理或病理状态下细胞的分化、增殖及基因表达均有非常重要的作用.在肝脏发生肿瘤时,细胞外基质及其降解酶基质金属蛋白酶(mamx metalloprotemases,MMPs)对肿瘤的发展、转移等有非常重要的影响.
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基质金属蛋白酶2、9及其抑制剂1在肺癌侵袭转移中的作用
基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)是一组重要的细胞外基质(extracelluar matrix, ECM)降解酶.肿瘤细胞可通过MMPs对ECM的降解促进其对周围组织的侵袭破坏,特别是MMP-9、MMP-2被认为是肿瘤侵袭转移的标志物之一[1,2].本研究通过检测肺癌患者外周血白细胞中MMP-9、金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)的mRNA和血浆中MMP-2、MMP-9的蛋白水平,探讨MMP-9与肺癌侵袭转移的关系及肺癌患者外周血白细胞MMP-9 mRNA表达水平与血浆中MMP-9蛋白水平的相关性.
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内皮素在冠状动脉搭桥术期间的变化及意义
内皮素(endothelin,ET)具有强大的收缩血管和促血管平滑肌细胞增殖的作用。ET在心、脑、肺、肾和血管疾病的发病机制中都有重要意义。ET概况〔1,2〕 ET由21个氨基酸组成,分子量约2?600左右。包括三种异形肽—ET-1、ET-2、ET-3。它们在分子结构、分布、功能上均有一定的差别。ET-1主要在内皮细胞中表达,ET-2主要在肾脏表达,ET-3的表达以神经系统居多;缩血管强度依次为ET-1≥ET-2>ET-3。ET 在血浆中浓度很低,在体内容易降解(半衰期不到7?min),ET主要在肺脏、肾脏和血管组织中进行降解,其中血液循环中的ET也可被多种内皮素降解酶(endothelin degeneration enzyme,EDE)降解,并经肾排泄。ET与靶细胞膜上的ET受体结合发挥其
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基质金属蛋白酶2、9与新生儿肺损伤
无论何种原因所致的肺损伤,若修复不当,终均能导致成纤维细胞增生,细胞外基质(ECM)沉积,肺组织纤维化[1]及慢性肺疾病(CLD)的发生.作为ECM的主要降解酶之一,基质金属蛋白酶(MMPs)在CLD的发生中占有重要地位.MMPs是一类含有Zn2+、活性依赖Ca2+结构的高度同源内肽酶的总称,主要功能为降解除多糖以外的全部ECM成分.它可在多种酶作用下相继激活,形成瀑布效应,具有重要的生理和病理意义.近年来研究发现,ECM降解系统尤其是MMPs及其组织抑制物(TIMPs)功能紊乱,在纤维化疾病中发挥重要作用.明胶酶-A、B(MMP-2、9)参与了正常或病理性肺ECM的重塑和胎肺的生成和发育过程.本文对MMP-2及MMP-9在新生儿肺损伤中的作用作一综述.
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中性内肽酶和阿尔茨海默病的基因联系
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是导致痴呆的常见的进行性神经退行性疾病.淀粉样肽(amvloid β peptide,Aβ)在脑中沉积形成老年斑是AD的神经病理学标志之一,Aβ产生与清除的动态平衡是决定老年斑形成的重要因素.生理情况下有多种降解酶可以降解Aβ,使其产生和清除达到平衡.其中中性内肽酶(Neprilvsin,NEP)是主要的Aβ降解酶[1],可降解单聚体和(或)寡聚体形式的Aβ[2,3].在大脑中,老年斑的增加与NEP mRNA表达水平降低有关[4].
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基质金属蛋白酶及其抑制剂与椎间盘退变、突出及吸收的关系
椎间盘退变是椎间盘突出的重要原因.退变主要表现在细胞和细胞外基质成分的变化,而后者是椎间盘力学特征丧失的直接原因.基质合成与降解的失衡将导致基质成分的紊乱,在此调节过程中基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs/matrixins)和金属蛋白酶组织抑制剂(tissueinhibitorsofmetalloproteinases,TIMPs)两个酶系统发挥着重要作用,MMPs是细胞外基质的降解酶,TIMPs则是MMPs的特异性抑制剂.
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克雷伯氏菌菌株 ZD112 的菊酯农药降解酶特性研究
采用微生物农药降解酶解决农药残留污染问题是当前环境科学研究的热点,也是一个较新的研究领域.本实验室从农药厂的污泥中筛选到1株能降解菊酯类农药的菌株Klebsiella sp.ZD112.进一步研究发现,ZD112的胞外粗酶液对氯氰菊酯无降解活性,胞内粗酶液对氯氰菊酯的降解效能较高.胞内粗酶液降解氯氰菊酯适温度为45 ℃, 适pH为6.5.以氯氰菊酯为底物,胞内粗酶液的米氏动力常数(Km)为10.25μM,大反应速率(Vmax)为114.94μM/min.
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儿茶酚胺氧位甲基转移酶基因多态性与精神分裂症的研究进展
近几年的研究发现22q11微缺失综合征中精神分裂症或分裂情感性精神病的发生率高达25%~31%,而早发性精神分裂症(《13岁)及成人精神分裂症中发生22q11微缺失比例分别为6%及0.3%~2%,明显高于一般人群的0.016%,表明22q11可能存在精神分裂症的致病基因[1].而儿茶酚胺氧位甲基转移酶(COMT)基因刚好位于这一区域,它是体内1种重要的儿茶酚胺代谢酶,广泛分布于全身各组织,尤以肝、肾等组织为多,在神经组织也有较广泛的分布,特别是前额叶皮层多巴胺(DA)神经递质的1种主要降解酶,60%以上的DA由它降解.
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生活方式不当所致的不育
经常过量饮酒.酒精可以干扰中枢神经对性兴奋激动反射的传递,使其受到抑制.酗酒后男子的血循环中,睾丸酮激素水平下降30~40%,长期饮酒还可引起肝脏内睾丸酮降解酶过于活跃,从而使睾丸酮的分解速度加快,不能被身体组织充分利用,导致生殖腺功能降低,抑制精子的生成.实验还证明:长期或大量酗酒,还可造成慢性酒精中毒,使70%左右的精子发育不良或失去活力.有的男子在酗酒后同房还可能出现阳痿或不射精.
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γ-聚谷氨酸研究进展
本文综述了γ-聚谷氨酸(PGA)的体内表达,PGA降解酶,血清浓度检测、免疫原性及在药品和化妆品领域的应用方面的新进展,为其进一步研究开发提供依据.
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Neprilysin--老年性痴呆治疗的新线索
Alzheimer's病(AD)的治疗一直是研究的热点和难点,迄今为止没有找到有效地治疗方法.大多数AD的研究者主要注意在APP裂解形成游离Aβ的酶方面,如果酶活性过强,释放过多的Aβ导致异常的Aβ在脑内沉积.然而,近来一些研究者正从不同方面解决这个问题,寻找一种肽降解酶.假如此酶活性下降也可能导致Aβ堆积,比起Aβ分泌途径,Aβ降解途径的确是一个重要发现.2001年5月25日出版的292(5521)
上发表了Nobuhisa Iwata, Jean Marx and Saido等的文章,描述了在小鼠脑中发现一种叫Neprilysin的蛋白酶--自然降解Aβ的酶直接证据,它在清除脑内Aβ过程中可能起着重要作用.在此之前Saido小组证实Neprilysin可能是一个Aβ降解酶,他们发现一个中性的内肽酶--是Aβ的降解主要限速酶.用3H/14C放射标记人型Aβ1-42注入8周的Neprilysin纯合组,杂合组和缺失组小鼠海马内,并分别同时用Neprilysin阻断剂Thiorphan对照观察,然后用HPLC、液闪分析和ELISA等分析了Aβ1-42和降解产物,发现Neprilysin基因与Aβ水平之间的剂量效应.Neprilysin有强的降解Aβ活性,为了观察小鼠降解Aβ肽的能力,敲除了小鼠的Neprilysin基因,发现降解Aβ肽的能力非常低,用正常小鼠与基因敲除小鼠交配,产生的小鼠刚好有一个Neprilysin基因拷贝,这些动物出现的结果介于二者之间.这意味着Neprilysin的活性即使是部分减少(可以随老化引起)也可以使Aβ的升高,其结果是产生AD.Saido还发现,天然Aβ水平在Neprilysin基因敲除小鼠脑中有明显的区域性,由高到低依次是海马,皮层,丘脑/纹状体和小脑,这与人类AD的Aβ在脑中沉积形成老年斑的高低高度相关联.这与Patrick McGeer的发现Neprilysin水平与导致AD的可能性是一致的,他们分析了死于AD病人脑中Neprilysin水平,发现高老年斑区Neprilysin水平低.McGeer总结说:假如你有适当的Neprilysin,你将永远不会有Aβ的聚集.尽管生物化学的证据提示:Neprilysin的缺乏可能导致Aβ,临床病例的研究要解决二个问题:一是Saido称之为首要是建立Neprilysin基因缺失,产生老年斑,终导致AD病的小鼠模型;另一个是找到人类Aβ基因相关的遗传学依据.第二个问题现在有了新的进展,Tanzi小组发现了Neprilysin与人类AD相关的遗传学依据:Neprilysin基因定位在3号染色体上,有5个编码区.Neprilysin脑Aβ水平的基因剂量效应,促使我们考虑它临床应用的可能性.用Aβ降解酶活性上调和Aβ分泌酶活性的下调(如分泌酶抑制剂)的治疗策略,这二种策略可以结合在一起达到大治疗效果.这些研究无疑将给AD的治疗提供了重要的和新的线索,以至于人类终能够驯服AD这个灾难性疾病. -
10号染色体--老年性痴呆一个新遗传位点
老年性痴呆的研究是当今神经科学活跃的热点,2000年12月22日新出版的
,登载了三篇关于10号染色体与老年性痴呆的研究文章:Bertram等采用参数和非参数连锁分析,发现了神经元和神经胶质细胞降解Aβ42的胰岛素降解酶的基因定位于10号染色体,其中的D10S1671,D10S583,D10S1710和D10S566位点与LOAD关系为密切.更进一步研究揭示胰岛素降解酶的基因定位在10q23-10q25的195个千碱基内.同时Ertekin-Taner等在患者同胞配对的LOAD,通过大家系的先证者的研究和连锁分数分析,表明D10S1125(81厘摩)处,有脑和血浆同步Aβ42升高的数量性状位点.而Myers等对患者同胞配对的LOAD,采用二步基因组扫描方法,进行了大多点连锁分析,表明靠近D10S1225(79厘摩)处是高表达的Aβ42数量性状位点.当然文章中也提到一些研究结果的矛盾之处:如在有些患者同胞配对研究不表现D10S1225表达的增加. -
基质金属蛋白酶及其抑制剂与椎间盘退变的关系
金属蛋白酶(MMPs)是细胞外基质的降解酶,近年对金属蛋白酶的研究在各个学科中越来越被重视,在椎间盘退变过程中金属蛋白酶及其抑制剂所起的作用也逐渐成为研究热点.椎间盘退变主要表现在细胞和细胞外基质成分的变化,而后者是椎间盘力学特征丧失的直接原因.基质合成与降解的失衡将导致基质成分的紊乱,在此调节过程中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs/matrixins)和金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs)两个酶系统发挥着重要作用[1].
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一种产碱假单胞菌产生的地塞米松降解酶的提取纯化和鉴定
将分离到的1株对地塞米松有降解作用的产碱假单胞菌进一步驯化.采用渗透休克法分离该菌各区域蛋白,将分离的具有高酶活性的胞内蛋白用硫酸铵盐析、离子交换层析和葡聚糖凝胶层析提取和纯化.纯化蛋白用HPLC检测其对地塞米松的降解活性,酶切后质谱鉴定.结果表明驯化后的产碱假单胞菌对地塞米松的降解率从23.63%提高到52.84%,降解地塞米松的酶主要存在于该菌胞质内,分子量约为41 kD;纯化后的酶蛋白比活力达到1.02 U·mg-1,该蛋白的5条肽段的氨基酸序列与异戊酰辅酶A脱氢酶的部分序列匹配,可能是一种新的甾体类化合物降解酶.本文为用微生物修复技术清除水环境的地塞米松污染提供了新策略.
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凋亡蛋白Omi/HtrA2和Survivin与肿瘤的研究进展
细胞凋亡是一种由基因调控的高度保守的细胞主动死亡过程,在多细胞有机体的生长发育,维持组织同源性等过程起重要作用.肿瘤的发生与凋亡过程的紊乱有着密切的关系.细胞凋亡是细胞由于降解酶的作用,降解酶主要是水解酶,如蛋白酶与核酸酶作用,在近乎正常的细胞质膜内趋向死亡,这与坏死时细胞质膜早期破坏不同[1].