开心散对Aβ25-35诱导损伤SH-N-K神经细胞的保护作用及机制

目的 观察开心散对神经毒性物质β-淀粉样肽(Aβ25-35)诱导损伤的SK-N-SH细胞的保护作用.方法 用Aβ25-35处理人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH细胞),模拟阿尔茨海默病(AD)病人脑内神经元病理损伤,并以含开心散(KXS)药物血清拮抗其作用.以MTT法测定细胞存活率,酶反应法检测细胞内超氧化物歧化酶SOD水平变化,流式细胞技术检测细胞凋亡率.逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测淀粉样肽蛋白前体(APP)基因、Aβ降解酶NEP基因的表达情况,Westernblots法检测APP蛋白表达.结果 试验显示暴露Aβ25-35后培养SK-N-SH细胞存活率明显下降,凋亡细胞比例增加.而含开心散药物血清处理能显著提高Aβ25-35损伤细胞的存活率,减少细胞凋亡率,同时提高细胞内SOD的活力(P＜0.01).RT-PCR结果显示开心散可降低Aβ代谢相关的APP基因的表达并提高NEP基因的表达,APP蛋白表达显著减少.结论 AD病理相关的Aβ25-35能造成神经元细胞损伤死亡,开心散对毒性Aβ25-35诱导的神经细胞损伤具有一定保护作用,其作用机制可能与开心散能增加抗氧化酶SOD活力,同时下调内源性APP基因表达,上调NEP基因表达,减少内源Aβ产生,从而抑制细胞死亡有关.

基于“肾脑相济”理论的电针疗法对痴呆小鼠脑内β-淀粉样蛋白及中性内肽酶表达的影响

目的:探讨基于“肾脑相济”理论的电针疗法对快速老化SAMP 8小鼠大脑颞叶皮层β-淀粉样蛋白(Aβ)含量及中性内肽酶(NEP)表达的影响,探讨电针治疗阿尔茨海默病(AD)的可能机制.方法:将8月龄雄性快速老化SAMP 8小鼠随机分为模型组、电针组、美金刚组,每组6只.使用同月龄正常老化SAMR 1小鼠6只作为对照组.电针组电针小鼠“百会”“肾俞”“太溪”穴,每次15 min,每日1次,治疗8周,美金刚组予美金刚灌胃(20 mg· kg-1 · d-1),连续8周.采用ELISA法、免疫组织化学法、Western blot法观察小鼠大脑颞叶皮层内Aβ含量和NEP的表达水平.结果:与对照组比较,模型组小鼠大脑颞叶皮层内Aβ 1-40和Aβ 1-42含量明显增高,NEP表达水平明显下降(P＜0.05);与模型组比较,电针组和美金刚组小鼠大脑颞叶皮层内Aβ 1-40和Aβ 1-42含量明显下降,NEP表达水平明显上升(P＜0.05);电针组与美金刚组各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:“肾脑相济”电针疗法对SAMP 8小鼠大脑颞叶皮层中NEP表达有较好的调控作用,能抑制脑内Aβ的生成,从而防治AD.

缓激肽B_2受体部分介导奥帕曲拉抑制乳鼠心脏成纤维细胞增殖

大量研究证明,心力衰竭及心肌梗死时循环中的ET-1的浓度升高,后者与心肌纤维化发生发展密切相关.奥帕曲拉(Omapatrilat,OMA)作为一种新型的血管肽酶抑制剂(va-sopeptidase inhibitor,VPi),能同时抑制血管紧张素转换酶(angiotension converting enzyme,ACE)和中性内肽酶(neutral endopeptidase,NEP)的活性,呈浓度依赖性抑制ET-1诱导的心脏成纤维细胞(CFs)增殖和胶原合成[1],但机制目前尚未见报道.

中性内肽酶及其抑制剂在心血管疾病过程中的作用

中性内肽酶是一种属于Ⅱ型跨膜蛋白的肽类内切酶,在肽链的氨基端水解疏水氨基酸肽键,灭活心钠素、肾上腺髓质素、血管紧张素、内皮素等心血管活性肽,在高血压病、心力衰竭、动脉粥样硬化和休克等心血管疾病的发病过程中发挥重要作用.

血管肽酶抑制剂的研究现状及展望

血管肽酶抑制剂(Vasopeptidase inhibitor, VPI)是一类双重肽酶抑制剂,能同时抑制血管紧张素转换酶(ACE)及中性内肽酶 (neutral endopeptidase, NEP)活性.在降低肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)活性、增加血管舒张性、提高体内缓激肽(BK)和心房钠尿肽(ANP)的浓度及活性方面,具有比单用ACE抑制剂或NEP抑制剂更强的作用.大量临床前动物实验及临床研究证实VPI治疗各种心血管疾病如高血压、心力衰竭等具显著疗效.本文综述了VPI近的基础与临床新进展.

自发性高血压大鼠肾上腺髓质素含量与中性内肽酶分布的关系

目的测定自发性高血压大鼠(SHR) 与WKY大鼠组织肾上腺髓质素(ADM)含量和中性内肽酶(NEP)活性及其表达水平,以探讨NEP的变化在高血压时组织ADM水平升高中的意义.方法采用放射免疫分析方法和荧光分光光度法分别检测血浆和组织的ADM含量和NEP的活性,同时用半定量RT-PCR和免疫组织化学染色法分别检测组织NEP mRNA和NEP蛋白的表达和分布.结果 ADM和NEP广泛分布于大鼠的血浆和组织,SHR的ADM含量在各组织普遍高于WKY大鼠.SHR心脏和小肠NEP的活性和mRNA表达均显著低于WKY大鼠,ADM含量与NEP活性呈负相关.反之,SHR血浆和肾脏NEP活性、肾脏NEP mRNA水平与蛋白量均高于WKY大鼠,ADM含量与NEP活性呈正相关.在肺脏和主动脉,NEP的活性无明显变化.结论 NEP在自发性高血压大鼠各组织器官中的变化与ADM含量的变化不一致,提示高血压时组织局部的NEP对ADM含量的影响不同.

中性内肽酶在神经疾病中的病理生理作用

中性内肽酶(neural endopeptase,NEP)是一种含锌、含糖,分布普遍、底物广泛的金属蛋白酶,主要功能是水解肽链氨基端疏水氨基酸残基,作为突触酶或内肽酶降解灭活脑啡肽等肽类神经递质和心钠素等肽类激素[1].近年来采用基因工程技术,对NEP在神经疾病中的病理生理作用取得了重要的研究进展[2].

103 中性内肽酶和内皮素转化酶双重抑制剂:SLV-306

抗高血压药物研究新进展

目的综述近几年正在临床前或临床试验研究的新型抗高血压药物.方法检索国内外文献,对有关新型抗高血压药物的文献进行分析、评诂及综合.结果目前有8类新型抗高血压药物正在临床前或临床研究阶段.结论认为这8类药物将成为抗高血压药物家族中的重要成员,可能在以后的抗高血压治疗中占据重要地位.

中性内肽酶和阿尔茨海默病的基因联系

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是导致痴呆的常见的进行性神经退行性疾病.淀粉样肽(amvloid β peptide,Aβ)在脑中沉积形成老年斑是AD的神经病理学标志之一,Aβ产生与清除的动态平衡是决定老年斑形成的重要因素.生理情况下有多种降解酶可以降解Aβ,使其产生和清除达到平衡.其中中性内肽酶(Neprilvsin,NEP)是主要的Aβ降解酶[1],可降解单聚体和(或)寡聚体形式的Aβ[2,3].在大脑中,老年斑的增加与NEP mRNA表达水平降低有关[4].

血管肽酶抑制剂新药研发的进展

血管肽酶抑制剂是单一结构的化合物分子,具有双重的抑制作用,即抑制血管紧张素转化酶和中性内肽酶的活性.能降低肾素-血管紧张素-醛固酮系统的活性,减少血管紧张素Ⅱ及醛固酮的生成；阻止中性内肽酶降解心房钠利尿肽、脑钠利尿肽等钠利尿肽及缓激肽,从而产生利尿排钠、增加血管舒张性的作用,其作用比单用血管紧张素转化酶抑制剂或中性内肽酶抑制剂更有效.主要概述了血管肽酶抑制剂的药理作用及新药研发情况.

丁苯酞对AD大鼠模型海马BACE及NEP活性含量的影响

目的 探讨丁苯酞对AD大鼠模型海马组织β分泌酶(BACE)和中性内肽酶(NEP)活性含量的影响.方法 选用健康雄性Wistar大鼠40只,随机分为4组,假手术组、模型组、丁苯酞低剂量组、丁苯酞高剂量组.采用大鼠海马立体定向注射凝聚态Aβ1-40诱导AD模型,灌胃时间为4周,以ELISA 法测定海马组织匀浆中β-分泌酶及中性内肽酶的活性含量.结果 用药组大鼠海马组织β-分泌酶的活性含量没有明显降低,与模型组之间差异无统计学意义(P>0.05);用药组大鼠海马组织中性内肽酶的活性含量明显升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01),但丁苯酞低剂量组与高剂量组之间差异无统计学意义.结论 丁苯酞可以促进AD大鼠模型海马组织的中性内肽酶的活性含量,并可能通过促进其活性含量加速Aβ的降解,但对于β分泌酶却没有明显的影响.

醒脑液对PAP双转基因痴呆小鼠NEP和BACE1 mRNA表达的影响

目的:探讨中药醒脑液(XNY)对PAP双转基因痴呆小鼠大脑组织中中性内肽酶(NEP)和β分泌酶(BACE1) mRNA表达的影响.方法:采用实时荧光定量PCR技术分别观测正常对照组、模型组、西药对照组、XNY高剂量组、XNY中剂量组和XNY低剂量组小鼠大脑组织中NEP和BACE1 mRNA的表达.结果:与模型组相比,XNY高剂量组脑内NEP mRNA含量表达上调(P＜0.05);XNY高、中剂量组BACE1 mRNA含量表达下降(P＜0.01).结论:醒脑液对双转基因痴呆小鼠大脑组织中NEP和BACE1 mRNA表达有较好的调控作用,说明醒脑液对防治老年性痴呆能起到良好效果.

血管肽酶抑制剂的研究进展

目的阐述血管肽酶抑制剂(VPIs)的作用机制、构效关系以及临床研究等方面的进展.方法根据近期对VPIs的作用机制、构效关系以及研究开发现状的25篇相关文献进行整理和归纳.结果与结论数种血管肽酶抑制剂正在进行治疗高血压、心力衰竭等心血管疾病的临床试验.VPIs有望成为新一代治疗高血压和心力衰竭的药物.

人参皂苷Rg1对Aβ25-35诱导的Alzheimer's病细胞模型作用的研究

目的 研究人参皂苷Rg1对β-淀粉样肽(Aβ25-35)诱导的神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH细胞)损伤的保护作用.方法 用Aβ25-35处理人SK-N-SH细胞,模拟Alzhermer's(AD)病人体内神经元病理损伤,并以人参皂苷Rg1拮抗其作用.采用MTT比色法检测细胞活力;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;DNA梯型观察凋亡细胞的DNA片段化;化学比色法测定细胞培养液和细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;RT-PCR检测细胞淀粉样肽蛋白前体(APP)基因、中性内肽酶(NEP)基因的表达情况;Western Blot检测细胞APP和NEP蛋白的表达情况.结果 20 μmol/L Aβ25-35诱导SK-N-SH细胞24 h细胞活力下降(均P＜0.01),细胞凋亡率为33.9%,DNA断裂呈片段状,细胞培养液及细胞内MDA含量增加,SOD活性降低.而人参皂苷Rg1能提高细胞的存活率,减少细胞损伤,使细胞培养液及细胞内MDA含量降低,SOD活性提高(P＜0.01),RT-PCR结果显示人参皂苷Rg1可降低APP基因的表达并提高NEP 基因的表达,同时Western Blot结果显示人参皂苷Rg1可降低APP蛋白的表达并提高NEP 蛋白的表达.结论 人参皂苷Rg1对Aβ25-35造成的细胞毒性具有一定的保护作用,其作用机理可能与人参皂苷Rg1能提高SK-N-SH细胞的抗氧化能力以及下调APP基因的表达,上调NEP基因的表达,从而抑制细胞凋亡有关.

中性内肽酶相互作用蛋白质的功能

目的 分析与中性内肽酶(NEP)相互作用的蛋白质的功能.方法 利用在线蛋白质间相互作用的数据库PINA2获得与NEP相互作用的蛋白质,并利用基因本体(GO)和KEGG分析这些蛋白质的功能.结果 PINA2数据库显示与NEP相互作用的蛋白质有176个;GO分析显示这些蛋白质分布于细胞内的各个区域,一部分可以分泌出细胞发挥作用,可以与蛋白、核酸及酶类结合,参与细胞内蛋白质定位、多肽和RNA降解、大分子代谢及血管紧张素成熟.KEGG信号通路结果显示NEP相结合蛋白参与帕金森病、阿尔茨海默病等疾病过程,还参与蛋白降解及吞噬过程.结论 NEP及其相互作用蛋白可以通过调节蛋白定位和大分子降解参与帕金森病及阿尔茨海默病的疾病过程,并且一部分可以分泌到细胞外,为帕金森病和阿尔茨海默病的诊断和治疗提供潜在靶点.

芩百清肺浓缩丸对感染后咳嗽大鼠SP、CGRP、NEP的影响

目的:观察芩百清肺浓缩丸(芩百)对感染后咳嗽(PIC)大鼠肺泡灌洗液和血清SP、CGRP及NEP含量及肺组织SP及NEP表达的影响,探讨芩百清肺浓缩丸对感染后咳嗽气道神经源性炎症的干预作用.方法:40只大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(孟鲁司特)和中药芩百组.采用烟熏加内毒素(LPS)滴鼻以及辣椒素雾化吸入法建立PIC大鼠模型.各组大鼠给予相应处理10d,观察大鼠3 min咳嗽次数变化,ELISA法检测BALF、血清中SP、CGRP和NEP含量,免疫组化检测肺组织SP、NEP蛋白表达并进行半定量评分,HE染色光镜观察支气管和肺组织病理改变.结果:1)咳嗽次数比较:阳性对照组和中药组咳嗽次数低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05),两药物组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).2) SP、CGRP及NEP含量比较:中药组BALF、血清中SP和CGRP含量均低于模型组和阳性对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);中药组BALF中NEP含量接近正常组水平,高于模型组和阳性对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);各组血清中NEP含量比较,差异无统计学意义(P＞0.05).3)肺组织SP与NEP免疫组化检测结果显示:与模型组比较,中药组SP表达明显减弱、NEP表达增强,差异有统计学意义(P＜0.05);阳性对照组与模型组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:芩百清肺浓缩丸能够降低感染后咳嗽大鼠血清及BALF中SP、CGRP的含量及肺组织SP的表达,提升BALF中NEP的含量及表达至接近正常水平.芩百清肺浓缩丸能够且不仅仅是通过NEP-SP途径来降低感染后咳嗽的气道神经源性炎症.

音乐电针对SAMP8小鼠行为学及大脑皮层NEP、IDE表达的影响

目的：探讨音乐电针治疗阿尔茨海默病（ AD ）的可能作用机制。方法：将SAMP8小鼠随机分为模型组、药物组和音乐电针组，SAMR1小鼠作为正常组。药物组给予盐酸多奈哌齐0．92mg／kg灌胃给药；音乐电针组电针“百会”、“印堂”穴20 min后，点刺“水沟”穴。采用Morris水迷宫测定小鼠学习记忆能力，免疫组化法检测小鼠大脑皮层NEP及IDE的表达。结果：音乐电针改善模型小鼠学习记忆能力与药物比较，无显著性差异（ P＞0．05），并能显著提高大脑皮层NEP及IDE表达（ P＜0.05）。结论：音乐电针具有改善AD学习记忆障碍的作用，其机制可能与促进Aβ降解酶表达有关。

中性内肽酶与肠道神经源性炎症

中性内肽酶是一种金属蛋白酶,可以降解P物质等肽类物质,阻断神经源性炎症反应.近年来发现中性内肽酶与肠道神经源性炎症关系密切,现阐述中性内肽酶及其与肠道神经源性炎症关系的新研究情况.

血管肽酶抑制剂治疗心血管病的前景

心血管系统受血液动力学与神经体液机制控制,这些调控系统在调节心脏功能、血管紧张度与结构等方面起重要作用.血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂临床应用有效,使得人们致力于阻滞其它体液系统.中性内肽酶(NEP)是一种具有类似结构和催化部位的内皮细胞表面锌金属肽酶,是利钠肽的主要酶降解途径,也是激肽与肾上腺髓素(adrenome-dullin)的辅助酶降解途径.利钠肽可看作肾素-血管紧张素系统的内源性抑制剂.