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互隔交链孢霉素对NIH/3T3细胞毒性的作用
目的 研究互隔交链孢霉素(altenuene,ALT)对NIH/3T3细胞的毒性作用,为互隔交链孢霉的致癌机制提供理论依据.方法 以互隔交链孢酚(alternariol,AOH)为阳性对照,采用形态学观察,噻唑蓝法,生长曲线,流式细胞术(FCM)等方法检测不同浓度的ALT对NIH/3T3细胞生长的影响及细胞周期的改变.结果 ALT对NIH/3T3细胞的半数抑制率为76.4、50和100 μmol/L的ALT染毒24 h可使NIH/3T3细胞生长曲线明显下降,并有明显的形态学改变;以10.0、20.0和50.0 μmol/L的ALT染毒24 h后,与对照组比较,G2/M期细胞比例增加,且差异有统计学意义(P<0.05).结论 ALT对NIH/3T3细胞有毒性作用,可抑制细胞增殖并诱导G2/M期细胞阻滞,其细胞抑制作用可能与细胞周期阻滞有关.
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不同浓度的互隔交链孢霉素对NIH/3T3细胞cAMP水平的影响
目的 观察不同浓度的互隔交链孢霉素(ahenuene,ALT)对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)中cAMP水平的影响.方法 以NIH/3T3为研究对象,观察以0、2.5、5、10、15和20 μmol/L ALT作用30 min,并设0.4 mmol/L烷化剂甲璜酸甲酯(methyl methane.sulfonate,MMS)为阳性参照物,使用超声法破碎细胞,以125I标记的放射免疫分析(RIA)检测细胞内cAMP水平.结果 与对照组相比,5、10、15和20 μmol/L ALT 能升高细胞内cAMP水平(P<0.05);而以0.4 mmol/L MMS处理细胞.cAMP水平同样升高.结论 ALT对细胞具有明显的影响,可能与经由第二信使cAMP所介导的相关信号通路有关.
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互隔交链孢霉素对NIH/3T3细胞的基因损伤及DNA聚合酶β表达的影响
目的:研究互隔交链孢霉素(altenuene,ALT)对NIH/3T3细胞的基因损伤作用及对DNA聚合酶β (DNA polymerase β,DNApolβ)表达的影响,探讨互隔交链孢霉(Alternaria alternate)致癌机制.方法:用单细胞凝胶电泳检测不同浓度的ALT对NIH/3T3细胞的基因损伤作用;以半定量RT-PCR及Western-blot方法分别检测DNApolβ在基因及蛋白水平的表达.结果:10.0、20.0、50.0 μmol/L的ALT作用于NIH/3T3细胞后,细胞尾长及尾部DNA含量均增加,一定浓度的ALT作用于细胞后DNApolβ在基因及蛋白水平表达均上调,与溶剂对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:ALT可引起NIH/3T3细胞基因损伤,且有剂量依赖性,并可导致DNApolβ的表达上调.
