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互隔交链孢霉素对NIH/3T3细胞毒性的作用
目的 研究互隔交链孢霉素(altenuene,ALT)对NIH/3T3细胞的毒性作用,为互隔交链孢霉的致癌机制提供理论依据.方法 以互隔交链孢酚(alternariol,AOH)为阳性对照,采用形态学观察,噻唑蓝法,生长曲线,流式细胞术(FCM)等方法检测不同浓度的ALT对NIH/3T3细胞生长的影响及细胞周期的改变.结果 ALT对NIH/3T3细胞的半数抑制率为76.4、50和100 μmol/L的ALT染毒24 h可使NIH/3T3细胞生长曲线明显下降,并有明显的形态学改变;以10.0、20.0和50.0 μmol/L的ALT染毒24 h后,与对照组比较,G2/M期细胞比例增加,且差异有统计学意义(P<0.05).结论 ALT对NIH/3T3细胞有毒性作用,可抑制细胞增殖并诱导G2/M期细胞阻滞,其细胞抑制作用可能与细胞周期阻滞有关.
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互隔交链孢酚对NIH/3T3细胞的急性毒性作用
目的 研究互隔交链孢酚(AOH)对小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3的急性毒性作用.方法 将对数生长期的NIH/3T3细胞分为10、50μmol/L AOH处理组和溶剂对照组,观察染毒细胞形态学变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法研究细胞存活率,采用彗星实验观察细胞的DNA损伤程度,利用流式细胞术(FCM)检测对细胞周期的影响.结果 细胞处理后,出现明显的细胞形态学变化.MTT结果表明,10、50μmol/L AOH处理组细胞抑制率(分别为19.88%,32.47%)显著高于溶剂对照组(P<0.05).10、50μmol/L AOH组在彗星实验中细胞拖尾率为35.87%和71.83%,尾部DNA含量为(36.18±18.6)和(51.3±21.6),显著高于溶剂对照组的拖尾率(14.78%)和尾部DNA含量(21.29±15.60)(P<0.05);10μmol/L AOH处理组对NIH/3T3细胞周期影响不明显,而50μmol/L AOH处理组引起S期增高和明显的G2/M期阻滞(P<0.05).结论 AOH可诱导NIH/3T3细胞的DNA损伤、抑制细胞增殖,并诱导G2/M期细胞阻滞.
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1800 MHz长期电磁辐射对NIH/3T3细胞增殖能力的影响
目的 探讨长期1800 MHz电磁辐射对NIH/3T3细胞增殖能力的影响.方法 采用1800MHz电磁辐射,SAR值2 W/kg,间断暴露方式(5 min on/10 min off),5 h/d.对暴露60 d和138 d的细胞,进行平板克隆和软琼脂克隆实验,并采用ELISA法检测端粒酶的表达.结果 平板克隆实验中,60 d暴露组细胞的克隆形成率显著低于假暴露组(P＜0.05),而138 d暴露组细胞的克隆形成率与假暴露组无明显差异.软琼脂克隆实验中,60 d暴露组和假暴露组细胞均未见克隆形成,而138 d暴露组克隆形成率显著高于假暴露细胞.端粒酶检测结果,60 d暴露组细胞的端粒酶表达量与假暴露组无显著差异,而138 d暴露组细胞的端粒酶表达量显著高于假暴露组(P＜0.05).结论 1800 MHz电磁辐射长期暴露至60 d,有损NIH/3T3细胞的增殖能力,而更长期的暴露后(138 d)细胞转化增殖能力增强.
关键词： 细胞增殖 细胞克隆 1800 MHz电磁辐射 NIH/3T3细胞 端粒酶 -
白介素17A抑制博来霉素诱导的小鼠NIH/3T3细胞凋亡
目的 探讨细胞因子白介素17A对于博来霉素诱导的小鼠成纤维细胞NIH/3T3凋亡的影响.方法 使用博来霉素诱导细胞凋亡,使用TUNEL荧光染色试剂盒检测细胞凋亡情况,使用Western blot检测Caspase-3以及Bcl-2的蛋白表达情况.结果 博来霉素可以促进NIH/3T3细胞DNA发生断裂,促进活性Caspase-3的蛋白表达,降低Bcl-2蛋白含量;白介素17A可以抑制NIH/3T3细胞DNA断裂,抑制活性Caspase-3的蛋白表达,促进Bcl-2的蛋白含量.结论 博来霉素可以诱导小鼠NIH/3T3细胞发生凋亡,白介素17A可以抑制博来霉素诱导的细胞凋亡.
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染料木黄酮对NIH/3T3细胞体外短期转化实验的影响
目的通过观察染料木黄酮对NIH/3T3细胞体外恶性转化的影响,研究染料木黄酮在癌症起始阶段的预防作用.方法体外短期转化实验.结果染料木黄酮在对细胞无明显毒性的浓度下,对MNNG所诱发NIH/3T3细胞恶性转化有明显的抑制作用,其低抑制浓度为3.7μmol/L.结论染料木黄酮可能是化学致癌过程的抑制剂.
关键词： 染料木黄酮 NIH/3T3细胞 体外细胞短期转化实验 -
煤焦油对NIH/3T3细胞的毒性作用
以某炼焦厂煤焦油为受试物,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测NIH/3T3细胞活性.结果不同浓度下的煤焦油作用一定时间后,NIH/3T3细胞存活率下降,随着浓度的增加和作用时间的延长,这种抑制作用也愈加明显,同时细胞在形态学上也出现一系列的改变.接触受试物24 h,细胞生长半数抑制浓度IC50为58.2 μg/L,同时镜下观察细胞形态也发生了改变.提示煤焦油可以抑制NIH/3T3细胞生长,降低其线粒体代谢活性.
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煤焦油致哺乳动物细胞转化作用的实验研究
采用转化细胞灶法,观察煤焦油致小鼠肺成纤维细胞的形态学转化,并以刀豆球蛋白A凝集实验进一步验证其转化活性.结果 煤焦油剂量为0.1μg/ml、1.5μg/ml、22.5μg/ml的转化率分别为7.80%、9.88%、12.06%,煤焦油处理的NIH/3T3细胞均可与刀豆球蛋白A发生凝集反应.提示煤焦油具有细胞转化活性.
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白藜芦醇对Ni2O3诱导NIH/3T3细胞氧化损伤保护作用的实验研究
目的 研究白藜芦醇(resveratrol,3,4',5-trihydroxystilbene,Res)对三氧化二镍(Ni2O3)诱导小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)氧化损伤的保护作用.方法 实验分为对照组、三氧化二镍(Ni2O3)组以及白藜芦醇干预组.对照组Ni2O3浓度为0.00 μg/mL,白藜芦醇浓度为0.00 μmol/L,Ni2O3组给予终浓度为200.00 μg/mL的Ni2 O3混悬液.干预组在Ni2O3处理前分别加入终浓度为10.00、16.00、20.00 μmol/L的白藜芦醇预处理24h,其他处理与Ni2O3组一致.采用CCK-8法检测细胞活性;试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量.结果 与对照组相比,Ni2O3组细胞活性降低,细胞内GSH-Px含量下降,细胞内ROS及MDA含量增高,差异有统计学意义(P＜0.05);白藜芦醇干预组与Ni2O3组比较,随着Res浓度的升高,细胞活性升高,细胞内GSH含量增加,细胞内ROS及MDA含量下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 白藜芦醇对于Ni2O3诱导NIH/3T3的细胞损伤具有保护作用,其机制可能与抑制细胞氧化损伤有关.
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热休克蛋白47(HSP47)-短发夹RNA的构建及其细胞水平对HSP47表达的影响
目的 针对肝纤维化发病关键基因热休克蛋白47 (HSP47)基因构建HSP47-shRNA,初步验证其在NIH/3T3细胞系干预HSP47基因的表达,影响HSP47 mRNA及蛋白水平表达,并观察该细胞功能学变化. 方法 设计HSP47-shRNA模板,并将其分别设计于U6启动子的下游引物,将U6启动子及其下游HSP47-shRNA的模板双链DNA连接入载体,构建HSP47-pGCsi-U6-shRNA重组质粒(HSP47-1-pGC si-U6-shRNA、HSP47-2-pGCsi-U6-shRNA和HSP47-3-pGCsi-U6-shRNA).以非相关干扰质粒作为对照,通过脂质体介导转染HSP47-shRNA至小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)中,分别于12、24、48和72 h在倒置荧光显微镜下观察细胞转染效率和荧光表达强度;同时于转染后0、24和48 h收集细胞,采用RT-PCR和蛋白质印迹(Western blotting)分析HSP47 mRNA和蛋白表达情况;并观察干预后该细胞分泌胶原功能和小鼠转化生长因子(TGF-β1)表达的变化. 结果 成功构建HSP47-shRNA载体,通过脂质体介导转染入NIH/3T3细胞,各干扰质粒转染效率均约为60.0％,各干扰质粒转染效率间差异无统计学意义(P＞0.05).转染12h,可见少量绿色荧光细胞,随转染时间的延长,细胞荧光表达量逐渐增加,各干扰质粒于转染72h荧光表达强.shRNA干扰显著抑制HSP47蛋白的表达,以转染HSP47-1-shRNA 24h后对蛋白表达抑制效果佳,对HSP47 mRNA的相对沉默效率为(25.83±1.79)％,与空白组及非相关对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).HSP47-1-shRNA转染24h,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA相对表达量分别下调为(56.52±1.64)％和(53.48±2.54)％,转染48 h分别下调为(54.17±2.63)％和(50.21±2.34)％,明显低于空白组和非相关对照组(P＜0.05),但各实验组间差异无统计学意义(P＞0.05).各组HSP47-shRNA干扰质粒对TGF-β1 mRNA的抑制效率以转染24h效果佳,相对表达分别为(63.23±2.18)％、(64.53±3.17)％和(75.19±4.20)％,均低于空白组和非相关对照组(P＜0.01),但干预组间对TGF-β1的抑制率差异无统计学意义(P＞0.05).各HSP47-shRNA干扰质粒组细胞上清中TGF-β1的抑制率以转染24h为佳,分别为(51.79±3.12)％、(66.67±2.13)％和(69.61±3.65)％,与空白组相比,HSP47-1-shRNA组与HSP47-2-shRNA组对TGF-β1均有显著抑制作用,且以HSP47-1-shRNA组抑制效率更佳(P＜0.05),HSP47-3-shRNA组与空白对照组间差异则无统计学意义(P＞0.05). 结论 构建了HSP47-shRNA干扰质粒,初步证实其对HSP47的表达干预有效,并引起NIH/3T3细胞功能学的变化.
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新基因pp3774抑制NIH/3T3细胞生长机制初探
目的探讨新基因pp3774在NIH/3T3细胞生长调节中的可能机制.方法用pp3774-HA融合表达质粒通过脂质体法转染NIH/3T3细胞,G418筛选,建立稳定细胞系,并用RT-PCR检测pp3774 在NIH/3T3细胞中mRNA水平的表达状况;利用Atlas cDNA array分析pp3774的异位表达对NIH/3T3细胞基因表达谱的影响;用RT-PCR方法验证Atlas cDNA array杂交结果.结果 pp3774超表达可以明显下调cyclin D1、cyclin E、转录因子Dp1等基因的表达,同时可上调PI3K p85α、FGF7、MMP2等基因的表达.上述基因表达的改变可能通过调控细胞周期实现pp3774对NIH3T3细胞的生长抑制.结论新基因pp3774抑制NIH/3T3细胞生长可能与pp3774基因下调cyclin D1、cyclin E、转录因子Dp1的表达有关.
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Galectin-3重组真核表达载体的构建及其在NIH/3T3细胞中的表达
目的:构建半乳糖凝集素-3(Gal-3)的真核表达载体,在NIH/3T3细胞中表达,并检测其表达.方法:通过DNA重组技术和PCR方法从人肿瘤细胞克隆Gal-3基因,插入真核表达载体pEGFP-N1中,通过酶切和测序鉴定重组载体的正确性;采用脂质体转染技术将重组质粒pEGFP-Gal-3瞬时转染NIH/3T3细胞,经荧光和Western blot方法检测Gal-3表达,MTT法检测Gal-3对NIH/3T3细胞增殖的影响.结果:限制性内切酶鉴定和核酸序列测序证实成功构建含Gal-3的重组真核表达载体pEGFP-Gal-3.以重组质粒瞬时转染NIH/3T3细胞,检测到Gal-3蛋白表达,并证实Gal-3蛋白促进NIH/3T3细胞增殖.结论:成功构建的pEGFP-Gal-3真核表达载体在小鼠NIH/3T3细胞中成功表达,并促进NIH/3T3细胞增殖.
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体外观察维甲酸对NIH/3T3细胞的抑制作用
目的评价维甲酸(RA)对NIH/3T3细胞生长的影响。方法体外观察5种浓度RA对NIH/3T3细胞生长的作用。结果 5种浓度的RA均能抑制NIH/3T3细胞的生长，且随着浓度的升高，RA抑制细胞增殖的作用增强。结论 RA能抑制NIH/3T3细胞的增殖。
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不同浓度的互隔交链孢霉素对NIH/3T3细胞cAMP水平的影响
目的 观察不同浓度的互隔交链孢霉素(ahenuene,ALT)对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)中cAMP水平的影响.方法 以NIH/3T3为研究对象,观察以0、2.5、5、10、15和20 μmol/L ALT作用30 min,并设0.4 mmol/L烷化剂甲璜酸甲酯(methyl methane.sulfonate,MMS)为阳性参照物,使用超声法破碎细胞,以125I标记的放射免疫分析(RIA)检测细胞内cAMP水平.结果 与对照组相比,5、10、15和20 μmol/L ALT 能升高细胞内cAMP水平(P<0.05);而以0.4 mmol/L MMS处理细胞.cAMP水平同样升高.结论 ALT对细胞具有明显的影响,可能与经由第二信使cAMP所介导的相关信号通路有关.
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互隔交链孢酚致DNA聚合酶β基因突变的实验研究
目的观察互隔交链孢酚对NIH/3T3细胞中DNA聚合酶β(DNApolβ)基因突变的影响,研究互隔交链孢酚致癌可能的机制.方法NIH/3T3细胞分为两组:①各正常细胞组;②AOH组,AOH浓度为8 μmol·L-1.用RT-PCR方法从细胞全RNA中扩增出DNA聚合酶β基因Cdna序列,应用T-A克隆技术,克隆至Pgem-Teasy载体后进行测序,分析序列变化.结果测序后发现正常组DNA聚合酶β基因序列无任何变化,AOH组中228位点发生T-C突变(导致39号氨基酸由Tyr变为His),319位点也有T-C突变(导致69号氨基酸由Iie变为Thr).结论AOH可导致NIH/3T3细胞中的DNA聚合酶β发生点突变,推测AOH的致癌作用可能与引发细胞中DNA聚合酶β基因突变有关.
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用血清药理学方法观察眼血散对NIH/3T3成纤维细胞的抑制作用
目的运用血清药理学方法,体外观察中药复方眼血散对NIH/3T3成纤维细胞生长的影响.方法给正常兔连续灌服眼血散煎剂浓缩液3d,制备含药血清.将3种浓度的眼血散煎剂浓缩液及含药血清作用于成纤维细胞,用MTT(噻唑蓝)比色法,观察细胞抑制率.结果3种浓度的眼血散及含药血清均能抑制NIH/3T3细胞的生长,6.25mg/ml、12.5mg/ml、25mg/m1眼血散煎剂浓缩液抑制率分别是30.00±2.90、51.35±2.01、59.95±1.34;5%、10%、20%含药血清抑制率分别是4.03±3.15、31.75±31.38、51.11±1.73.结论眼血散可抑制NIH/3T3细胞生长,可能是其防治增殖性玻璃体视网膜病变的作用机理之一.
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宝乐果粉及其提取物降低小鼠胚胎NIH/3T3细胞UVA损伤作用研究
目的:研究不同浓度宝乐果粉及其提取物对长波紫外线(UVA)照射损伤小鼠胚胎NIH/3T3细胞的保护作用.方法:分别设置对照组、UVA照射模型组以及宝乐果粉和宝乐果粉提取物不同剂量组；体外培养NIH/3T3细胞,经5 J/cm2 UVA辐照20min,加宝乐果粉和提取物.用噻唑蓝比色(MTT)法测定各组细胞增殖活力；比色法测定各组细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及MDA含量.结果:10-30 μg/mL宝乐果粉和5-10 μ g/mL提取物能显著提高细胞增殖活力(P＜0.01),降低受损细胞MDA含量(P＜0.05),提高SOD和GSH-Px活力(P＜0.05).水果粉和提取物组间差异无显著意义；不同剂量组间差异无显著意义(P＞0.05).结论:宝乐果粉及其提取物对UVA辐射所致小鼠胚胎NIH/3T3细胞损伤具有保护作用,对开发宝乐果抗紫外防晒化妆品具有参考价值.
关键词： 宝乐果(Borojo) NIH/3T3细胞 UVA损伤 皮肤光老化 -
正常氧及低氧环境下小干扰RNA抑制促红细胞生成素表达的研究
目的:研究促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)的特异性小干扰RNA(siRNA)对EPO表达的抑制作用,为视网膜新生血管的治疗提供新的途径.方法:体外培养NIH/3T3细胞,分成正常氧状态培养组和低氧培养组.通过脂质体(LF2000)将EPO siRNA转染两组细胞.采用RT-PCR及Western blot技术观察正常氧及低氧环境下EPO siRNA对细胞内EPO表达的抑制效果.结果:正常氧及缺氧环境下,EPO siRNA能明显抑制NIH/3T3细胞内EPO mRNA及蛋白质的表达.结论:EPO siRNA能显著抑制EPO的表达,为视网膜新生血管的基因治疗提供了新途径.
