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重组人IL-18的基因克隆与表达的研究
目的:利用基因重组技术构建人IL-18(rhIL-18)的真核表达载体,并在大肠杆菌中表达.方法:利用RT-PCR技术从外周血细胞扩增得到IL-18的cDNA并测定其核酸序列.将扩增产物酶切后克隆到pORF5质粒的NcoⅠ/NheⅠ酶切位点,转化大肠杆菌JM109,筛选阳性重组子,构建真核表达质粒pORF5-hIL-18.结果:真核表达质粒pORF5-hIL-18在大肠杆菌JM109表达,能够诱导PBMC合成GM-CSF,具有协同rhIL-2增强NK细胞细胞毒作用的能力.结论:重组表达的rhIL-18具有生物活性,可用于进一步的功能研究.
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多叶准直器参数对调强放疗计划的影响
调强放疗计划的设计和实现需要有逆向优化算法的治疗计划系统及配置多叶准直器的直线加速器,一旦优化得到目标函数值小则每个机架角的通量强度转化成计划实施所需的子野序列.但除目标函数设置外,射野数目和方向、多叶准直器参数等的改变也会影响优化算法,进而影响靶区和邻近正常组织剂量~([1]).
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对MDR肿瘤细胞KBV200的PKC-α亚型cDNA克隆序列的研究
目的:探讨口腔癌耐药细胞KBV200中,蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)α亚型的cDNA序列与肿瘤多药耐药性(multidrug resistance,MDR)的关系。方法:应用Western blotting法检测PKC-α在2株细胞中的表达,RT-PCR方法获得2株细胞的PKC-α亚型的cDNA片断,并克隆到T载体上,转化大肠杆菌并测序。结果:KBV200细胞中的PKC-α表达高于在药敏细胞株KB中的表达,同时发现KBV200的PKC-α亚型的cDNA序列中,第54位碱基发生点突变,但并未改变氨基酸序列。结论:PKC-α与KBV200细胞的MDR表型关系密切,引起MDR的外界因素可能通过改变PKC-α的基因序列来提高这一同工酶的表达从而引起了MDR现象。
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注重综合分析解读磁共振成像的异常信号
神经影像学技术的不断发展,尤其是磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)近年来涌现出一些新的成像技术,根据组织间不同磁共振特性形成了新的对比成像,帮助我们检出和识别了更多更复杂的病变;同一病变的不同时期在同一序列上可有不同的信号异常表现,或同一信号改变可见于不同的病理状态等,这些都增加了临床医生对于异常信号正确解读的困惑.这里我们仅就临床神经科在脑部MRI应用中3个容易混淆的问题进行讨论.
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中美法三国学者共同研究发现并更正了与帕金森病密切相关的Parkin基因序列
伴随着人口老龄化现象的日趋严重,帕金森病( Parkinson's disease,PD)已经成为严重影响人类健康的神经变性疾病之一.Parkin基因突变不仅是常染色体隐性遗传少年型PD的致病原因,还是散发性早发性青年型PD的重要病因.对Parkin基因正常序列的破译与其功能及其突变后发病机制的研究密切相关,是治疗PD的重要基础.近期,浙江大学附属第二医院神经内科张宝荣课题组与美法科学家共同研究明确了Parkin基因的正常序列,对之前权威杂志Nature(1998年)所报道的Parkin基因正常序列[1]进行了更正,三国科学家共同署名载文发表于国际著名期刊Mov Disord[2]上.该项目受到了浙江省科技厅重大科技专项国际合作项目基金及美国国立卫生研究院项目基金的共同资助.
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中国2007-2009年HIV-1耐药基因型检测质量评估结果
目的 对2007-2009年统一发放至各省,针对艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)蛋白酶和反转录酶基因的耐药突变基因型外部质控品的检测结果,进行分析和检测技术能力评价.方法 对3年共5次由各省提交的,应用实验室自建方法(In house)、Viroseq(雅培公司,Abbott)和TruGene(西门子公司,Siemens)检测系统获得的耐药基因型数据进行综合分析.质控盘由6份血浆(HIV-1 B及B/C重组毒株)组成,覆盖病毒的蛋白酶和反转录酶基因区的野生型和耐药突变型.每份序列与共享序列比较,使用扣分制对各实验室的结果进行评价.结果 除3家核心实验室外,累计有19个省23家省市级疾病预防控制中心(CDC)或医院自愿参加,共提交了 95份结果,其中3家实验室使用ViroSeq检测系统;提交了9份结果;1家使用TruGene检测系统;提交了 1份结果;其余85份使用inhouse检测系统.考核品总的序列阳性率(获得合格序列率)为97.7%,其中的低载量(1 000拷贝/mL)样本均得到阳性结果;根据累计提交的序列结果看,耐药位点判读的完全一致率为78.9%(75/95),序列编辑分析的一致率也有76.8%(73/95).参加能力验证的省市级实验室由2007年的15家增加到2009年下半年的23家,合格率(001PT)由73.3%上升到(004PT) 95.2%,3次以上优秀的实验室有13家.结论 目前的检测方法均可成功扩增中国主要亚型流行毒株.所有检测结果在各实验室间的一致性均较高,因此基因型耐药检测技术是可靠的,但各实验室检测能力也存在差异.我国具备耐药基因型检测能力的实验室数量不断增加,检测水平逐年提高.
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磁共振脉冲序列在中枢神经系统中的应用(一)
从1976年Bloch和Purcell发现磁共振现象以来,磁共振在医学上的应用获得了长足的发展.2003年Lauterbur和Mansfiled因在磁共振方面的贡献而共同获得了诺贝尔生理和医学奖.
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运动与过氧化物酶体增殖物激活受体研究进展
过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptors,PPARs)是一类细胞核激素受体超家族成员,它是1990年Issemann等人在用一段定位于核受体高保守C区的cDNA序列作探针筛选肝cDNA文库时获得的[1].
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小脑发育不良性神经节细胞瘤三例
例1男,49岁.以阵发性头痛7年,加重伴走路不稳2年入院.体检:头围60.8 cm,左耳听力较右侧差,四肢活动可,肌力V级.CT示左侧小脑病变,MRI表现为境界欠清、分层状的略长T>1、略长T2信号肿块,以T2WI明显,可见典型的平行于小脑脑回或斜行的、粗细不均的分层状或虎斑状(tiger-striped)条纹影(图1,2),液体衰减反转恢复(FLAIR)序列示病灶为条纹状略高信号肿块,瘤周水肿不明显(图3).肿瘤较大,伴有脑积水.增强扫描肿瘤无明显强化效应(图4).DWI肿瘤呈有条纹的较高信号,与周围脑组织分界清楚(图5).
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下肢裂头蚴病一例
患者女,31岁.3年前发现右大腿下段一肿物隆起,未予以治疗,3年来肿物大小变化不大.体检:右大腿中下段内侧可触及一约2.0cm×1.0 cm大小的肿物,质略硬,境界不甚清楚,表面光滑,伴深压痛.实验室检查未见异常.MR检查:右大腿内侧中下段皮下可见稍长T1、长T2异常信号,大小约1.0cm×1.3 cm×2.2 cm,信号基本均匀,边界清楚,T2WI压脂序列显示更为清晰,增强扫描呈明显不均匀强化(图1~3),诊断为血管瘤.
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MR-PET研究进展与前景
近10年多模式影像融合设备PET-CT取得成功,随之的目标便是研制PET和MR的同机融合设备MR-PET.MR是多参数、多序列成像,不但具有良好的软组织解剖分辨率,同时也可以进行功能成像,但与PET相比,MR在定量观察分子示踪方面仍有限制,敏感性也不及PET,这就为MR-PET融合设备的研制提出了需求.实验阶段的小动物MR-PET的成功研制,证明这种设想是可行的.
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酶功能分类与序列相似性研究进展
本综述就酶的序列与功能的关系在国际上新研究进展进行了比较系统的阐述.基本的方法有Needleman-Wunsch算法、FASTA和BLAST等常见的比较序列相似性的方法.此外还介绍了近几年出现的进化追溯法和局部三维模板法等方法.
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低场磁共振屏气SSFSE MRCP 序列对肝血管瘤和肝囊肿的鉴别和诊断价值
目的 探讨屏气SSFSE MRCP序列对肝血管瘤和肝囊肿的鉴别价值.方法 通过对40例患者(肝囊肿病灶30个,肝血管瘤病灶20个)进行MR平扫后行屏气SSFSE MRCP序列,对比分析两种病变的信号特征.结果 在SET1W1 FRFSE T2WI序列中,肝血管瘤和肝囊肿均表现为边界清楚的明显低信号和高信号,在屏气SSFSE MRCP序列中,肝囊肿显示为明显高信号,而肝血管瘤有较明显的信号衰减,甚至无信号.结论 采用屏气SSFSE MRCP 序列可鉴别肝血管瘤和肝囊肿.
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本室克隆的人细胞色素P450 1A1 cDNA序列特点
本实验室于1994年用人羊膜FL细胞株,经逆转录-PCR克隆了人细胞色素P450 1A1 cDNA,经部分DNA序列测定〔董海涛等,中国病理生理杂志 1995, 11(4):417-421〕. 并建立了稳定表达CPY1A1的转基因细胞,其表达产物具有乙氧基异吩口 恶唑-O-去乙基酶活性,建立的转基因细胞有代谢活化苯并[α]芘等多环芳烃的能力〔董海涛等,中国病理生理杂志 1996, 12(3):225-229〕. 现用T7,SP6引物和重新设计的中间引物,根据Perkin-Elmer操作说明书,用BigDye标记的双脱氧链终止法反应,再在本实验室ABI Prism 310全自动毛细管电泳测序仪上对重组质粒pGEM-3Z-1A1中的CYP1A1 cDNA片段全长进行测序(图1).
关键词: 细胞色素P450 1A1 互补DNA 序列 -
女性乙肝携带者体外受精-胚胎移植妊娠结局
母婴传播为乙型肝炎病毒(HBV)的主要传播途径,许多学者对是否存在卵细胞中HBV DNA序列的整合进行了相关研究[1~6],女性HBV携带是否影响辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)的治疗结局成为大家共同关注的问题.
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低场磁共振CBASS序列对三叉神经及血管关系显示的研究
目的 探讨低场磁共振显示三叉神经及血管关系的优势,找出佳的成像序列及方法.方法 选90例患者依次采用CBASS序列、FE序列、3D-TOF-FE序列进行检查,评价3种序列在MR图像上三叉神经及血管显示的能力.结果 CBASS与FE序列显示三叉神经图像质量无差异χ 2=0.128,P>0.05,3D-TOF-FE序列与CBASS、FE序列相比差异有统计学意义,χ 2=7.62,P<0.05;χ 2=6.97,P<0.05;在显示三叉神经方面,CBASS,FE较3D-TOF-FE差异有统计学意义;在显示血管方面,CBASS,3D-TOF-FE较FE有统计学意义.CBASS与FE序列在显示三叉神经方面P=1.023>0.05,两者无统计学意义.结论 低场机CBASS序列能够清晰显示三叉神经与血管的关系,对临床提供术前评估和指导治疗有极其重要的意义.
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唇腭裂序列护理的临床观察
唇腭裂是先天性缺陷中常见的一种,也是容易治疗治愈的一种,患者的智力几乎不受影响.目前上海国际"微笑列车"已经驶入呼伦贝尔,我院有幸成为定点医院.为使这些偏远山区贫困的孩子早日接受手术治疗,并得到耐心细致的序列护理,针对50名唇腭裂患者,我们制定了唇腭裂专科护理计划,给予临床观察.
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膝关节骨挫伤MRI检查的序列选用
目的 探讨膝关节骨挫伤MRI检查的序列选用.方法 对66例膝关节骨挫伤患者分别行STIR和FSET2序列扫描,比较STIR序列和FSET2WI显示骨挫伤的差异.结果 66例膝关节骨挫伤共发现Ⅰ型骨挫伤48例62处,约占72%,Ⅱ型骨挫伤18例24处,约占27%.STIR序列能明确显示位于股骨内外侧髁、干骺端、胫骨内外侧平台、胫骨后部、胫骨干、腓骨、髌骨等处的小片状或半环形,大小在2cm以下的骨控伤48例共62处.FSET2WI能够显示的31例42处.结论 STIR序列是显示膝关节骨挫伤的佳序列.
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RNA干扰在肝病治疗中的研究进展
RNA干扰(RNAi)是双链RNA(dsRNA)分子在mRNA水平关闭相应序列及基因的表达使其沉默的过程[1].RNAi主要的功能特色在于它可调节和关闭基因的表达,促使mRNA降解或阻止蛋白产物合成,进而调控细胞的各种高级生命活动,其抑制基因表达作用具有高效性和特异性[2].RNAi作为一种快捷方便的工具广泛用于高通量的研究基因功能、基因敲除、基因治疗和基因表达调控领域的研究.现对RNAi在肝病治疗中的新进展作一综述.