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低场磁共振胆胰管水成像对梗阻性黄疸的诊断研究
磁共振胆胰管水成像(magnetic resonance cholangiopancreatography,MRCP)是近年发展起来的无创性胆胰管成像技术,文献[1-3]报道高场、中场磁共振成像设备在诊断梗阻性黄疸病变中应用价值,但是利用低场MRCP的研究报道较少,我们从2009-2010年开始在低场磁共振采用重T2WI单激发FSE序列、厚层投射直接成像技术法做MRCP检查40例,现总结报告如下.
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福建省脊髓灰质炎病毒分子流行病学研究
目的对福建省急性弛缓性麻痹(AFP)病例中分离的脊髓灰质炎病毒进行分子流行病学研究.方法用RT-PCR法扩增目的基因片段,通过核酸序列分析仪进行测序,将基因序列提交到美国国家生物技术信息中心(NCBI)GenBank上进行比对,并构建基因树.结果福建省1999～2002年分离到脊灰病毒5株,为Ⅱ型与Ⅲ型的疫苗重组.序列分析表明,福建省AFP病例中分离到的5株脊髓灰质炎病毒株VPI区与标准疫苗株的同源性高达99%以上,变异程度不大,与攀枝花市造成流行的脊灰病毒株差异也不大.同时发现,Fj-4,Fj-52株病毒为同一毒株.结论福建省在1999～2000年曾经出现过疫苗重组株,其中有一种毒株已在人群中循环,并引发2例病例.目前我国已进入无脊灰状态,仍采用减毒活疫苗进行免疫要注意脊髓灰质炎疫苗衍生株(VDPV)的流行.运用分子流行病学方法可以为适时调整免疫策略提供支持.
关键词： 脊髓灰质炎 RT-PCR 基因型 序列 脊髓灰质炎疫苗衍生株 -
超顺性氧化铁在细胞内外对磁共振信号的影响
背景:目前关于超顺磁性氧化铁在进行细胞标记和作为网状内皮细胞系统特异性对比剂时对周围质子驰豫时间影响的报道差异较大.目的:验证超顺磁性氧化铁在细胞内外对磁共振信号的影响有否差异,以选择佳的磁共振扫描方法.设计、时间及地点:对比观察,细胞成像实验,于2006-06/2007-01在川北医学院附属医院医学影像研究所和风湿免疫研究所完成.材料:超顺磁性氧化铁采用Resovist(SHU555A),由德国先灵公司惠赠.将大鼠骨髓基质干细胞用铁质量浓度分别为0,4.2,8.4,21,42,84 mg/L的氧化铁-多聚赖氨酸复合物标记.方法:应用GE Signa EXCITE 1.5T MR扫描仪对19只含不同质量浓度超顺磁性氧化铁的EP管及不同质量浓度铁标记后的磁标记细胞悬液进行体外MR成像. 主要观察指标:超顺磁性氧化铁在不同磁共振序列上随质量浓度改变其信号改变的规律;低质量浓度时细胞内外超顺磁性氧化铁对磁共振信号影响的差异.结果:①在细胞外:T1WI信号强度随超顺磁性氧化铁质量浓度的增加先升高后降低,在T2WI上随质量浓度的增加信号降低,在低质量浓度时,T1WI及T2*WI较T2WI更敏感,以T2*WI敏感(P < 0.05).②在细胞内:MR信号强度随培养液中铁质量浓度的增加而增加,在FSE T1WI,铁质量浓度≤ 21 mg/L时,各组间信号强度没有显著性差异,当质量浓度为42 mg/L和84 mg/L时信号强度较对照组明显升高(P < 0.05).在FSPGR T1WI,当铁质量浓度≥ 8.4 mg/L时,各管信号强度明显高于对照管(P < 0.05).在FSE T2WI及GRE T2*WI上,当质量浓度为4.2 mg/L时,信号强度较对照管信号强度明显降低(P < 0.05),且T2*WI信号降低较T2WI明显(P < 0.05).结论:低质量浓度的超顺磁性氧化铁在细胞内外对MR信号的影响是不同的,T2*WI为检测超顺磁性氧化铁较敏感而特异的序列.
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感染微生态研究进展——肠道菌群对机体代谢影响
1 肠道菌群的组成在人体,肠道菌群是一个复杂的微生态系统,由于细菌培养手段的局限性,我们对其结构和组成知之甚少.近年来,随着分子生物学技术在感染微生态学上的应用,根据细菌16SrRNA序列的分类,发现肠道内寄住的微生物群的种类超过800种,主要有拟杆菌属、梭菌、乳杆菌、大肠埃希菌属和双歧杆菌属等;数量超过1014,约10倍于人体细胞,绝大多数为厌氧菌.在这数量巨大的菌群中,有些是潜在的病原体,在某些环境下,它们是机体感染的源头[1].
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Sextant经皮微创脊柱内固定术患者的手术护理
胸腰段脊柱骨折手术治疗的目的是恢复和维持脊柱正常序列,重建脊柱稳定性,防止后凸畸形和迟发瘫.
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导流杂交与杂交捕获二代用于生殖道人乳头状瘤病毒感染诊断的比较研究
目的评价导流杂交在女性生殖道人乳头状瘤病毒(HPV)感染检测中的实用价值.方法对2004-08-2005-01就诊于中日友好医院妇产科的310例女性宫颈脱落细胞标本,用导流杂交法进行21种HPV亚型的分型检测,同时用杂交捕获二代(HC-Ⅱ)进行13种高危型HPV检测.比较两种方法13种高危型HPV检测结果的符合情况,结果不一致标本进行基因测序.结果两种方法检测结果一致性良好,不同病变纽Kappa指数均＞0.4.测序结果60.0%与导流杂交法符合.结论导流杂交检测效果与HC-Ⅱ具有可比性,且能确切分型,是较理想的HPV检测方法.
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颈内动脉闭塞MRI相关表现8例临床分析
1 资料与方法1.1 一般资料 24例患者均经数字减影血管成像(DSA)、核磁共振动脉血管成像(MRA)与MRI检查,同时将16例无颈内动脉闭塞者作为对照组,而8例颈内动脉闭塞者为闭塞组.24例均为脑血管病患者,疑有脑动脉狭窄而行全脑血管DSA检查.1.2检查方法采用GE公司Advantx LCV Plus数字减影系统行全脑血管造影,3T signa GEMS1 MR仪扫描,Tlflair序列T1加权、FSE序列T2加权、头部三维时间飞跃(3D TOF)法行颅内MRA成像.确定该处颈内动脉血管位置采用同一层面T1加权、T2加权图像重合对比确定,并与对侧颈内动脉对比.为避免主观因素影响,分别由4名主治医师各自对影像对比确定血管位置并分析特征.
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胎儿磁共振成像序列应用分析
目的 探讨磁共振序列在胎儿磁共振成像(MRI)中的临床应用价值.方法 对2013年6月-2014年6月来院检查的87例中晚期孕妇同时行平衡式快速梯度回波(B-FFE)、单次激发快速自旋回波(SS-TSE)、二维小角度T1WI及扩散加权成像(DWI),根据图像质量、图像伪影和信号特点分析各序列在胎儿MRI中的应用.结果 87例胎儿MRI检查中胼胝体发育不全11例,侧脑室扩张21例,颅后窝池增宽19例,脑室旁囊肿3例,脑实质出血3例,眼球发育异常2例,腹部肿瘤4例,隔离肺1例,心脏畸形1例,蛛网膜囊肿4例,脑穿通畸形合并脑回畸形1例,胼胝体发育不全合并脂肪瘤1例,右肺发育不良1例,脑回畸形2例,正常13例.经比较,B-FFE和SS-TSE两种序列都能清楚显示胎儿各器官的解剖结构和异常病变,但SS-TSE对检查中呼吸伪影较敏感;SS-TSE可用于黑血序列鉴别隔离肺、显示血管与肿块的关系、补充心脏成像;T1WI主要用于出血、脂肪性、肿瘤性病变信号判断;DWI用于鉴别颅内蛛网膜囊肿或表皮样囊肿.结论 B-FFE、SS-TSE、T1WI及DWI序列是诊断胎儿发育异常的基本序列.B-FFE和SS-TSE均能清楚显示胎儿器官的解剖结构和异常病变;SS-TSE作为黑血序列可用于寻找血管与肿瘤的关系;T1WI对于诊断出血、脂肪病变有优势;DWI鉴别缺血缺氧性疾病或蛛网囊肿有很大价值.因此,在胎儿磁共振检查中,4种系列同时应用不易遗漏病灶.
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脆性X染色体与生殖
脆性X染色体(Fragile X)是指x染色体长臂的基因异常,是由于脆性X智力低下基因1(FMR1)5'端重复串联序列(CGG)n在减数分裂过程中异常扩增导致染色体浓缩过程的异常,在Xq27和Xq28带之间形成一个细丝样的部位,使得在该都位容易发生断裂,X染色体的脆性增加.FMR1基因的全突变引起一种严重的智力障碍性疾病,即脆性x综合征.而前突变可以导致脆性x染色体相关的震颤一共济失调综合征、青春期后巨睾丸和卵巢早衰.
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核磁共振SWI序列在肝脏疾病诊断中的应用
近年来,消化系统疾病的发病率呈上升趋势,其中肝脏疾病尤为明显.每年我国因终末期肝病死亡近30万人,包括有十余万人死于肝癌,占全世界肝癌死亡人数的45%左右[1].为此,对于肝脏疾病的早期诊断尤为重要.磁共振成像是诊断肝脏疾病的主要影像学手段之一,因其具有高对比度、多参数和三维成像等特点,不仅可以作定性诊断,更可以提供较为详细的信息以做定量诊断,从而有利于制定治疗方案和评估预后.
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人巨细胞病毒耐药突变及其检测的研究进展
HCMV属于疱疹病毒科,β疱疹病毒亚科,巨细胞病毒属,人疱疹病毒5型.HCMV基因组为线性双股DNA分子,长约230 kb,由长单一序列(UL)和短单一序列(US)构成[1,2].
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由拉米夫定导致乙肝患者HBV YMDD变异主要原因分析
拉米夫定是近年来临床应用较广泛的治疗慢性HBV感染的胞嘧啶核苷类药物,可有效抑HBV多聚酶的逆转录活性,使血清HBV DNA含量明显降低,提高血清HBeAg/HBeAb转换率,改善肝功能,具有较强的抗乙肝病毒的作用.但随着拉米夫定治疗时间的延长,出现耐药及HBV多聚酶逆转录酶区YMDD序列发生变异.
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1.5T MR在肝、胆、胰磁共振成像中的应用
目的:探讨1.5T MR在肝、胆、胰磁共振成像中的临床应用价值.方法:行MR多序列平扫及部分多期动态增强检查497例,采用双盲阅片,分析图象质量,病变特点,部分病例经手术和活检证实.结果:图像质量:满意454例,尚可40例,不满意3例.结论:只要做好患者检查前准备工作,合理利用序列,适当增加扫描序列,和对一些病变常规采用多期动态增强检查,就会为病变发现和诊断提供更多诊断信息.
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水痘-带状疱疹病毒VZV84-7株全基因序列测定及分析
目的 分析我国自行分离的水痘-带状疱疹病毒疫苗株北京株(VZV84-7株)的全基因序列及特征.方法 采用超速离心法获得纯化病毒颗粒,酚-氯仿法抽提病毒基因组DNA后超声破碎,回收1 500～3 000 bp的片段,克隆至质粒pUC18中,构建病毒DNA文库,进行测序及序列分析,并与Dumas野毒株进行比较,绘制种系发育树,分析其与其他株VZV的同源性.结果 VZV84-7株基因组全长125 083 bp,G+C含量为46.1%.基因组各区段长度及G+C含量分别为:UL:104 746 bp,G+C:44.3%;TRL和IRL:各89 bp,G+C:69.7%;Us:5 235 bp,G+C:42.8%;TRS和IRS:各7 462 bp,G+C:59.3%.其R2可变区重复单位的拷贝数为7个,R4可变区为9个,R5可变区为1个.VZV84-7株共有71个ORFs,其中3个基因位于重复序列区,位于IRS的ORF 69～71与位于TRS的ORF 62～64序列完全一致.与Dumas株相比,共有248个核苷酸位置存在差异,大部分突变为单个核苷酸替换,另有部分插入或缺失性突变.其中碱基转换比碱基颠换更常见,发生率分别为66%和34%.种系发育分析结果显示,VZV84-7株与其他株VZV的同源性为95%以上.结论 VZV84-7株具有其独特的基因特征,但与其他株VZV具有较高的同源性.
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抗转铁蛋白受体鼠源性单链抗体基因的构建、表达及初步鉴定
目的利用基因工程技术将鼠源性单克隆抗体WuT9改造成单链抗体.方法从分泌抗CD71单克隆抗体的杂交瘤细胞WuT9中提取总RNA,采用Oligod T为逆转录引物,逆转录合成eDNA第一链,然后分别采用VL和VH框架区的PCR引物,扩增VH(重链可变区)和VL(轻链可变区)DNA片段,利用事先合成的存在于VL下游引物和VH上游引物的部分人工连接子重叠互补序列,将VL和VH的PCR回收产物进行部分重叠PCR(SOE),形成单链抗体基因.后将此基因重组进表达载体pBAD/gⅢ/C中,经L-arabinose(左旋阿拉伯糖)诱导表达并初步鉴定.结果构建出700bp左右的单链基因,并获得阳性重组表达载体克隆,表达产物为相对分子质量27000左右的蛋白分子.结论经因特网查询表明,单链抗体基因重链部分属于小鼠H链可变区Ⅰ A亚组;轻链属于小鼠k轻链可变区Ⅱ亚组,此单链抗体基因的表达产物具有一定的特异结合活性.本研究为抗CD71单链抗体的临床应用打下了基础.
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噬菌体展示抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子的筛选和序列分析
目的从自建的免疫噬菌体展示Fab抗体库中获得抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子,并进行基因序列分析.方法采用纯化的乙型肝炎病毒表面抗原作为包被抗原,对自建的4×105Fab噬菌体抗体库进行富集筛选,从阳性强的次级库中挑选单个克隆菌,分别进行噬菌体ELISA、PCR和限制性内切酶鉴定后,再选取三者均为阳性的克隆菌进行基因序列分析.结果共挑选了60个单克隆菌株,其中噬菌体ELISA阳性有27个,阳性率为45%;PCR鉴定均为相应大小片段;限制性内切酶鉴定表明27个阳性克隆菌中有13个具有约1 500 bp的片段,其余均为约750 bp大小;BstOI酶切鉴定表明各克隆菌的酶切方式不同;选取5个含约1 500 bp片段和2个含约750 bp片段的克隆菌株,经测序均为人免疫球蛋白基因,且重链分别属于VH3、VH4、VH5家族,轻链分别属于L5、L6、L8和012/02家族.结论从自建的免疫噬菌体展示Fab抗体库中成功地获得了抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子.表明所构建的抗乙型肝炎病毒表面抗原的Fab抗体库的抗体基因具有多样性.
关键词： 免疫噬菌体展示Fab抗体库 筛选 噬菌体ELISA 序列 -
人破骨细胞形成抑制因子活性域片段在大肠杆菌中的融合表达
目的在大肠杆菌中高效融合表达人破骨细胞形成抑制因子(Osteoclastogenesis inhibitory factor,OCIF)活性域片段.方法从中国人正常肝细胞系LO2中提取总RNA,利用RT-PCR得到OCIF活性域编码基因cDNA,将其与pMD18-T连接,转化大肠杆菌K802,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18-OCIFAD,经双酶切得到OCIF活性域编码片段,将其插入pMAL-c2载体中,转化大肠杆菌TB1.筛选得到阳性重组表达子后进行诱导表达.结果所获得的OCIF活性结构域编码序列片段经测序与GenBank报道的完全一致.所表达的产物经SDS-PAGE分析可见在相对分子质量60 000处出现一条特殊条带,与预期的相对分子质量一致.Western blot证实了表达产物能与抗人OCIF单抗发生特异性反应.结论已成功地获得了人OCIF活性结构域编码片段的克隆,并实现了其在大肠杆菌中的融合表达.表达产物对体外培养破骨细胞的骨吸收功能有明显的抑制作用.
关键词： 破骨细胞形成抑制因子 基因克隆 序列 表达 大肠杆菌 -
肾综合征出血热灭活疫苗毒株L99株的全基因序列分析
目的了解我国肾综合征出血热疫苗生产毒株L99株的分子特征及抗原性的分子基础.方法设计出不同的引物,用PCR方法提取细胞总RNA,逆转录扩增产物纯化后克隆T载体,纯化后测序,序列用DNASTAR软件拼接,并对其序列进行分析.结果 L99株全基因组由L片段6533个,M 3652个,S 1764个核苷酸组成,分别编码2151、1133、429个氨基酸,L99与同型病毒间同源率高达95.5%～99.4%.结论为研究疫苗毒株的生物学特性、致病机理等提供了分子基础.
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中国狂犬病疫苗CTN-1-V株糖蛋白基因的克隆及序列分析
目的研究CTN-1-V株糖蛋白(GP)基因结构特性.方法利用RT-PCR反应从感染CTN-1-V病毒的Vero细胞中获得糖蛋白全长cDNA片段,并克隆至PCR2.1载体,进行序列测定.结果CTN-1-V株糖蛋白cDNA序列长度为1 575个核苷酸,编码524个氨基酸.与国外已测定的相应序列进行同源性比较,其核苷酸同源性为80.8%～92.4%,氨基酸同源性为82.9%～93.3%.结论进一步了解CTN-1-V株的基因结构,为筛选特异性疫苗株提供理论依据.
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人白细胞介素18的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达
目的在大肠杆菌中高效表达IL-18.方法从人外周血中提取RNA,用RT-PCR方法得到IL-18的cDNA,双酶切将其插入pET-23(b)+载体中,转化大肠杆菌DH5α.筛选阳性菌落,提取质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达.结果所获得人IL-18克隆,经测序与GenBank报道的完全一致.所表达的产物经SDS-PAGE显示在相对分子质量20 000处出现一条特殊条带,与预期的分子量一致.结论已成功获得了人IL-18克隆并在大肠杆菌中表达.
