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人破骨细胞形成抑制因子活性域片段在大肠杆菌中的融合表达
目的在大肠杆菌中高效融合表达人破骨细胞形成抑制因子(Osteoclastogenesis inhibitory factor,OCIF)活性域片段.方法从中国人正常肝细胞系LO2中提取总RNA,利用RT-PCR得到OCIF活性域编码基因cDNA,将其与pMD18-T连接,转化大肠杆菌K802,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18-OCIFAD,经双酶切得到OCIF活性域编码片段,将其插入pMAL-c2载体中,转化大肠杆菌TB1.筛选得到阳性重组表达子后进行诱导表达.结果所获得的OCIF活性结构域编码序列片段经测序与GenBank报道的完全一致.所表达的产物经SDS-PAGE分析可见在相对分子质量60 000处出现一条特殊条带,与预期的相对分子质量一致.Western blot证实了表达产物能与抗人OCIF单抗发生特异性反应.结论已成功地获得了人OCIF活性结构域编码片段的克隆,并实现了其在大肠杆菌中的融合表达.表达产物对体外培养破骨细胞的骨吸收功能有明显的抑制作用.
关键词： 破骨细胞形成抑制因子 基因克隆 序列 表达 大肠杆菌 -
人破骨细胞形成抑制因子成熟肽基因在大肠杆菌中的融合表达
目的:在大肠杆菌中高效融合表达人破骨细胞形成抑制因子(osteoclastogenesis inhibitory factor,OCIF)成熟肽基因.方法:利用PCR从人肝细胞文库中扩增得到OCIF成熟肽编码基因序列,将其与pMD18-T连接,转化大肠杆菌K802,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18-OCIFm,双酶切重组克隆质粒pMD18-OCIFm得到OCIF成熟肽基因,将其定向插入pMAL-c2载体中,转化大肠杆菌TB1.筛选得到阳性重组表达子后进行诱导表达.结果:所获得的OCIF成熟肽基因编码序列经测序与GenBank报道的完全一致.所表达的产物经SDS-PAGE分析可见在相对分子质量80000处出现一条特殊条带,与预期的相对分子质量一致.Western印迹证实了表达产物的正确.表达产物在高剂量(＞120ng/L)时可诱导体外培养小鼠成熟破骨细胞的凋亡.结论:成功获得了人OCIF成熟肽基因的克隆并实现了其在大肠杆菌中的融合表达.
关键词： 破骨细胞形成抑制因子 基因克隆 融合蛋白 -
骨保护蛋白与血管钙化的关系
骨保护蛋白(osteoprogerin,OPG)即骨保护素,也称破骨细胞形成抑制因子(osteoclastogenesis inhibito-ry factor,OCIF),是1997年Tsuda等[1]在人胚胎肺成纤维细胞IMR90的培养基里发现的一种能分泌到细胞外具有抑制破骨细胞(osteoclast,OC)形成的糖蛋白.
