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钱英教授治验12例慢性乙型肝炎患者YMDD变异的临床观察
我国是乙型肝炎病毒(HBV)感染高流行地区,HBsAg携带及慢性乙型肝炎(CHB)病人众多,其中15%～40%的HBV感染者在若干年后可能会发生严重并发症(肝癌、肝硬化、肝衰竭),目前对于CHB尚无特效的治疗方法.
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慢性乙型肝炎病毒基因型与YMDD变异关系
目的探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)基因型与YMDD变异的关系.方法选用200例HBV DNA、HbeAg阳性,血清ALT异常的HBV肝炎患者,服拉米夫定(100mg/d)24个月.用PCR(FQ-PCR)检测HBV DNA,分析乙肝病毒野生型YMDD及突变耐药型YIDD/YVDD,HBV基因分型.结果200例慢性乙肝病人C基因型占39%,B基因型占26%,D基因型占22%,B+C混合基因型占10%,其他占3%,包括1例出现YIDD耐药株.服拉米夫定12个月后,YMDD变异率为6%;24个月后,YMDD变异率为15%.结论乙肝病人HBV基因型以C型为主,次为B型及D型;服拉米夫定后大多数病人的DNA水平明显降低,拉米夫定治疗可加速病毒YMDD变异发生,且与服药时间呈正相关;YMDD突变与乙肝病毒的基因型无关.
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191例慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒YMDD突变型核酸检测结果及分析
目的 慢性乙型肝炎患者服用拉米夫定后其乙型肝炎病毒YMDD的变异结果分析.方法 采用FQ-PCR技术检测临床血清或血浆样本中的乙型肝炎病毒DNA,并同时确定其基因为野生型(YMDD)或耐药突变型(YVDD/YIDD).结果 191例慢性肝炎患者中,有YMDD变异的81例,其中有69例患者服用过拉米夫定.结论 服用拉米夫定的患者其YMDD变异明显高于未服用拉米夫定的患者,二者差异有统计学意义(P＜0.01).
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慢性HBV感染YMDD自然变异的研究进展
HBV DNA聚合酶(polymerase,P)的变异主要发生在YMDD区域,并与拉米夫定的耐药有关.尽管这些变异株会在应用拉米夫定之后出现,但是他们也会"自然产生".很多学者都已证实了YMDD自然变异株的存在.目前检测YMDD变异的方法有多种,但还没有一个完全统一的方法.HBV YMDD变异可能与HBVDNA水平及其基因型等有一定的关系.
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慢性乙型肝炎患者拉米夫定耐药快速检测
目的 探索一种经济、快速、敏感的检测拉米夫定耐药的新方法.方法 采用实时荧光定量PCR法检测145例拉米夫定治疗患者及98例未治疗患者拉米夫定耐药病毒株的变异率,以实验组与对照组中PCR反应循环数的变化(ΔCt)计算病毒的变异率,同时与测序结果对比. 结果 145例患者中,42例出现变异,变异率为5%～100%,6例本实验结果与测序不符合,实时荧光定量PCR结果为出现变异,变异率为5%～20%,该结果经亚克隆证实,而测序未发现变异.98例未接受治疗患者中5例出现变异,变异率为10%～20%.结论 与测序方法相比,实时荧光定量PCR为一种检测乙型肝炎病毒YMDD变异的快速、敏感且经济的方法.
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TaqMan MGB双探针方法检测慢性乙型肝炎病毒YMDD变异的研究
目的 探讨TaqMan MGB双探针方法检测慢性乙型肝炎病毒YMDD变异的可靠性.方法采用荧光定量PCR法检测HBV DNA含量,TaqMan MGB双探针方法和测序方法检测其YMDD变异,以测序方法为参考方法,评价TaqMan MGB双探针方法检测慢性乙型肝炎病毒YMDD变异的可靠性.结果 246例HBV DNA阳性患者血清标本中,TaqMan MGB双探针方法阳性检出率为100%,100例正常对照全部为阴性;YMDD无突变106例,YMDD有突变(YIDD变异+YVDD变异)140例,与核酸测序方法比较,符合率为100%;该方法经过敏感度实验,低检出下限为1×103拷贝/ml.结论 TaqMan MGB双探针方法能便捷、灵敏、特异地检测YMDD基序变异情况,适用于临床检测慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗的YMDD基序变异.
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拉米夫定和α-干扰素序贯治疗e抗原阴性乙肝患者及其对拉米夫定耐药突变的抑制
目的:评价拉米夫定和α-干扰素序贯治疗e抗原阴性乙肝患者的功效.方法:本研究共进行了162例e抗原阴性的慢性乙肝患者的治疗研究.其中98例患者采用拉米夫定单独用药,100 mg/d,持续治疗48周(B组).64例患者先单独用拉米夫定,100 mg/d,持续治疗20周,然后联合用药,增加α-干扰素500万U,每周3次,持续治疗4周后,改为单独用α-干扰素(500万U,每周3次),持续治疗24周(A组).所有的患者都再持续治疗24周.结果:经过48周的治疗,ALT水平复常和HBV-DNA降至<1 000 copies/ml的患者比例在两组中并没有明显不同.拉米夫定单独治疗组ALT水平复常和HBV-DNA<1 000 copies/ml的比例为55.1%,干扰素序贯治疗组两项的比例为59.36%和56.25%.而在治疗72周时,ALT水平复常的比例A组(53%)明显高于B组(36%)(P<0.05).而且此时患者中发生拉米夫定耐药突变的比例B组(22.45%)明显高于A组(P<0.05).结论:用拉米夫定和α-干扰素序贯治疗慢性乙肝患者与用拉米夫定单独治疗同样有效,序贯治疗更加抑制了拉米夫定耐药突变的产生.
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乙肝病毒YMDD变异与血清标志物的相关性
目的研究HBV-DNA P基因变异在乙肝患者中的临床意义,为临床诊断和治疗提供依据.方法对263例乙肝患者采用PCR法检测HBV-DNA P基因的变异.结果大三阳组与小三阳组之间差异显著(χ2=10.52,P＜0.01).前者YIDD、YVDD和其他变异分别为21.13%、4.93%、8.45%.后者为9.62%、1.9%、3.85%.结论PCR是检测基因突变的高效方法之一,具有极高的灵敏性和可靠性.HBV-DNA位点变异对判断疾病的稳定与进展及病情转归有重要作用.
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中药联合拉米夫定治疗慢性乙肝的临床对照观察
目的:观察中药联合拉米夫定治疗慢性乙肝的治疗作用.方法:病例为慢性乙肝,伴有HBV- DNA阳性、HBeAg阳性及ALT为2 ULN～5 ULN.治疗组为中药联合拉米夫定23 例,单一拉米夫定治疗作对照组23 例,疗程为12个月.检测ALT、HBV-DNA、HBeAg、HbeAb及YMDD变异.结果:治疗组血清转换率为65.2%,明显高于拉米夫定对照组26.1%(P＜0.01).中药组无1 例YMDD变异,低于拉米夫定对照组13.0%.结论:中药联合拉米夫定治疗慢性乙肝可提高HBeAg血清转换率,并有可能降低YMDD变异率.
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乙型肝炎病毒YMDD变异株的出现及其耐药性
全世界人口中约有5%受到乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染[1],HBV持续感染是导致乙型肝炎慢性化、肝硬变和原发性肝癌的重要因素[2].20世纪90年代初,美国科学家在研究艾滋病的治疗时发现:DNA聚合酶抑制剂可抑制HBV复制,从此为慢性乙型肝炎的治疗打开了新局面.其中研究和应用广泛的是拉米夫定(lamivudine).拉米夫定因服用方便、安全、抗病毒作用确切、不良反应少而引起临床医师的广泛重视.但随着临床研究的深入,因长期应用而出现的耐药问题已成为目前研究的焦点.本文就拉米夫定耐药变异株的出现、耐药机制和对临床经过的影响进行综述.
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乙型肝炎病毒基因变异与转氨酶关系的探讨
目的:探讨乙型肝炎病毒基因变异与血清转氨酶水平的关系.方法:采用实时荧光PCR熔解曲线法检测948例乙型肝炎病毒感染者的YMDD变异,其中342例(YMDD变异株84例,YMDD野生株132例,YMDD阴性126例),同时检测其ALT、AST水平.结果:948例患者中检出YMDD变异株126例,其中单一变异株104例,混合变异株22例.342例中YMDD变异株、YMDD野生株和YMDD阴性的ALT、AST异常率分别为45.2%、53.0%、19.0%及42.9%、43.9%、17.5%.结论:乙型肝炎患者其乙肝病毒基因发生变异与其ALT、AST异常水平比较无统计学意义.
关键词： 乙型肝炎病毒基因变异 YMDD 转氨酶 -
未经核苷酸类似物治疗的乙型肝炎病毒YMDD变异的相关研究
目的:研究未予核苷(酸)类似物(NA)治疗的乙型肝炎患者,其体内乙肝病毒(HBV)P基因酪氨酸-蛋氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸(YMDD)变异,对于病毒自身复制及感染者肝脏生化指标的影响.方法:收集未经NA抗病毒治疗的334例HBV感染者血清,检测HBV YMDD变异,及HBV-DNA、乙型肝炎病毒ESL原(HBeAg)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)等指标.结果:体内病毒发生YMDD变异的患者,血清HBV-DNA载量,AST、ALT值均低于感染病毒未变异的患者(P<0.05).结论:变异后的HBV病毒DNA复制能力下降,血清转氨酶低于未变异者,HBeAg阳性者发生HBV YMDD变异率高于阴性者.
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乙型肝炎患者肝组织损害程度与YMDD变异的相关
目的 探讨拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中肝组织损害程度与HBV YMDD变异的相关因素.方法 对应用拉米夫定治疗的30例慢性乙型肝炎患者进行肝组织病理学诊断,同时进行肝功能、乙肝病毒血清学标志物、HBV DNA、HBV YMDD变异检测.结果 ALT异常率为70%,HBV YMDD变异发生率为30%,肝组织损害程度不影响其治疗效果.结论 拉米夫定治疗慢性乙型肝炎,随着治疗时间延长,其变异发生率越高;肝组织损害程度不影响其抗病毒疗效.
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应用实时荧光PCR方法检测乙型肝炎病毒基因YMDD变异
[目的]建立一种检测乙型肝炎患者YMDD变异株的方法,并且研究应用拉米夫定治疗及未用药治疗的乙型肝炎初发患者中YMDD变异株发生的情况.[方法]应用实时荧光聚合酶链反应(PCR)方法对30例未经过任何药物治疗的乙肝初发患者,50例使用拉米夫定治疗1年患者,50例使用拉米夫定治疗两年患者和20例使用拉米夫定与干扰素联合治疗两年的患者同时进行YMDD变异株的检测.[结果]通过对熔解曲线的分析,在未经任何治疗的乙肝初发患者中检出YMDD变异株2例,占6.67%;拉米夫定治疗1年的患者中检出YMDD变异株13例,占26.00%;拉米夫定治疗两年患者中检出YMDD变异株25例,占50.00%;拉米夫定和干扰素联合治疗的患者中检出YMDD变异株9例,占45.00%.[结论]在未经任何药物治疗的乙肝患者中即存在YMDD变异株,并且随着使用拉米夫定时间的延长在不断增加,且联合用药并不能减少变异株的发生,因此对乙肝患者在用药前,及用药过程中进行YMDD变异株的检测是非常必要的.而实时荧光PCR方法具有简便、快速、灵敏、经济的特点,特别适用于临床对YMDD变异株的检测,从而及时的指导临床用药.
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拉米夫定耐药感染者HBV基因与YMDD变异的相关性探讨
目的 探讨拉米夫定耐药感染者HBV基因型与YMDD变异的相关性.方法 采用PCR扩增后测序的方法,对162例拉米夫定耐药感染者进HBV基因型的分析.实时荧光定量PCR法检测HBV YMDD变异及HBV DNA载量.率的比较采用χ2检验法,两组均数间的比较采用t检验法.结果 162例拉米夫定耐药感染者中,B基因型102例(63.0%),C基因型60例(37.0%).YMDD变异111例(68.5%),其中YIDD变异30例(18.5%),YVDD变异32例(19.7%),YIDD/YVDD混合型变异49例(30.3%).统计结果显示,不同性别之间HBV基因型分布没有显著性差别(P＞0.05).B型患者的年龄(29.7岁±10.2岁)显著低于C型患者的年龄(35.3岁±11.3岁),差异有统计学意义(P<0.05).YMDD变异的发生率在B、C基因型之间差异无统计学意义(P>0.05).C基因型患者血清的HBV DNA含量(6.08±0.71)显著高于B基因型组(5.73±0.90)(P<0.05),而血清ALT水平没有显著性差别(P＞0.05).结论 拉米夫定耐药感染者YMDD变异与基因型无关.但C基因型患者平均年龄、病毒载量显著高于B基因型,可能是导致CHB患者对拉米夫定耐药的重要因素.
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由拉米夫定导致乙肝患者HBV YMDD变异主要原因分析
拉米夫定是近年来临床应用较广泛的治疗慢性HBV感染的胞嘧啶核苷类药物,可有效抑HBV多聚酶的逆转录活性,使血清HBV DNA含量明显降低,提高血清HBeAg/HBeAb转换率,改善肝功能,具有较强的抗乙肝病毒的作用.但随着拉米夫定治疗时间的延长,出现耐药及HBV多聚酶逆转录酶区YMDD序列发生变异.
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HBV基因型及P基因变异与拉米夫定耐药的关系
为探讨拉米夫定耐药与HBV基因型和P基因变异的关系,用基因测序的方法分析基因型与YMDD变异,用荧光定量的方法,检测HBVDNA定量,研究结果表明C基因型比其它基因型更易耐药,耐药的问题不仅仅是YMDD变异,P基因可能诱导其它基因的变异,导致拉米夫定抗病毒治疗的疗效减低.
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拉米夫定耐药患者乙型肝炎病毒多聚酶区基因突变的检测分析
目的 建立以基因测序检测乙型肝炎病毒(HBV)多聚酶区基因突变的方法,并分析拉米夫定耐药者HBV多聚酶区基因主要耐药突变的分布情况.方法 采用巢式PCR方法对174例拉米夫定耐药患者血清HBV多聚酶区进行扩增,对PCR产物进行直接测序,将YMDD突变阳性与阴性的病例分别进行HBV耐药基因突变的分析和比较.结果 本研究154例YMDD突变阳性的患者中有10种突变类型,其中以rtM204I突变多见,为46例(29.9%),其次为rtL180M/M204V(26.6%)、rtL180M/M2041(17.5%)、rtV173/L180M/M204V(13.0%)、rtM204V(2.6%)、rtL180M/M204V/M204I(5.8%)、rtV173L/L180M/M204V/M204I(1.3%)、rtV173L/M204IrtM204I/M204V(1.3%)、rtM204I/M204V(1.3%).另外,rtM204V联合rtL180M或rtV173L的突变率较rtM204I联合rtL180M或rtV173L显著增高.从rtL180M突变角度来看,rtL180M与rtM204V的联合突变率高,其次为rtL180M联合rtM204I突变,rtL180M与rtL173M的联合突变率低.从rtV173L突变角度来看,rtV173L联合rtM204V或rtL180M突变的发生率均高于rtV173L联合rtM204I的突变率,且rtV173L突变多联合rtM204V和rtL180M突变同时发生.结论 拉米夫定耐药株的氨基酸突变复杂多样,需要对拉米夫定耐药多个相关位点进行检测.
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基因芯片检测乙型肝炎病毒YMDD变异的临床应用
目的评估基因芯片法检测乙型肝炎病毒(HBV)YMDD变异的临床应用.方法用基因芯片法检测60份乙型肝炎病人的血清,其中20份同时用基因测序法和快速PCR法检测,用Ridit方法分析检测结果.结果拉米夫定治疗52周的20个标本中,用基因芯片法检测出14份有YMDD变异株,与快速PCR法检出结果一致,测序法仅检出9例有变异株.结论基因芯片法检测YMDD变异是临床有用的方法.
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联合拉米夫定3个月后单用阿德福韦酯治疗乙型肝炎后肝硬化
众所周知,抗病毒是治疗慢性乙型肝炎的关键.拉米夫定抗HBV效果确实,起效快,安全性和耐受性好,但长期治疗会产生YMDD耐药变异.
