首页 > 文献资料
-
牛胚胎骨骼肌卫星细胞的分离、培养及诱导分化
目的 分离培养鲁西黄牛胚胎骨骼肌卫星细胞,并研究其生物学特性.方法 取30 ～ 50 d龄鲁西黄牛胚胎四肢骨骼肌,联合Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶及差速贴壁法分离获得骨骼肌卫星细胞,通过免疫细胞化学染色和RT-PCR检测卫星细胞表面标志desmin、MyoD、c-Met、Myf5、pax7,并研究其生物学特性.结果 鲁西黄牛卫星细胞传代培养至15代以上,冻存后细胞活率为97.90％士0.96％；免疫细胞化学染色检测卫星细胞标记物desmin,MyoD呈阳性表达；RT-PCR检测desmin、c-Met、Myf5、pax7呈阳性表达；克隆形成率为56.39％士1.41％；染色体核型分析显示分离培养的细胞均来源于正常牛胚胎个体；通过不同的诱导剂将牛卫星细胞成功地诱导为成骨细胞和神经元样细胞,分别进行茜素红,甲苯胺蓝染色呈阳性表达,RT-PCR检测成骨细胞标记物osteopontin,Ⅰ型胶原蛋白和神经细胞标记物MAP2和nestin均呈阳性表达.结论 本试验成功地分离获得了牛卫星细胞,并具有自我更新增殖和多向分化潜能.
-
干细胞在骨质疏松治疗中的应用进展
骨质疏松症是常见的骨代谢疾病之一，是骨组织的数量和质量的异常，以骨密度的减少及骨微结构的退变为主要特征，导致骨骼脆性增加及易发生骨折的全身性疾病[1]。虽然详细的病理机制仍不清楚，但是由于激素分泌急剧减少而造成的成骨细胞和破骨细胞之间的不均衡在骨质疏松症的发生中起着重要的作用[2]。应用雌激素治疗骨质疏松，会产生许多副作用。由于在骨质疏松性人群中，骨密度降低和骨折愈合能力的减弱可能是与间充质干细胞的缺失导致的成骨细胞分化和增殖能力减弱有关[3]。因此，干细胞移植可以作为骨质疏松症的一种治疗手段，干细胞是一类具有多潜能特性的细胞，而且其在特定的诱导条件下能向多种细胞系分化，来源丰富，获取途径并不十分困难。干细胞移植能从根本上改善病情，直接或间接增加成骨细胞的数量，目前常用于治疗骨质疏松的干细胞有脂源性干细胞、骨髓间充质干细胞等，现将新进展综述如下。
-
人脂肪干细胞(ADSCs)体外培养的研究及应用进展
干细胞是一类具有自我更新与增殖能力的细胞,按其分化阶段不同分为胚胎干细胞与成体干细胞,目前对成体干细胞的研究较为广泛.人的脂肪干细胞(adipase derived stem cells,ADSCs)是来源于脂肪组织的干细胞,具有自我更新及多向分化的能力,在适宜诱导条件下可以分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等.自从2001年ZUK[1]首次通过吸脂术抽取脂肪组织悬液培养出多能干细胞,ADSCs因其取材方便,一次取材获取的细胞数量大,对供体刨伤小等优点已成为近年来种子细胞的研究热点.
-
影响前脂肪细胞增殖与分化的若干因素
在脂肪组织工程中,前脂肪细胞是被公认的种子细胞,它是一类具有增殖分化能力的特异化前体细胞,其作用持续于人的一生,与脂肪移植成活率有密切关系.脂肪细胞的增殖分化能力对体外构建脂肪组织起着非常重要的作用,获取足够多的组织并使获得的细胞有较强的增殖能力,是众多研究者期待解决的问题.本文拟就影响脂肪细胞增殖分化的若干因素结合文献综述如下.
-
不同剂量射线对大鼠肺泡巨噬细胞增殖能力的影响
目的:观察不同剂量射线对大鼠肺泡巨噬细胞增殖能力的影响,为放射性肺损伤细胞模型建立奠定前期基础.方法:使用高能直线加速器X射线以不同剂量射线(0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy)照射大鼠肺泡巨噬细胞,分别于照射后24 h、48 h、72 h后观察细胞镜下形态,并用MTT法检测细胞增殖能力.结果:在不同时间节点,一个视野内,照射组细胞数量均少于正常组(0 Gy组),从细胞形态来看,0 Gy组细胞表现为大鼠肺泡巨噬细胞呈串样生长的特点,而照射组细胞则呈单个分散样生长;经MTT法检测,照射后各时间节点测定OD值分别为:0 Gy组,0.139、0.165、0.205;2 Gy组,0.112、0.127、0.151;4 Gy组,0.109、0.121、0.138;6 Gy组,0.088、0.094、0.099.其中不同剂量射线照射组与正常组相比,吸光度值均有差异,P=0.000<0.05;不同时间点,24 h,48 h,72 h,各组吸光度之间均有差异,P=0.000<0.05;不同剂量照射组之间两两相比,2 Gy组与4 Gy组差异不明显,P=0.052>0.05,6 Gy组与其他两组之间差异显著.结论:射线会对大鼠肺泡巨噬细胞的生长特性和增殖能力产生影响,使其串样生长特性消失,其中6 Gy剂量射线对细胞所产生的影响大.
-
miR－100抑制肝癌细胞恶性生物学行为的分子机制
目的：研究miR－100对肝癌细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制。方法：采用实时定量PCR检测miR－100在36例原发性肝细胞癌和对应癌旁组织中的表达及其与患者临床病理参数之间的关系；在肝癌细胞系中上调／下调miR－100的表达，检测其对肝癌细胞增殖能力及成瘤能力的影响。miRNA靶基因预测软件分析miR－100下游靶基因。结果：miR－100在肝癌组织中低表达并且与肝癌的恶性程度与患者的预后相关。过表达miR－100能够抑制肝癌细胞的恶性生物学行为；干扰miR－100促进肝癌细胞的恶性生物学行为。靶基因预测软件分析显示miR－100能够靶向IGF1R抑制该基因的表达。结论：miR－100在肝癌组织中低表达，能够抑制肝癌细胞的恶性生物学行为并且与患者的预后相关，有望成为潜在的肝癌治疗的分子靶点。
-
GST对转染APP695基因PC12细胞形态和增殖能力的影响
目的:观察APP695MT基因转染对PC12细胞形态和增殖能力的影响及植物雌激素三羟基异黄酮(Genistein,GST)的干预作用,初步探讨GST对表达APP695MT基因PC12细胞的保护作用.方法:以pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695MT表达载体转染正常PC12细胞,电镜观察各组细胞形态学改变,细胞计数方法检测各组细胞增殖能力差异.结果:电镜下观察可见正常对照组与空载组细胞形态无差异,细胞形态结构正常,无明显病理改变；APP695转染组细胞胞体肿胀,线粒体髓样变和空泡样变,胞核扭曲凹陷,异染色质边集；GST干预组较APP695转染组细胞形态明显改善,线粒体髓样变和空泡样变明显减少,胞核陷明显减轻.细胞计数结果显示,在各细胞计数时间点,与正常对照组比较,空载组细胞数目无显著变化(P＞0.05),APP695转染组PC12细胞数目减少(P＜0.01),细胞生长增殖能力明显受到抑制；GST各剂量处理组与APP695转染组比较细胞生长增殖能力均有不同程度的增强(P＜0.01).结论:GST能改善突变型APP695基因转染引起的PC12细胞病理变化,并提高其增殖能力,对转染细胞有一定的保护作用.
-
丁酸钠对牙周膜干细胞增殖能力的影响
目的:探究丁酸钠(NaB)对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖能力的影响.方法:体外分离培养hPDLSCs,分别采用含NaB终浓度为0、40、200、1 000、5 000 μmol/L的NaB α-MEM处理72 h后,倒置相差显微镜下观察各组细胞的形态改变;MTT法检测各组细胞的增殖能力;流式细胞仪检测不同浓度NaB对细胞周期的影响.结果:40、200 μmol/L的NaB对hPDLSCs的形态均无明显影响,而当NaB浓度为1 000、5 000 μmol/L时,其细胞数目均较对照组明显减少,细胞形态也发生了明显变化,表现为扁平、伸长或多角状,且浓度越大变化越明显;当NaB浓度低于200 μmol/L时对hPDLSCs的增殖能力均无明显影响(P＞0.05),而当NaB浓度为1 000、5 000 μmol/L时,hPDLSCs增殖能力明显被抑制(P＜0.05),其中5 000 μmol/L组的抑制作用强(P＜ 0.05);40 ～5 000 μmol/L NaB作用于hPDLSCs后,浓度依赖性地增加G2/M期细胞的比例.结论:一定浓度范围的NaB能影响hPDLSCs的形态和能力,使细胞周期停滞于G2/M期.
关键词： 人牙周膜干细胞(hPDLSCs) 组蛋白去乙酰化酶 丁酸钠 增殖能力 -
神经干细胞的治疗应用研究进展
哺乳动物的中枢神经系统再生仅限于胚胎时期和出生早期,即成年动物脑和脊髓内的神经细胞只会呈逐渐减少趋势,而不会更新或替代[1,2].因此,神经干细胞的研究已经成为一大热点.由于神经干细胞具有较强的增殖能力,并且能分化为神经元、星形胶质以及少突胶质细胞,可以用于修复损伤的神经系统,所以对于细胞来源的研究,利用移植干细胞治疗神经退行性疾病这一应用引起人们极大关注.
-
骨髓干细胞心肌移植治疗缺血性心脏病的研究进展
缺血性心脏病是全世界范围内发病率和病死率高的疾病.目前对于缺血性心脏病主要有药物、介入以及手术等治疗方法.这些方法只能恢复一部分心肌的再灌注、改善心肌缺血和心衰症状、提高患者的生活质量,但却不能逆转已坏死的心肌,远期效果仍欠理想[1].这主要是由于局部心肌细胞因缺血、缺氧发生大量不可逆性坏死,而成熟心肌细胞虽然现在已被证实不是终末分化细胞[2],但仅有极为有限的再生和增殖能力,不能完全替代损伤的心肌而恢复收缩功能.
-
骨髓血细胞形态浅谈
血细胞发生是造血干细胞经增殖、分化直至成为各种成熟血细胞的过程.造血干细胞是生成各种血细胞的原始细胞,又称多能干细胞.造血干细胞在一定的微环境和某些因素的调节下,增殖分化为各类血细胞的祖细胞,称造血祖细胞,它也是一种相当原始的具有增殖能力的细胞,但已失去多向分化能力,只能向一个或几个血细胞系定向增殖分化,故也称定向干细胞血细胞形态学检验是指应用光学显微镜辨认经瑞氏染色后的外周血和骨髓涂片的细胞形态.可以了解骨髓中血细胞的生成、成熟、释放的程度及病理细胞形态或异常细胞出现的意义,是血液病基础诊断与常规血液学检验的重要项目,是基本的简便实用的检查方法.此方法虽然较为传统,但血细胞形态学检验的质量高低是许多疾病尤其是血液病的诊断、鉴别诊断及预后判断的关键[1].而血细胞形态学检验的主观性较强,检验人员需要积累丰富的工作经验才能胜任.
-
足细胞损伤的研究进展
足细胞(podocyte)是位于肾小球毛细血管基底膜外侧的脏层上皮细胞,因其胞浆在基底膜表面形成伪足样突起而得名,足突之间的裂孔膜是肾小球滤过的后一道屏障,因此足细胞的损伤将导致蛋白尿的出现.足细胞是一种高度分化的细胞,分裂增殖能力有限,因此一旦损伤丢失,就很难再生.过去足细胞的体外研究工作开展很少,直到上世纪90 年代中期Mundel 等用转基因方法建立了永生代小鼠足细胞系,才使得对足细胞结构、功能的认识和其在肾小球疾病中作用及机理的研究取得了突破性进展.近年来,大量研究提示足细胞损伤与蛋白尿,肾小球硬化关系密切,现就近年来有关足细胞损伤的病因、机制等有关研究综述如下.
-
miRNA-210在人脑胶质瘤中表达的临床意义及其生物学效应
目的:探究微小核糖核酸-210(miRNA-210)在脑胶质瘤患者组织中的表达特征和临床意义,及其对胶质瘤细胞增殖侵袭能力的影响.方法:收集我院神经外科收治的42例脑胶质瘤及20例良性脑膜瘤患者的病变组织,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测其中miRNA-210表达水平并采用Kaplan-Meier生存分析比较其与患者预后的关系.利用体外转染小干扰RNA(siRNA)技术干扰人脑胶质瘤细胞U251的miRNA-210表达,MTT法检测细胞增殖能力变化,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力变化.结果:miRNA-210在29例高级别脑胶质瘤中的表达高于13例低级别脑胶质瘤及20例良性脑膜瘤的表达(P＜0.05);Kaplan-Meier生存曲线示,高表达miRNA-210的患者较低表达的患者预后不良(P＜0.05);成功转染siRNA至U251细胞中,干扰组U251细胞(U251 siRNA-210)的miRNA-210表达相比对照细胞(U251 control)显著下降,U251 siRNA-210细胞在72 h时MTT溶液相对吸光度显著低于U251 control细胞,U251 siRNA-210细胞穿透基质膜细胞数也显著少于U251 control细胞.结论:miRNA-210的表达与脑胶质瘤恶性程度及患者预后密切相关,其可促进胶质瘤细胞的增殖侵袭能力,是脑胶质瘤中重要的促癌基因.
-
氟化物对体外培养的小鼠成骨细胞增殖能力的影响
目的:观察氟化钠对体外培养的成骨细胞的增殖能力的影响. 方法:采用四唑盐(MTT)比色法,观察不同剂量氟化钠在不同时间对体外培养的小鼠成骨细胞增殖活力的影响.结果:剂量为2.5、5.0 mg/L的氟化钠作用2 d时,可使成骨细胞增殖活力较对照组明显增强;≥20 mg/L时随着氟化钠剂量的增加和作用时间的延长,成骨细胞的增殖活力明显减弱. 结论:氟化钠对成骨细胞的增殖呈现双向调节,且随时间的延长对细胞增殖能力的抑制逐渐增强.
-
软骨细胞的永生化及其生物学特性
软骨由软骨细胞、胞外基质（胶原纤维、蛋白多糖）及水组成。其中后两者所占比例较大，软骨细胞数量较少，所以从软骨中获得软骨细胞来源有限［1］；并且软骨细胞增殖能力低，代谢缓慢，体外培养对密度高度依赖，且为有限增殖，传代到第9代左右，细胞出现老化现象，使传代难以为继。特别是软骨细胞在体外长期培养有去分化的趋势，表型（特别是Ⅱ型胶原）难以保持［2］。上述这些问题，都是软骨细胞库建立及软骨细胞工程必须解决的难题。因此,众多学者一直试图建立一种能够长期培养、表型稳定的永生化软骨细胞。 一、 永生化的定义及意义 所谓“永生化”（immortalization），就是指细胞处于连续的细胞周期而终止其发育进程，通俗一点说就是“使细胞获得了无限的增殖能力”［3］。建立永生化细胞至少具有以下几点优势：①可以在体外研究软骨细胞的分化与生长及增殖之间的关系。②永生化的软骨细胞可以考虑作为软骨细胞工程的细胞库或基因治疗的靶细胞，前者为软骨组织工程提供大量的经过预先处理和优化的软骨细胞，真正做到“组织工程化”；后者则使基因治疗应用于软骨细胞成为可能，因为正常软骨细胞传代、增殖有限的缺点妨碍了基因转染阳性靶细胞的挑选、鉴定及回输。③可以作为药理或毒理研究的标准细胞。④有利于对各项实验结果进行比较，因为各个实验室的软骨细胞来源不同，培养方法各异，传代千差万别，使得实验结果难以比较。
-
骨髓间充质干细胞修复关节软骨缺损研究进展
关节软骨损伤在临床上很常见,由于关节软骨的自身修复能力很差,关节软骨一旦损伤即很难修复,继而会发生不可逆的病理变化,造成关节的退行性改变,严重影响患者的生活质量.目前,关节软骨损伤临床上尚无有效的治疗方法.近年发展起来的一门新兴学科-组织工程学,通过利用少量的种子细胞经过体外培养扩增,并附着在一定的支架材料上,移植到体内而形成新的有生命力的组织.骨髓间充质干细胞(Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)用作种子细胞具有增殖能力强,多向分化潜能(可以分化为骨、软骨、肌肉、脂肪等多种组织),而且具有采集方便、对机体损伤小的特点,是软骨组织工程理想的种子细胞.
-
骨髓基质干细胞成骨的研究进展
组织工程技术是目前解决大块骨与软骨组织缺损修复难题有前景的手段之一,种子细胞是组织工程学中的重要环节.骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)是一类具有多向分化潜能的组织干细胞,在体内外适当的诱导环境下可以分化为骨、软骨、脂肪、肌肉、神经、肌腱及韧带等多种组织细胞.该细胞群来源充足,取材方便,增殖能力强,可在体外大规模扩增而不丢失多向分化潜能,并且异体移植免疫排斥反应小,目前已成为应用较广泛的重要种子细胞之一.本文就骨髓基质干细胞成骨问题进行阐述.
-
瘢痕形成机制的发育生物学思考
创面愈合后瘢痕的形成和增生一直是烧伤治疗中一个难以解决的问题,目前在瘢痕防治方面尚无有效的方法,而在基础研究方面对于瘢痕的形成机制研究较多.据报道,有学者针对皮肤创面成纤维细胞的特性进行了研究,证实创面愈合过程中成纤维细胞表现出强烈的增殖能力,认为这是瘢痕产生的原因[1].也有文献证实创面愈合过程中胶原大量分泌、沉积,其中成人以Ⅰ型胶原纤维为主,由此认为胶原的异常分泌是瘢痕产生的原因[2].
-
低浓度氧化铈纳米材料对肝癌细胞增殖能力的影响
目的：研究不同低浓度氧化铈纳米材料（ CNPs）对肝癌细胞增殖能力的影响。方法体外培养3株不同种类的肝癌细胞（ Huh7、HepG2、7721），分别加入不同浓度（0．005、0．01、0．05、0．1、1μg／mL）的CNPs。采用CCK8检测CNPs对肝癌细胞增殖能力的影响；qRT-PCR检测CNPs对肝癌细胞凋亡相关基因的影响；流式细胞术分析CNPs对肝癌细胞周期的影响；裸鼠体内成瘤实验证实低浓度CNPs对肝癌细胞成瘤的影响。结果 CCK8实验显示低浓度CNPs对肝癌细胞的增殖有不同程度的促进作用，其中0．01μg／mL CNPs促增殖作用明显；qRT-PCR结果显示低浓度CNPs可以抑制肝癌细胞的凋亡；流式细胞术分析却并未发现CNPs对细胞周期的影响；体内成瘤实验证实低浓度CNPs可以增强肝癌细胞的成瘤能力。结论低浓度CNPs可以显著提高肝癌细胞的增殖能力。
-
活心灵汤对兔血管平滑肌细胞增殖的干预作用
血管平滑肌细胞(VSMCs)的过度增殖是动脉粥样硬化及高血压等疾病的病理变化之一.VSMCs分为合成型和收缩型两种表现,收缩型呈分化状态,不能增殖;合成型是去分化的细胞,具有很强的增殖能力.因此寻找药物、基因等有效治疗方法干预、抑制VSMCs异常增殖,已成为心血管疾病研究预防的重要手段.我们根据前期研究,对具有益气活血祛淤功效的活心灵汤进行观察,研究其对兔血管平滑肌细胞增殖的干预作用,以期阐明其防治心血管疾病的作用机理.
