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大鼠线粒体ATPase8基因的多态性与表达的研究
目的: 探讨正常与休克大鼠线粒体ATPase8基因的多态性及基因表达的变化,为休克的防治提供理论基础.方法:用透射电镜观察大鼠小肠线粒体形态学变化 .用PCR扩增与PUCm-T质粒重组、转入JM109大肠杆菌、Pst 1酶切、提取.用PCR扩增、纯化后测序,进行正常与休克组大鼠线粒体突变分析.用RT-PCR检测正常与休克组大鼠mRNA表达的变化.结果:电镜观察证明在正常组未见大鼠小肠细胞线粒体的异常改变,休克组可见线粒体肿胀,嵴减少,髓样结构出现.线粒体ATPase-8基因多态性分析发现:参照"Rattus norvegicus,Wistar r at” mtDNA分析,正常大鼠小肠上皮细胞mtDNA第7868位碱基A突变为G(A7868G,)占2/6;C7871T ,6/6;7767-7768之间插入G, 1/6.失血性休克5 h 大鼠小肠上皮细胞线粒体突变分析:C7 871T,2/3;T7772C, 占2/3;T7863C, 占1/3.7772位氨基酸不变,仍为苯丙氨酸;编码的第7863位氨基酸由苏氨酸变成丙氨酸.RT-PCR显示休克5 h 大鼠小肠上皮细胞mtDNA ATPase -8基因 mRNA表达比正常大鼠显著减弱(P<0.01).讨论:近年文献报导,肠道是休克的重要靶器官,休克时肠道线粒体呼吸功能明显下降,但其分子机制尚需探讨.本研究发现休克时大鼠小肠上皮细胞线粒体肿胀、嵴消失,提示休克时线粒体损伤是肠道细胞损伤的关键.AT Pase6-8基因是F1F0-ATPase 复合物的编码基因,本文检测了6 个转化菌落的肠道线粒体正常DNA ATPase-8的突变点及突变率,证明本Wistar大鼠和Rattus norvegicus,Wistar rat 存在差异,7871位C变为T,7868位存在中性突变,本结果为探讨缺血缺氧时ATPase-8基因的改变提供了基础.本文报告了失血性休克缺血缺氧大鼠肠上皮细胞线粒体基因及基因表达的改变,证明失血性休克5 h大鼠肠上皮细胞线粒体ATPase 8基因的多点突变,及由此突变引起的氨基酸的改变.此改变必然导致蛋白质结构的变化,使ATPase-8功能降低.研究还发现,休克时大鼠小肠上皮细胞线粒体ATPase-8基因的mRNA 表达显著下降.提示休克时AT P下降、ATP酶活性下降与ATPase-8基因改变和基因表达显著减少有关.结论:正常大鼠肠上皮细胞线粒体ATPase 8基因存在多态性,休克时小肠上皮细胞线粒体ATPase-8基因改变及表达水平的下降是导致ATPase 酶的质和量发生改变以及能量合成下降的重要原因.
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儿童急性白血病p16基因纯合子缺失和点突变的实验研究
目的:探讨p16基因纯合子缺失和点突变与儿童急性白血病(AL)发生、发展及预后的关系.方法:用聚合酶链反应(PCR)、DNA单链构象多态性(SSCP)分析和DNA测序技术研究53例初治和复发儿童AL及30例对照组p16基因纯合子缺失和点突变的情况.结果:儿童AL p16基因纯合子缺失及点突变为28.30%(15/33例),对照组未发现缺失及突变.ALL组p16基因纯合子缺失为35.00%(14/40例),其中HR-ALL为47.06%(8/17例),SR-ALL为8.33%(1/12例),复发ALL为45.45%(5/11例),未见点突变;ANLL组未见纯合子缺失,点突变1例,为7.69%(1/13例),测序分析发现其位于第2外显子(exon 2A)49密码子,发生错义突变,由GCC突变为ACC,由苏氨酸取代丙氨酸.结论:①p16基因失活与儿童AL,尤其与儿童ALL的发生、发展关系密切.②在儿童ALL中,p16基因纯合子缺失是基因失活的主要形式,点突变罕见.③在儿童ANLL中,p16基因纯合子缺失、点突变均罕见.④p16基因失活可能成为预测儿童AL病程进展、复发、预后的指标之一.
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病态肥胖患者胃减容手术1例麻醉体会
患者男,29岁,因病态肥胖,于全身麻醉下行腹腔镜胃减容术.患者身高178 cm,体重179 kg,BMI 53 kg/m2,腰围160 cm,臀围159 cm.丙氨酸氨基转移酶122 U/ L,天冬氨酸氨基转移酶113 U/ L,B 超检查示脂肪肝,胸部X 线摄片示心影增大,其余检查正常.术前12 h禁食,术前30 min给予阿托品0.5 mg、苯巴比妥钠0.1 g肌肉注射.入手术室后将患者安全固定,开放外周静脉,常规心电图及脉氧饱和度监测.
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系统性红斑狼疮合并弥漫性肺泡出血1例
患者男,18岁,因"发热、乏力、腹泻、泡沫尿40余天,呼吸困难3 d"于2007年5月22日入院.患者于2007年4月初无明显诱因出现乏力、腹泻、泡沫尿,伴发热,高达38.9℃,1周后出现眼睑水肿,查血白细胞2.36×109/L,尿蛋白(++++),狼疮抗体阳性,抗Smith抗体阳性,4月23日行肾脏穿刺活检,确诊为系统性红斑狼疮,给予甲强龙80 mg静滴治疗21 d后,5月15日出现茶色尿、巩膜黄染,查丙氨酸氨基转移酶589 U/L,天冬氨酸氨基转移酶375 U/L,给予甲强龙0.5g冲击治疗3天无明显好转,5月19日出现呼吸困难,给予BiPAP辅助通气.
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滥用氯胺酮致膀胱炎2例
例1,患者男,23岁.间断出现尿痛及尿频1个月于2008年6月初诊.否认有冶游史.患者主动承认服食氯胺酮两年余.肝功能检查发现丙氨酸氨基转移酶(ALT)47 U/L(正常值0~40),谷氨酰转肽酶(GGT)68 U/L(正常值11~50).首诊查尿常规未见异常,但随诊10个月内复查尿常规5次,2次出现尿蛋白(+)和(+++),2次出现WBC(+)和(+++).
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肝移植术后血浆丙氨酸水平异常原因分析
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"大三阳"如何才能转阴
"大三阳"转阴治疗的目标并非是要求三者都转成阴性,只有其中HBeAg(乙型肝炎e抗原)能转阴,一般讲当HBeAg转阴后不久,抗HBe(乙型肝炎e抗体)可转成阳性,这叫血清转换(很少见到HBsAg的血清转换),是血清免疫学完全应答的指标;而病毒学完全应答的指标则是HBVDNA(乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸)阴转;此外,还有生物化学的完全应答指标就是丙氨酸氨基转氨酶(ALT)的复常.
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江门地区五市无偿献血者ALT、HBsAg、抗-HCV、梅毒特异性抗体检测结果分析
血清丙氨酸氨基转移(ALT)、乙肝表面抗原(HBsAg)、抗-HCV抗体、梅毒螺旋体特异性抗体(TP)检测,对甲型肝炎(HAV)、乙型肝炎(HBV)、丙型肝炎(HCV)、梅毒的诊治具有重要临床价值,在血站系统也是非常重要的检测指标.
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运动对胆红素的影响
根据大庆市教委要求,2010年对全市高一新生进行一周军训,军训结束后进行体检,体检项目有丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰转肽酶(γ-GT)、总胆红素(TBIL),现报道如下.
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浅析转氨酶升高
何为转氨酶转氨酶是体内氨基酸代谢过程中必不可少的“催化剂”(催化酶),在肝功化验单上主要有两种,一种叫丙氨酸转氢酶(谷丙转氨酶,GPT),代号为ALT;另一种叫天门冬氨酸转氨酶(谷草转氨酶,GOT),代号为AST.(有些医院化验项目还有GGT,即谷氨酰转肽酶).
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聚乙二醇干扰素α-2a致咳性哮喘合并细菌感染1例
患者,男,58岁,具有2年病毒性肝炎(乙丙重叠)、酒精性肝病史,因"反复乏力、右上腹阵发性刺痛,再发1周"于2006年11月2日入院.体格检查生命体征无异常.肝功能示血清总胆红素(TBIL)19.0μmol/L,直接胆红素(DBIL)9.8μmol/L,白蛋白(ALB)41.7g/L,丙氨酸氨基转移酶(AIJT)60 U/L.天门冬氨酸氨基转移酶(AST)5l U/L,γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)343 U/L;肝炎病毒学指标示HBsAg(+),HBeAb(+),HBcAb(+),HBV-DNA低于检测值,抗HCV(+).
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力肽在造血干细胞移植中的应用及护理观察
力肽(Dipeptiven DPT)是专用于保护肠粘膜结构并增强和调节肠道功能,直接作用于肠道细胞,使其活力增强的一种新药,其活性成份为N(2)-L-丙氨酸-L-谷氨酰胺(Gln),在体内迅速转化为Gln而被利用.我院使用的是华瑞制药的产品,每100mlDPT含Gin20g,相当于L-丙氨酰8.2g,L-谷氨酰胺13.46g.通过比较DPT组和对照组的营养状况、并发症、免疫功能等,旨在探讨其在造血干细胞移植病人中的应用价值.
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糖尿病高渗状态下横纹肌溶解症1例报告
患者,男,50岁,因腹痛15天,双下肢无力,意识障碍2天于2004年9月20日入院.患者15天前进食牛肉后出现上腹痛、腹胀、呕吐、腹泻.在当地医院查肝肾功:尿素氮(BUN)10.22 mmol/L,肌酐(CREA)125.1μmol/L,Na+145.7 mmol/L,K+3.41 mmol/L,CI-106.9 mmol/L,丙氨酸氨基转移酶(ALT)89.1 U/L,天门冬氨酸氨基转移酶(AST)56 U/L,白蛋白(ALB)34.8g/L,CK 148.1 U/L,CKMB 2.09 U/L.
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四川省竹沥类药品原料用竹的鉴别及其质量的评价
目的 通过对四川省竹类资源的实地考察、品种鉴定以及资料查询,确定药用竹原料的主要植物基源.方法 采用TLC鉴别慈竹,用HPLC法测定其含量,寻找慈竹中可用以鉴别其品质的成分,进而建立相应的检测方法.结果 慈竹中所含丙氨酸可作为其定性定量检查的指标成分,0.143 ~7.15 μg丙氨酸与峰面积的线性关系良好(r=0.9999),样品的平均回收率为99.29%,对照品溶液在8h内稳定,方法的精密度和重复性良好.结论 四川省竹沥类药品的原料为慈竹的鲜竹秆,可通过测定慈竹中的丙氨酸来控制其质量.
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PLS-UV法同时测定谷丙甘氨酸胶囊中的3种氨基酸
目的 建立一种同时测定谷丙甘氨酸胶囊中谷氨酸、丙氨酸和甘氨酸的新方法.方法 根据氨基酸与Cu2+的络合反应,采用偏小二乘法(PLS)结合紫外可见光度法同时测定谷丙甘氨酸胶囊中3种氨基酸的含量.结果 标准模拟混合样品的回收率为99.0% ~ 99.4%.结论 所用方法不需要分离供试品,测量体系稳定,操作简便,对吸收光谱重叠较严重的多组分氨基酸复方制剂的同时测定具一定实用价值.
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旁路代谢酶抑制剂对林可霉素发酵的影响
目的 研究林可链霉菌的发酵工艺,提高林可霉素的产量.方法 在林可链霉菌发酵产林可霉素的过程中,在一定时间添加一定量的旁路代谢酶抑制剂丙氨酸和三甲胺,用生物效价法测定发酵液中林可霉素的产量.结果 在发酵开始时添加0.01%的丙氨酸,同时在24h时添加0.02%的三甲胺,使林可霉素的产量提高26%.实验发现该种添加方法抑制了糖酵解途径中的丙酮酸激酶和莽草酸途径中的邻氨基苯甲酸合成酶的酶活,使菌体内积累高浓度的林可霉素的前体酪氨酸及L-多巴,进而提高了林可霉素的产量.结论 该种发酵工艺使林可霉素产量得到显著提高.
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多食苦瓜导致不孕
苦瓜含甾体皂甙、豆甾醇皂甙等成份,还含有谷氨酸、丙氨酸等多种氨基酸.它具有很好的降血糖功能,对前列腺癌、艾氏腹水癌等有很强的抑制作用.故倍受人们欢迎,是一种时尚的蔬菜.
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薄层扫描法测定小鼠脑内4种神经递质的含量
用双波长薄层扫描法测定小白鼠脑内的γ-氨基丁酸、丙氨酸、谷氨酸和牛磺酸四种神经递质的含量,测定波长为λS=500nm,λR=700nm,展开剂为苯酚-甲酸-水(18∶2∶1),显色剂为1%茚三酮乙醇液;75℃~80℃烘干,结果斑点分离清晰,Rf值适中.四种成分的回收率分别为100.7%(γ-氨基丁酸),101.1%(丙氨酸),100.5%(谷氨酸),100.4%(牛磺酸).
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人源性羧肽酶A突变体基因的构建及表达
[董轲,郝晓柯,刘新平,张盈华,季少平. 细胞与分子免疫学杂志,2001;17(2):106-04] 目的从人正常肺组织中提取羧肽酶A基因并进行定点突变. 方法从人正常肺组织中提取RNA,并进行逆转录得到人羧肽酶A(hCPA). 以计算机模拟hCPA的结构,寻找合适的突变位点. 用PCR重叠延伸法,对羧肽酶A进行定点突变,并在大肠杆菌中表达. 结果序列分析表明,所获hCPA的核苷酸序列为1251 bp,编码417个氨基酸. hCPA突变体(mhCPA)基因的1126位核苷酸由G变为A,其余核苷酸序列均未发生变化,相应的此突变体蛋白质的376位核苷酸残基由丙氨酸突变为苏氨酸. 将mhCPA基因在E.coli中诱导表达3 h后,表达量高达30%左右. 结论成功地构建并表达了mhCPA基因,为hCPA在肿瘤的“抗体导向酶-前药疗法”(ADEPT)中的应用奠定了基础.
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人源性羧肽酶A突变体基因的构建及表达
目的 从人正常肺组织中提取羧肽酶A基因并进行定点突变. 方法 从人正常肺组织中提取RNA,并进行逆转录得到人羧肽酶A (hCPA). 以计算机模拟hCPA的结构,寻找合适的突变位点. 用PCR重叠延伸法,对羧肽酶A进行定点突变,并在大肠杆菌中表达. 结果 序列分析表明,所获hCPA的核苷酸序列为1251 bp,编码417个氨基酸. hCPA突变体(mhCPA)基因的1126位核苷酸由G变为A,其余核苷酸序列均未发生变化,相应的此突变体蛋白质的376位核苷酸残基由丙氨酸突变为苏氨酸. 将mhCPA基因在E.coli中诱导表达3 h后,表达量高达30%左右. 结论 成功地构建并表达了mhCPA基因,为hCPA在肿瘤的“ 抗体导向酶-前药疗法 ” (ADEPT)中的应用奠定了基础 .(潘伯荣)