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人源性羧肽酶A突变体基因的构建及表达

潘伯荣

摘要: [董轲,郝晓柯,刘新平,张盈华,季少平. 细胞与分子免疫学杂志,2001;17(2):106-04] 目的从人正常肺组织中提取羧肽酶A基因并进行定点突变. 方法从人正常肺组织中提取RNA,并进行逆转录得到人羧肽酶A(hCPA). 以计算机模拟hCPA的结构,寻找合适的突变位点. 用PCR重叠延伸法,对羧肽酶A进行定点突变,并在大肠杆菌中表达. 结果序列分析表明,所获hCPA的核苷酸序列为1251 bp,编码417个氨基酸. hCPA突变体(mhCPA)基因的1126位核苷酸由G变为A,其余核苷酸序列均未发生变化,相应的此突变体蛋白质的376位核苷酸残基由丙氨酸突变为苏氨酸. 将mhCPA基因在E.coli中诱导表达3 h后,表达量高达30%左右. 结论成功地构建并表达了mhCPA基因,为hCPA在肿瘤的“抗体导向酶-前药疗法”(ADEPT)中的应用奠定了基础.

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