首页 > 文献资料
-
TaqMan-MGB探针检测骨髓增殖性疾病患者JAK2V617F突变
目的 建立实时定量PCR检测骨髓增殖性疾病(MPD)患者JAK2V617F突变的方法.方法 利用TaqMan-MGB探针,检测MPD患者JAK2V617F突变,部分标本用等位基因特异的定性PCR及测序的方法同时进行验证.结果 374份患者和对照的骨髓或外周血标本被用于JAK2V617F突变分析.其中76例PV、115例ET和19例MF患者JAK2V617F突变的检出率分别为70%、51%及58%;65例急性髓性白血病中仅1例为阳性,而38例慢性髓性白血病、30例急性淋巴细胞白血病、8例慢性淋巴细胞白血病、7例非霍奇金淋巴瘤及16例正常供者骨髓细胞中的检出率均为0.结论 JAK2V617F突变在我国MPD患者中是广泛存在的.利用TaqMan-MGB探针进行实时定量PCR的方法可快速、准确地检测JAK2V617F突变.
-
BCR-ABL阴性MPN患者CALR、JAK2及MPL基因突变分析
目的 探讨BCR-ABL融合基因阴性骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者CALR、JAK2及MPL基因突变情况及临床特征.方法 选取2009年1月至2014年1月于江苏省人民医院就诊的246例BCR-ABL阴性MPN患者,其中真性红细胞增多症(PV)48例,原发性血小板增多症(ET)171例,原发性骨髓纤维化(PMF)27例.采用PCR扩增产物直接测序法检测患者骨髓或外周血CALR、JAK2V617F、JAK2外显子12和MPL W515L/K基因突变的发生情况并分析临床特征.结果 在246例BCR-ABL阴性MPN的患者中,CALR、JAK2 V617F、JAK2外显子12、MPL W515L/K突变阳性患者分别为52例(21.1%)、121例(49.2%)、0例(0)和2例(0.8%),并且这4种突变不同时出现.在PV患者中,JAK2 V617F突变阳性患者的白细胞和血小板计数均高于JAK2 V617F野生型患者,而血红蛋白浓度低于JAK2 V617F野生型患者(均P<0.05);在ET患者中,JAK2 V617F突变阳性患者的白细胞计数、血红蛋白、危险分层和血管事件发生率高于CALR突变阳性患者(均P<0.05);在PMF患者中,JAK2 V617F突变阳性患者血红蛋白浓度高于CALR突变阳性患者(均P<0.05).结论 BCR-ABL阴性MPN的患者中,CALR突变阳性患者与JAK2 V617F突变阳性患者相比,骨髓增殖水平更低、发生血管事件风险更低、危险分层更低,提示较好的预后,其致病机制还有待于进一步研究.
-
骨髓增殖性疾病患者JAK2基因V617F突变频率、磷酸化JAK/STAT蛋白表达水平及临床意义
目的 探讨145例骨髓增殖件疾病患者JAK2基因V617F突变率;并分析JAK2基因V617F突变阳性患者的临床特点及意义.方法 应用PCR产物直接测序和等位基因特异性PCR技术检测145例骨髓增殖性疾病患者JAK2基因V617F突变.并应用Western blot方法测定JAK2基因V617F突变阳性患者JAK2蛋白、磷酸化JAK2蛋白及磷酸化STAT5蛋白表达;对JAK2基因V617F突变阳性与突变阴性的骨髓增殖性疾病患者临床资料进行比较,评价JAK2基因V617F突变阳性的临床意义.结果 ①本组病例真性红细胞增多症(PV)、特发性骨髓纤维化(ET)、原发性血小板增多症(IMF)患者JAK2基因V617F突变率分别为92%(64例中59例)、58%(43例中25例)和50%(38例中19例),等位基因特异性PCR检测较PCR产物直接测序有更高的JAK2基因V617F检出率[PV84%(64例中53例)、MIF 44%(43例中19例)、ET 39%(38例中15例)].②JAK2基因V617F突变阳性患者外周血单个核细胞磷酸化JAK2及磷酸化STAT5蛋白表达较突变阴性者明显增高(P<0.05).③JAK2基因V617F突变阳性骨髓增殖性疾病患者发病平均年龄偏大;平均白细胞计数高于突变阴性患者;血小板计数小于突变阴性患者;脾脏较突变阴性患者小;JAK2基因V617F突变阳性PV、ET和IMF患者血栓性事什发生率分别为17%、32%和16%;而突变阴性PV、ET和IMF患者血栓性事件发生率分别为0、16%和5%.结论 骨髓增殖性疾病患者有较高的JAK2基因V617F突变发生率,且JAK2基因V617F突变阳性患者易发生血栓事件.
-
评价AS-LNA-qPCR法检测JAK2 V617F突变率的临床应用价值
目的 建立一种定量检测外周血细胞酪氨酸激酶2(JAK2)基因V617F突变率的等位基因特异性实时荧光定量PCR(AS-qPCR)方法.方法 在AS-qPCR基础上,引入1条锁核酸(LNA)修饰的寡核苷酸探针,用以选择性抑制AS-qPCR中突变引物对野生等位基因的非特异性扩增,定量检测JAK2 V617F突变率,称之为AS-LNA-qPCR法.通过AS-LNA-qPCR法测定样本的循环阈值(Ct值),根据AS-LNA-qPCR法检测不同JAK2 V617F突变率标准品的Ct值,绘制标准曲线,根据标准曲线直接获得检测样本中JAK2 V617F突变率.我们对该方法标准品的批内、批间检测结果进行了评价,并对623名表观健康人外周血细胞基因组DNA中JAK2V617F突变进行检测,以探讨其临床应用价值.结果 AS-LNA-qPCR法定量检测JAK2 V617F突变率的下限可达到0.01%,批内、批间平均变异率分别是6.3%和8.6%.对623名表观健康人外周血细胞基因组DNA中JAK2 V617F突变检测显示,其中19名(3%)表现健康人JAK2 V617F突变阳性,突变率变化范围为0.01% ~5.49%.结论 AS-LNA-qPCR方法直接定量检测外周血细胞JAK2 V617F突变率,具有检测灵敏度高和重复性好的特性,适合临床上用于对骨髓增殖性疾病诊断、疾病进程评估和疗效的监测.
-
135例骨髓增殖性肿瘤患者JAK2基因突变的定量研究
目的 研究JAK2基因突变在骨髓增殖性肿瘤(MPN)中的发生率和突变类型.并对突变转录本水平进行定量分析,初步探讨其临床意义.方法 采用突变序列扩增系统PCR(ARMS-PCR)法检测JAK2突变的发生率及其突变类型;采用毛细管电泳法定量分析JAK2突变转录本水平.结果 135例MPN患者共检出95例JAK2V617F阳性,总阳性率为70.4%;真性红细胞增多症(PV)患者JAK2V617F突变发生率为97.4%,原发性血小板增多症(ET)为59.6%,3例特发性骨髓纤维化(IMF)中2例阳性;95例突变患者中纯合突变36例,杂合突变59例,其中PV患者纯合突变发生率为47.3%,高于ET患者的18.1%(P<0.05).纯合突变者其JAK2V617F突变转录本水平高于杂合突变者(P<0.05),杂合型PV患者的JAK2V617F突变转录本水平高于杂合型ET患者(P<0.05);JAK2V617F突变高表达组(转录本水平为70%~100%)的平均年龄高于低表达组(转录本水平为47.3%~70.0%),且两者年龄均较JAK2V617F阴性组为高(P<0.05);年龄<60岁者其JAK2V617F转录本水平低于≥60岁者(P<0.001);PV患者中,JAK2V617F高表达组其白细胞计数高于低表达组(P<0.001),ET患者中,JAK2V617F高表达组其白细胞计数高于低表达组(P<0.05),且二者均较阴性组为高(P<0.05),血红蛋白水平在高表达组与低表达组间差异无统计学意义(P>0.05),但二者均较阴性组为高(P<0.05).101例患者进行了染色体检查,未发现核型异常与JAK2V617F突变之间存在相关性.结论 ARMS-PCR可作为检测JAK2V617F突变较灵敏的方法 ,结合毛细管电泳可用于此突变的定量分析以及临床MPN的诊断和微量残留病的检测.
关键词: 骨髓增殖性疾病 DNA突变分析 突变序列扩增系统PCR 电泳 毛细管 -
356例骨髓增殖性疾病的相互转化及其并发症
目的研究骨髓增殖性疾病(MPD )的并发症及相互转化,为临床治疗提供依据.方法临床观察、随访356例骨髓增殖性疾病患者,其中原发性血小板增多症(ET)78例、原发性骨髓纤维化(MF)93例、真性红细胞增多症(PV)185例,对这些患者的并发症及其转化进行统计学分析.结果 356例MPD中共有101例(28.5%)病程中出现栓塞,81例(22.8%)并发出血,60例(6.9%)出现高血压症状,20例(5.6%)合并冠心病,3例(0.8%)并发溶血,1例(0.3%)并发消化道溃疡,2例(0.6%)并发结石,1例(0.3%)并发骨髓坏死.24例(6.7%)(ET 9例、PV 15例)转化为骨髓纤维化,2例(0.6%)(ET 1例、MF 1例)转化为红细胞增多症,3例(0.8%)(MF 1例、PV 2例)转化为血小板增多症,5例(1.4%)(ET 2例、MF 3例)转化为急性白血病,1例(0.3%)(ET 1例)转化为多发性骨髓瘤.11例(3.1%)在观察期中死亡,5例(1.4%)死于急性白血病;2例(0.6%)死于消化道大出血,死于心肌梗死及感染性休克各1例(0.3%),2例(0.6%)死因不明.结论除慢性粒细胞白血病外的MPD病程中栓塞、出血为主要并发症,ET、MF及PV可以相互转化,也可以发展为其他血液恶性肿瘤.
-
30例早期骨髓增殖性疾病疑似患者JAK2V617F和MPLW515L/K突变基因的表达
目的 探讨BPC及Hb水平轻微升高,但未达真性红细胞增多症(PV)或原发性血小板增多症(ET)诊断标准的患者JAK2V617F及MPLW515L的表达情况与某些临床特征的相关性在早期骨髓增殖性疾病(MPD)中的诊断价值.方法 采用等位基因特异性PCR方法,检测30例BPC或Hb值偏高的早期MPD疑似患者JAK2V617F和MPLW515L/K基因表达,并定期随访其病情进展.结果 30例患者中有14例(46.7%)存在JAK2V617F突变,且此14例患者中有5例(35.7%)曾有血栓史;30例患者中无一例存在MPLW515L表达;有效随访22例,JAK2V617F阳性12例,阴性10例,12例阳性患者经过6至24个月后均发展为典型的MPD,而10例阴性患者只有2例发展成MPD.结论 JAK2V617F阳性表达有可能作为诊断早期MPD的重要依据.
关键词: 基因 JAK2V617F MPLW515L/K 突变 骨髓增殖性疾病 -
骨髓增殖性疾病JAK2基因V617F点突变研究
JAK2基因属于JAKs(Janus kinases)家族,是一种胞内酪氨酸蛋白激酶.多种细胞因子如白细胞介素3(IL-3)、红细胞生成素(EPO)等通过JAKs-STAT途径进行胞内信号的转导,终促进或调节细胞的增殖.
-
JAK2V617F突变在骨髓增殖性疾病中的初步研究
骨髓增殖性疾病(myeloproliferative disorders,MPD)是骨髓中一系或多系细胞异常增殖,外周血出现一种或多种血细胞增多为特征的克隆性造血干细胞疾病.
-
8p11骨髓增殖综合征一例报告——附文献复习
8p11骨髓增殖综合征(8p11 myeloproliferative syndrome,EMS)是一种非典型的骨髓增殖性疾病,同时具有外周血白细胞计数明显增高、骨髓中髓系细胞增生、嗜酸性粒细胞增多和淋巴母细胞性淋巴瘤的特征.我们对1例EMS患者进行临床和实验室研究,并结合文献进行讨论.
-
不典型慢性粒细胞白血病细胞形态学和组织病理学特征研究
不典型慢性粒细胞白血病(aCML)是Ph染色体及bcrabl融合基因均阴性的克隆性造血异常疾病[1].该病不是传统CML的变异,而是初诊时骨髓增生异常和骨髓增殖性疾病同时表现的白血病.
-
原发性骨髓纤维化的治疗进展
原发性骨髓纤维化(PMF)是造血干细胞异常所致的克隆性骨髓增殖性疾病,与真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)同属于BCR-ABL阴性的骨髓增殖性肿瘤(MPN).其发病机制可能与造血祖细胞的获得性突变引起激酶信号途径失调、异常细胞因子表达和克隆性骨髓增殖有关.PMF以骨髓纤维组织增生并髓外造血为特点,出现进行性贫血、脾脏肿大、外周血幼稚细胞、泪滴状红细胞和骨髓干抽,伴有发热、乏力、盗汗、消瘦等全身症状.PMF在MPN中预后差,中位生存期约5年,终将进展为骨髓衰竭或转化为急性白血病.
-
JAK2靶向抑制剂治疗骨髓增殖性疾病的研究现状与前景
JAK2 V617F点突变的发现使得人们对bcr-abl阴性骨髓增殖性疾病(MPD)的发病机制有了新的认识,分子机制的明确促进了分子靶向抑制剂治疗MPD的研究进程,多种选择性和非选择性针对JAK2的抑制剂正处在临床前研究中,有些已经进入临床验证阶段,初步结果显示这些抑制剂体内外均有抑制JAK2相关信号途径的作用.我们就JAK2靶向抑制剂研究的现状与前景作一综述.
-
特发性骨髓纤维化发病机制的研究进展
特发性骨髓纤维化(IMF)属慢性骨髓增殖性疾病(CMPD)中的一种,以脾肿大,外周血中出现幼稚粒细胞、幼稚红细胞、泪滴形红细胞,骨髓纤维组织增生,髓外造血,骨髓微血管密度增加及持续动员造血干/祖细胞为特征.骨髓成纤维细胞的异常增殖是对造血细胞克隆性增生的继发性反应.目前多数学者认为这些反应是由异常巨核细胞和单核细胞克隆性增生及其释放的细胞因子所介导的[1-2].部分IMF合并免疫功能异常,故亦有学者认为此类IMF为一种与克隆性造血干细胞疾病无关的免疫异常性疾病--自身免疫性骨髓纤维化[3].随着JAK2V617F等基因突变发现于CMPD患者,对IMF发病机制的了解又深入了一步.
-
真性红细胞增多症研究进展
真性红细胞增多症(PV)是一种慢性克隆性骨髓增殖性疾病.现就其发病机制、诊断及治疗的进展综述如下.
-
酪氨酸激酶获得性突变JAK2 Val617Phe与骨髓增殖性疾病
骨髓增殖性疾病(MPD)是克隆性造血干细胞疾病,以骨髓中一系或多系细胞增殖、外周血出现过多的成熟或幼稚细胞为特征.MPD主要包括下列一组疾病:真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、原发性骨髓纤维化(IMF)、慢性粒细胞白血病(CML)以及少见亚型如嗜酸粒细胞增多症(HES)、慢性嗜酸粒细胞白血病(CEL)等.已明确9号和22号染色体易位所产生的融合基因bcr-abl是CML发病的关键环节[1];近年来的研究表明,HES中也存在特征性分子遗传学改变--FIP1L1-PDGFRA融合基因[2,3].但PV、ET、IMF等其他bcr-abl阴性的MPD基础研究进展相对缓慢.2005年的几项研究表明,在大多数PV以及部分ET和IMF中存在高致病性的获得性突变--酪氨酸激酶JAK2Val617Phe.该突变的发现令人瞩目,为揭示MPD的发病机制提供了新的思路.
-
原发性血小板增多症研究的进展
原发性血小板增多症(essential thrombocythemia,ET)是骨髓增殖性疾病(MPD)的一种,人们认识该病已有70年的历史.按欧美5国对ET的流行病学调查,发病率为0.59/10万~2.53/10万,近20年来发病率增加了3.2倍,这与血细胞自动计数仪普遍应用,较易发现无症状的患者有关,但也可能反映了实际发病数的增多[1].近年来,对MPD(包括ET)发病的分子机制的研究取得了重大突破,临床上有了大量的总结资料,新的有效药物不断问世,使我们对ET本质的认识进一步深入,临床诊断与治疗水平有了新的提高.
-
八例成人骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病不能分类临床分析
为了更好地定义疾病实体,2001年WHO修改了造血和淋巴系统肿瘤的分类标准.定义了一种新的类型,即骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病(MDS/MPD).其兼有MDS和MPD的临床和主要血液学特点,即一系或多系髓系细胞具有MDS的无效造血和病态造血,外周血出现该系血细胞减少,又具有另一系或多系髓系细胞出现MPD的有效增殖,引起外周血该系血细胞增多.MDS/MPD包括四种独立的疾病:慢性粒.单核细胞白血病(CMML)、不典型慢性粒细胞白血病(aCML)、幼年型粒.单核细胞自血病(JMML)和MDS/MPD不能分类(MDS/MPD-U)[1].
-
不典型骨髓增生异常综合征诊断探讨
骨髓增生异常综合征(MDS)是一组获得性异质性恶性克隆性疾病.WHO造血和淋巴组织肿瘤分类方案(2001)中对MDS的FAB分类方案进行了较大修正,使较多特殊病例有所归属,如MDS可以外周血细胞一系减少,骨髓也可一系病态造血;根据原始细胞比例和Aure小体的有无将:RAEB分为Ⅰ、Ⅱ两类;具有MDS和骨髓增殖性疾病(MPD)双重表现的疾病归入新的MDS/MPD中;增加了染色体的检测等[1-3]剖.
-
不典型慢性髓系白血病的临床研究——附九例报告
不典型慢性髓系白血病(atypical chronic myeloid leukemia,aCML)是一组造血干/祖细胞恶性克隆性疾病,以往称之为Ph染色体阴性的慢性髓系白血病(Ph-CML).鉴于aCML兼有血细胞发育异常和骨髓异常增殖的特点,在2001年WHO公布的造血和淋巴系统肿瘤的新分类标准中,将其归属于骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病(myelodysplastic/myeloproliferative disease,MDS/MPD)中.