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三叶肽因子在膀胱癌中的表达及临床意义
目的 探讨三叶肽因子(trefoil factor,TFF)在膀胱癌组织中的表达及临床意义.方法 采用实时荧光定量PCR和免疫组化染色法检测2013年1-12月于我院行手术切除的50例浅表性膀胱癌组织(其中20例为初发膀胱癌,30例为复发膀胱癌)及10例癌旁正常组织中TFF1、TFF2及TFF3的表达情况.男32例,女18例.年龄45～73岁,平均57岁.病理T分期:pTa期25例(50％),PT1期25例(50％),病理分级:低级别24例(48％),高级别26例(52％).结果 TFF1、TFF2、TFF3mRNA在初发膀胱癌组织中相对表达量中位值分别为2.04(1.86 ～2.22)、0.88(0.11 ～ 1.6)、0.92(0.11 ～1.73),在复发膀胱癌组织中相对表达量中位值分别为2.22(1.94～ 2.22)、2.32(0.22～4.42)、2.45(0.35 ～4.55),而在癌旁正常组织中分别为0.60(0.52 ～0.68)、0.58(0.18 ～0.98)、0.56(0.16 ～0.96).癌旁正常组织中的TFF1、TFF2、TFF3 mRNA低于膀胱癌组织(均P＜0.05),且复发膀胱癌组织中,TFF2、TFF3 mRNA的相对表达量高于初发膀胱癌组织(均P＜0.05),而复发膀胱癌组织与初发膀胱癌组织中的TFF1 mRNA表达量差异无统计学意义(P＞0.05).TFF1、TFF2、TFF3在初发膀胱癌组织中阳性表达率分别为55％(11/20)、60％ (12/20)、60％(12/20),低于复发膀胱癌组织中阳性表达率[分别为87％ (26/30)、83％(25/30)、93％(28/30),均P＜0.05].TFF1在高级别和低级别膀胱癌组织中的阳性表达率差异无统计学意义[分别为71％ (17/24)与77％(20/26),P=0.88];TFF2、TFF3在高级别膀胱癌组织中的阳性表达率[分别为83％(20/24)、83％ (20/24)]高于低级别膀胱癌组织中的阳性表达率[分别为65％ (17/26)、77％(20/26),均P＜0.05].随访结果显示,50例患者的中位无复发生存时间(RFS)为31个月(18 ～ 38个月).其中,TFF1强阳性[中位值25个月(21 ～35个月)]和弱阳性者的RFS[中位值27个月(22 ～35个月)]短于TFF1阴性者[中位RFS为31个月(26 ～33个月),均P＜0.05],而TFF1强阳性与弱阳性者的RFS差异无统计学意义(P=0.50).TFF2强阳性[中位值24个月(18 ～ 27个月)]和TFF2阴性者的RFS[中位值30个月(30 ～3t个月)]短于弱阳性患者[中位值33个月(27 ～38个月)],均P＜0.05].TFF3强阳性[中位值24个月(18 ～27个月)]和弱阳性者的RFS[中位值28个月(24 ～31个月)]短于TFF3阴性者[中位值31个月(28 ～32个月),均P＜0.05],且TFF3强阳性者RFS短于弱阳性者(P＜0.05).结论 TFF1、TFF2、TFF3在膀胱癌组织中的阳性表达率高于正常组织,且在复发膀胱癌组织中高于初发膀胱癌组织.其中TFF1、TFF2可能参与膀胱癌的复发及进展,而TFF3的作用需进一步大样本验证.
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外周血PSA mRNA早期诊断前列腺癌转移
用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测前列腺癌(PCa)患者外周血PSA mRNA，以早期诊断前列腺癌转移，报告如下。 资料和方法 PCa患者14例。年龄50～80岁，平均67岁。JWP分期：A 期2例，B期5例，C期3例，D期4例。对照组包括：BPH患者15例，年龄55～83岁，平均65岁；非癌患者10例，男5例，女5例，年龄28～55岁，平均37岁。PCa患者通过血清PSA测定、直肠指诊、CT、同位素骨扫描进行诊断，并在术前1周、指诊后2周采血。所有病例均经病理检查。
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以SSX基因mRNA作为肿瘤标志物检测循环中的肝癌细胞
目的探讨检测肝细胞癌(HCC)患者外周血中SSX基因mRNA的临床意义.方法以简易"降落"PCR(stepdown RT-PCR)方法检测HCC患者外周血中SSX基因mRNA的表达,并对SSX基因的表达与临床指标和预后的关系进行了分析.结果 42例肝癌患者肝癌组织中SSX基因mRNA阳性率为85.7%(36/42),而癌旁组织、肝硬化组织和正常肝组织均未发现有SSX基因的表达.外周血标本中,有17例可检测到SSX基因的表达,占40.5%.肝癌组织不表达SSX基因者以及健康志愿者的外周血中未检测到其表达.外周血中SSX基因的表达与年龄、性别、肿瘤分化程度、TNM分期、肿瘤大小、血清AFP水平和HBV感染无显著相关性(P>0.05).除肝组织不表达SSX和死于并发症的7例患者外,在随访7.7±5.4月的过程中,16例外周血中表达SSX基因mRNA者有8例出现了复发和/或转移,其中7例已经死亡,另1例带瘤生存,而19例阴性者仅2例出现了复发和/或转移,二者相比差异有显著性(P=0.028).结论外周血中SSX基因表达与复发、转移密切相关,SSX基因可作为检测HCC患者循环肿瘤细胞的标志基因.
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术后复发转移的大肠癌血路播散检测
血路播散是大肠癌转移的一种主要方式，为大肠癌复发转移的主要根源［1］。我们使用靶向细胞角蛋白20（CK20）的逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术，对40例术后复发转移的大肠癌患者外周血和骨髓微转移癌细胞同时进行了检测，旨在探讨大肠癌血路播散与术后复发或转移的关系及其在预测愈后、指导随访监测方面的临床价值。
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肾移植慢性排异患者载脂蛋白B基因的多态性
肾移植术后慢性排异，是影响移植肾长期存活的关键。脂蛋白是影响肾移植慢性排异的因素之一［1］。载脂蛋白B（apo?B）基因是已知基因中具多态性的基因，它的变异可导致脂蛋白代谢紊乱及动脉粥样硬化。移植后，有进行性脂蛋白异常的患者，发生慢性排异的危险性升高，其脂蛋白图谱与动脉粥样硬化相似［2］。本研究采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术PCR-RFLP，就apo?B基因多态性与慢性排异的关系进行探讨。
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4例单卵双胎中一患先天性法洛四联症另一正常
单卵双胎（monozygotical twins，MZ）同患单发(isolated)先天性法洛四联症及同患其他综合征并存法洛四联症病例，国内外报道较多。但其中一患先天性法洛四联症另一正常的单卵双胎病例，发生率极低〔1〕。我院自1992年以来据不完全统计共发现4对，3对中的病儿经手术证实，另1对中的病儿依据超声心动图诊断。所有单卵双胎中正常的1名儿童均经超声心动图检查未发现任何心脏畸形，现报告如下。 临床资料 首先根据出生时胎盘的数目、胎儿性别、ABO血型及RH血型是否相同来初步判断是否为单卵双胎。然后利用微卫星标记法确定两者是单卵双胎〔2〕。 4对单卵双胎中的病儿均为法洛四联症，其中男3对，女1对。例1：男，4岁；单卵双胎中病儿经超声心动图证实诊断，未做手术。例2：男，4岁。例3：女，3岁，联体双胎(胸腹连胎)，出生后1个月手术分离。例4：男，5岁。后3例中的病儿行法洛四联症根治术，涤纶片修补室间隔缺损，自体心包补片加宽右室流出道。术后恢复良好。 讨论 杂合性分析的方法很多，使用微卫星标记是准确的判定杂合性的方法。仅依靠出生时胎盘数目、羊膜囊数目、胎儿性别等组成的问卷来判断单卵双生或双卵双生虽然简单，但精确度仅有60%。比较双胎皮纹的方法精确度更低。血清型、抗体鉴定单卵双生不仅昂贵而且精确度仍较低。使用同位素标记的5个高度多态性的微卫星标记引物，聚合酶链式反应扩增2个要鉴定的双胞胎基因组DNA，PCR产物聚丙烯凝胶电泳后放射自显影所见条带模式没有差异，说明两者是单卵双生的可能性为99.97%〔2〕。 单卵双胎患先天性心脏病者据新生儿先心病发病率估算约十万分之一。单卵双胎来自同一个受精卵，发育成为2个遗传物质完全一致的个体，多同时发病，而且所患疾病的种类基本相同，因此单卵双胎中其一患先天性心脏病法洛氏四联症另一正常的几率更低〔1〕。 单卵双胎，遗传背景相同，胚胎发育环境相似。利用单卵双胎的特点，进行其一患先天性心脏病另一正常单卵双胎的比较研究，可以得到许多先天性心脏病发病相关的信息。比较两者基因组DNA差异，有助于了解病儿存在的基因位点突变或染色体异常与先天性心脏病的关系。比较两者的mRNA之间的差异 ，可以了解特定时期、特定组织中基因表达的差异。结合cDNA文库技术，可以了解心脏发育特定时期的基因表达特点〔3〕。 因此，临床上能发现的一人患先天性心脏病另一人正常的单卵双胎，是了解先天性心脏病发病机制的宝贵材料。
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mecA基因扩增法与细菌鉴定仪法鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌比较及耐药性研究
目的 比较mecA基因PCR扩增法与细菌鉴定仪法对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的鉴定差异,分析MRSA耐药性,为有效控制MRSA医院感染提供参考依据.方法 收集2012年10月-2013年11月从临床分离出142株金黄色葡萄球菌,采用VITEK-2 Compact全自动细菌鉴定仪和mecA基因PCR扩增方法 检测MRSA,并对其进行耐药性分析,使用WHONET5.6软件统计病原菌的耐药率,采用SPSS 17.0软件对数据进行统计分析.结果 142株金黄色葡萄球菌中两种方法 检测到MRSA分别为30、35株,检出率分别为21.1%、24.6%,两种检测方法 对MRSA检出率差异无统计学意义,MSSA对除利奈唑胺、万古霉素、喹奴普汀/达福普汀及替加环素外,对抗菌药物的敏感度均高于MRSA,差异有统计学意义(P<0.05).结论 全自动细菌鉴定仪、mecA基因扩增法两种方法 检测MRSA结果 差异无统计学意义;但是全自动细菌鉴定仪可能会产生漏检,MRSA耐药现状严峻,应规范合理用药,控制感染与扩散.
关键词： 聚合酶链式反应 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 mecA基因 -
机械通气患者下呼吸道感染病原菌检测方法的诊断评价
目的 研究比较传统培养法与实时荧光定量(PCR)法,检测机械通气患者下呼吸道感染病原菌的效果.方法 选择2013年3月-2016年1月医院ICU机械通气合并下呼吸道感染患者55例作为研究对象,通过支气管镜获得支气管肺泡灌洗液(BALF)和防污染毛刷(PSB)标本,分别采用传统培养法和实时荧光定量法检测病原菌,对两种不同检测方法进行比较分析.结果 55例患者标本中,BALF传统培养金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、肺炎链球菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血菌、卡他莫拉菌等阳性率均高于PSB标本培养阳性率,但差异无统计学意义;采用实时荧光定量PCR方法检测PSB标本中金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、肺炎链球菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血菌、卡他莫拉菌的阳性率均明显高于传统培养法检出阳性率,差异有统计学意义(P＜0.01);在检测阳性的PSB标本中,金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、肺炎链球菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血菌和卡他莫拉菌的浓度分别为(3.28±0.87)(6.01±0.78)(3.70±0.89)(4.90±1.15)(4.12±0.66) Log10(CFU/ml)和(4.24±0.72)Log10(CFU/ml),肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌的浓度较高,与另4种菌种浓度相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 机械通气下呼吸道感染患者中,以PSB标本作为病原菌检测的标本具有更高的特异性;而与传统培养相比,荧光定量PCR检测方法具有更高的敏感性,且能快速获得检测结果,对抗菌药物早期正确应用具有重要的指导意义.
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贵州地区呼吸道感染儿童中肺炎支原体检测与分析
目的 探讨肺炎支原体(MP)DNA及MP抗体联合检测的临床诊断价值.方法 收集临床疑似MP感染的268例患儿样本,凝集法检测血清MP-抗体、实时荧光定量PCR法检测MP-DNA.结果 268例病例中65例确诊为MP肺炎,两种方法灵敏度分别为70.77%、87.69%,差异有统计学意义(P＜0.05);特异度分别为95.07%、96.06%,差异无统计学意义.结论 对疑似MP感染患儿同时进行抗体和DNA检测,可有效避免漏检.
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两种方法检测假丝酵母菌属感染的效果及其耐药性
目的 对比分析PCR法及传统培养法诊断假丝酵母菌属感染的敏感性及准确性,寻求一种能早期诊断及菌株鉴定的替代方法；同时分析临床假丝酵母菌属的耐药性,为临床的抗真菌治疗提供指导.方法 应用PCR法对189份临床疑似真菌感染标本进行快速鉴定,与传统培养法结果进行比较,并对培养出的假丝酵母菌进行药敏试验.结果 189份标本主要来自痰液,占44.97％;通过PCR法及传统培养法检测出的假丝酵母菌属感染阳性标本分别为62、47份,综合传统方法及PCR法的检测结果,检测出有真菌感染的标本数共66份,PCR检测敏感率达93.94％,要高于传统培养法的71.21％,差异有统计学意义(x2=11.85,P＜0.01)；此外,分析PCR法及传统法检测假丝酵母菌类别时,发现有两株热带假丝酵母菌在传统方法中被归类到光滑假丝酵母菌中,检测准确率PCR法更优于传统培养法；体外药敏试验结果表明,5-氟胞嘧啶、伏立康唑和两性霉素B对分离的4种假丝酵母菌的敏感性均较高,而氟康唑则仅对白色假丝酵母菌有较高的敏感性.结论 采用PCR法可更准确、快速的检测假丝酵母菌属的感染,通过药敏试验结果可以指导临床抗真菌药物的合理应用.
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子宫内膜组织人乳头瘤病毒感染的初步研究
目的 了解正常子宫内膜,宫颈癌患者子宫内膜以及子宫内膜癌组织HPV感染情况.方法 选择HPV L1区改良通用型引物Gp5+/Gp6+,通过HPV-DNA扩增和DNA测序法,对2004年9月～2006年3月我院妇科收治的25例宫颈癌、30例子宫内膜癌患者的石蜡包埋组织进行HPV检测,以20例子宫肌瘤患者作为对照组.每例宫颈癌取癌组织及正常子宫内膜;每例内膜癌取癌组织及正常宫颈粘膜;每例子宫肌瘤取正常子宫内膜及宫颈粘膜.结果 ① 25例宫颈癌病例中,16例宫颈癌组织及1例子宫内膜组织检测出HPV感染.这例子宫内膜与其相应的宫颈癌组织均为HPV-16型感染;② 30例子宫内膜癌组织及其相应的宫颈粘膜组织均未检测出HPV-DNA,检出率均为0(0/30);③对照组正常子宫内膜及宫颈粘膜均未检出HPV-DNA,检出率均为0(0/20).结论 ①子宫内膜HPV感染很少,说明其可能不是HPV复制、成熟的适宜宿主组织;②宫颈癌患者子宫内膜组织的HPV可能由上行感染所致,但感染率较低;③子宫内膜癌的发生、发展可能与HPV无关.
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阴道自取样人乳头瘤病毒检测用于子宫颈癌筛查的有效性研究
目的 研究阴道自取样人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)检测用于宫颈癌筛查的有效性,以探讨宫颈癌筛查的新模式.方法 收集2017年8月28-29日北京大学人民医院对内蒙通辽地区1 101例25 ～65岁女性进行阴道自取样(自取样)和医生宫颈取样(医取样)两种取样方法宫颈癌筛查的资料.采用荧光定量PCR法检测自取样和对应医取样15种高危HPV亚型;采用RT-PCR法检测同一医取样本14种高危HPV亚型作为对照;对HPV16/18阳性或其他12种HPV阳性+宫颈液基细胞学(TCT)异常(ASC-US及以上)者进行阴道镜检查及活检.结果 1101例阴道自取样本的合格率为100％,其中荧光定量PCR法自取样HPV阳性率为17.44％(192/1 101),医取样HPV阳性率为16.35％(180/1 101),自取样与医取样HPV检测的符合率为97.28％(1 071/1 101),其中自取样阴性而医取样阳性9例(0.82％),自取样阳性而取样阴性21例(1.91％);RT-PCR法医取样HPV阳性率为14.82％(163/1 101);两种检测方法医取样HPV阳性的符合率为95.91％(1 055/1 101),两者比较,差异无统计学意义(P＞0.05).55例行阴道镜检查及活检,其中CIN1、CIN2/3和宫颈炎的检出率分别为49.09％(27/55)、23.64％(13/55)和27.27％(15/55),自取样和医取样检出CIN2/3的敏感度均为100％,特异度分别为83.33％和90.48％.自取样和医取样检出高危HPV型别的分布一致,前5位者均依次为HPV52、HPV16、HPV58、HPV18和HPV31型.自取样检出双重及以上HPV阳性的比例增加8.33％(16/192).结论 荧光定量PCR法检测阴道自取样与医生宫颈取样HPV感染的符合率较高,自取样可有效检出HPV和高级别宫颈上皮内病变感染者,其可成为一种宫颈癌筛查的新模式.
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小儿支气管哮喘与血小板活化因子乙酰水解酶的相关性研究
为探讨血浆血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)基因多态性与我国哮喘儿童的相关性及其多态性与血浆PAF-AH酶活性的关系,我们于2001年10月至2003年3月,应用等位基因特异性聚合酶链式反应(AS-PCR)技术,对哮喘发作期儿童PAF-AH第9外显子上G994-T基因位点的突变进行了检测,同时应用酶水解底物显色法检测血浆PAF-AH活性.现报告如下.
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肿瘤坏死因子-β基因型多态性与膀胱肿瘤的关系
目的 探讨肿瘤坏死因子-β(TNF-β)基因型多态性与膀胱肿瘤的关系.方法 用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,检测所有研究对象的TNF-β基因+A252G位点的基因型,探讨其基因型与膀胱肿瘤的关系.结果 TNF-β基因型多态性与膀胱肿瘤的发病率相关,且膀胱肿瘤患者中,TNF-β基因型多态性与肿瘤的分级相关(P<0.01).结论 检测膀胱肿瘤患者的TNF-β基因型多态性有助于为研究膀胱肿瘤的发生发展提供一个新的思路.
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细胞色素P450 1A1和谷胱苷肽硫转移酶基因多态性与肺癌关系的病例对照研究
目的探讨细胞色素P450 1A1(CYP 1A1)和谷胱苷肽硫转移酶(GST)-M1基因多态性与肺癌易感性的关系.方法选取新发肺癌患者91例及同期非肺部疾患同性别患者91例作匹配,另选取体检正常者47例做频数对照,采用聚合酶链式反应(PCR)和限制性片段长度多态性(RFLP)技术检测CYP1A1和GST-M1的基因多态性.结果单独分析CYP1A1和GST-M1基因多态性与肺癌的关系,其OR值分别为1.53和1.42,与对照组比较,差异均无显著性(P＞0.05),表明与肺癌的发生无相关性.而将二者联合分析时,其OR值为2.47,95%CI为1.03～5.90,与对照组比较,差异有显著性(P＜0.05),表明与肺癌的发生有一定相关性.结论CYP 1A1和GST-M1的单一基因多态性不增加患肺癌的危险,而两者联合作用时,则可增强患肺癌的风险.
关键词： 细胞色素P450 基因多态性 肺肿瘤 聚合酶链式反应 限制性片段长度多态性 -
Ⅲ型胶原蛋白COL3A1基因多态性与颅内动脉瘤的关系
颅内动脉瘤是严重威胁人类生命健康的一种疾病,目前对该病的发病机制尚不完全清楚,不少学者认为颅内动脉瘤是一种由多种环境因素和多个基因共同作用的多因素疾病[1].COL3A1基因位于2q31,编码Ⅲ型胶原蛋白,其基因突变可引起Ⅲ型胶原蛋白缺失导致IV型埃 - 当综合征.但伴有遗传性结缔组织病的颅内动脉瘤只占颅内动脉瘤患者的5%[2].国外关于COL3A1基因与散发颅内动脉瘤发病关系的报道是有争议的.本研究应用聚合酶链式反应 - 限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,分析和探讨COL3A1基因单核苷酸多态性与颅内动脉瘤的关系.
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四种试验方法检测早期梅毒患者的结果分析
目的 了解镀银染色法、聚合酶链式反应(PCR)、梅毒甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)和梅毒明胶颗粒凝集试验(TPPA)等4种方法,对检测早期梅毒患者的临床价值.方法 2012年1月至2016年7月,在广西部分地区的性病门诊收集疑似早期梅毒患者300例,分别采集组织液与血清标本.组织液标本采用镀银染色法检测梅毒螺旋体,PCR方法检测TP polA基因;血清标本用于TRUST检测非梅毒螺旋体抗体,TPPA检测梅毒螺旋体抗体.统计学资料采用SPSS 13.0软件进行分析.结果 在215例确诊的早期梅毒患者中,梅毒PCR检测阳性标本210例,敏感性为97.7％;镀银染色法检测出105例,敏感性为48.8％;TRUST检测出196例,敏感性为91.2％;TPPA检测出208例,敏感性为96.7％.结论 不同试验检测方法对早期梅毒患者的诊断有不同的临床应用价值,一期梅毒应当做病原学检查及梅毒血清学试验,二期梅毒应当以梅毒血清学试验为主,当出现结果异常时,应要求患者进行随访再检测以明确诊断.
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性病门诊人乳头瘤病毒感染的流行病学调查
目的:了解性病门诊就诊者中人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)及其它性传播疾病(sexually transmitted disease, STD)病原体混合感染的流行情况.方法:对90例临床样本采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测尿道或宫颈拭子HPV DNA,同时检测其它STD病原体.结果:在90例就诊者中,HPV DNA阳性13例(14.4%),女性、混合感染数多者及教育程度低者HPV感染率高(P<0.05),HPV感染者至少同时伴有1种其它STD病原体感染.结论:HPV在性病门诊就诊者中存在一定的感染率,HPV感染与性别、混合感染数、教育程度等相关,HPV与其它STD病原体的混合感染多见.
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低分子量多肽基因多态性与变应性鼻炎相关性探讨
本研究用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术检测了69例变应性鼻炎(allergic rhinitis, AR)患者及100例健康人低分子量多肽(low molecular weight peptide,LMP)基因的频率,以探讨LMP基因在AR发病中的意义.
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三磷酸胞苷合成酶基因在鼻咽癌纯瘤组织中的表达
三磷酸胞苷合成酶(cytidine triphosphate synthetase,CTPS)基因是从全基因组表达谱中筛选出的鼻咽癌候选癌基因[1].本组实验利用半定量逆转录聚合酶链式反应(semi-quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction,sqRT-PCR)研究CTPS基因在纯化鼻咽组织中的表达,并与芯片杂交结果相比较,以进一步揭示CTPS基因在鼻咽癌发生、发展过程中的变化规律.
