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多重实时荧光定量聚合酶链反应检测携带耐药基因及肠毒素A基因的金黄色葡萄球菌
目的 建立一种快速鉴定携带耐药基因和肠毒素A基因的金黄色葡萄球菌的方法.方法 根据金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因nuc、甲氧西林耐药基因mecA和肠毒素A基因sea的序列,设计特异性的引物和不同荧光素标记的TaqMan探针,通过反应体系和反应条件的优化,建立了能同时检测鉴定耐甲氧西林和产肠毒素A的金黄色葡萄球菌的多重荧光PCR方法.结果 该方法特异性好,可在同一个PCR反应体系中同时检测金黄色葡萄球菌的3种基因成分,检测效率高.灵敏度可以达到2×10-7μg/μl.结论 该方法可用于食品样品的检测和流行病学分离株的快速鉴定.
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实时荧光定量聚合酶链反应检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的临床应用
目的:采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),评价其快速检测MRSA的临床意义.方法:选取我院2014年1月至2014年12月采集的96份临床标本,其中血液36份,痰液42份,鼻咽拭子18份,开展FQ-PCR检测以及细菌鉴定.结果:血液标本中,两种检测方法的符合率为100％;痰液标本中,两种检测方法的符合率为95.2％;鼻咽拭子中,两种检测方法的符合率为100％.结论:FQ-PCR检测MRSA更加方便、快速,且对于血液等无菌体液的检测结果与细菌鉴定结果符合率较高.
关键词： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 FQ-PCR mecA基因 -
食源性金黄色葡萄球菌青霉素类药物耐药基因型的分析
目的 建立多重PCR方法检测青霉素酶基因和mecA基因,了解食源性金黄色葡萄球菌两种β-内酰胺类药物耐药基因的分布情况,为金黄色葡萄球菌引起食源性疾病的防治提供参考数据.方法 建立多重PCR技术检测金黄色葡萄球菌青霉素酶基因、mecA基因和16S rDNA；多重PCR方法测定食品来源的171株金黄色葡萄球菌对青霉素类药物的耐药基因型.结果 165株菌携带有青霉素酶基因(96.5％),9株菌携带有mecA基因(5.3％).结论 建立的多重PCR检测方法快速、简便、准确,可满足高通量筛选菌株的需求；食源性金黄色葡萄球菌具有很高的青霉素酶基因携带率,并存在耐甲氧西林的菌株.
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云南省食品中金黄色葡萄球菌耐药性和mecA基因的检测及分析
目的 调查2010-2016年云南省不同食品中分离的金黄色葡萄球菌的抗生素耐药情况,了解多重耐药(MDR,即耐3类或3类以上抗生素)菌株和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分布以及mecA基因的携带率,为有效防控金黄色葡萄球菌食物中毒和临床感染提供基础数据及参考.方法 采用VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定仪、GPI鉴定卡及AST-GP67进行药敏试验,聚合酶链式反应(PCR)法进行mecA基因检测.结果 325株金黄色葡萄球菌分离株耐药率为92.00％ (299/325),前3位的分别是青霉素G(88.00％,286/325)、四环素(43.38％,141/325)、红霉素(40.92％,133/325),未检出耐喹奴普汀/达福普汀、万古霉素、力奈唑烷和替加环素的耐药株;MDR菌株检出率为47.69％(155/325),MRSA检出率为13.23％(43/325).不同食品对青霉素G、四环素和呋喃妥因的耐药率差异有统计学意义(P＜0.05);餐饮食品、肉与肉制品、速冻米面制品中均检出九重耐药菌株;MRSA在水产品中占33.33％(1/3),肉与肉制品占17.89％(17/95),焙烤食品占16.67％(3/18),乳与乳制品占14.29％(3/21),餐饮食品占12.41％ (17/137),速冻米面制品占5.71％ (2/35),差异均无统计学意义(P＞0.05),婴幼儿食品、冷冻饮品和豆制品未检出MRSA.不同年份分离株对环丙沙星、莫西沙星和复方磺胺甲噁唑的耐药率差异有统计学意义(P＜0.05),2012-2015年均检出九重耐药株;2015年MRSA占比为20.00％ (12/60),2014年占16.47％(14/85),2013年占14.12％(12/85),2012年占6.82％(3/44),2011年占10.00％ (2/20),2010和2016年未检出MRSA.43株MRSA药敏试验显示耐药率高的主要为青霉素G(100.00％,43/43),呈多重耐药性,未检出耐万古霉素的MRSA,mecA基因的检出率为37.21％ (16/43).结论 食品中金黄色葡萄球菌的分布、抗生素耐药变化和发展趋势值得关注,有利于食源性疾病防治和指导临床合理选用抗生素,延缓细菌耐药株的产生.
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西安地区血培养标本分离的MRSA mecA与qacA/B基因检测
目的 了解西安地区血培养标本中分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) mecA和qacA/B基因携带情况,以便推测其抗药性.方法采用细菌培养鉴定技术和基因扩增方法,对收集2008年1月-2010年2月期间西安地区多家住院与门诊患者血培养标本进行了分离和检测.结果在2年内从西安地区3所医院血培养标本中分离鉴定出56株MRSA,meeA基因均为阳性,携带率为100％；有7株MRSA检出qacA/B基因阳性,携带率为12.5％.结论西安地区部分医院血培养标本分离的MRSA检测出qacA/B基因阳性率为12.5％,携带率较低.
关键词： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 mecA基因 qacA/B基因 抗药性 -
实时荧光PCR直接检测样本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌应用研究
目的 探讨实时荧光PCR直接检测病人样本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的应用价值.方法 对80例经VITEK2COMPACT药敏鉴定系统鉴定为有金黄色葡萄球菌生长(其中MRSA40例,MSSA40例)及20例未检出金黄色葡萄球菌的患者样本进行实时荧光PCR扩增,检测样本中金黄色葡萄球菌特异性核酸片段(耐热核酸酶基因nuc)及耐药基因(mecA)并与药敏鉴定比较,判断实时荧光PCR法检测MRSA的敏感性及特异性;对于两种方法检测结果不一致的18例样本重新接种培养,收集金黄色葡萄球菌菌株进行实时荧光PCR扩增,检测nuc基因及mecA基因,以期发现两种方法检测结果差异原因.结果 100例临床样本两种方法检测结果一致共82例,其中MRSA一致40例,MSSA一致22例,非金葡20例;两种方法检测结果不一致18例,均为PCR基因检测为MRSA而药敏鉴定为MSSA.MRSA检测药敏鉴定阳性40例,检出率为40％,PCR基因检测阳性58例检出率为58％;PCR基因检出率明显高于药敏鉴定,二者结果差异有显著性(P＜0.05);以药敏鉴定为标准,PCR基因检测MRSA的敏感性为100％,特异性为70％;18例金黄色葡萄球菌菌株实时荧光PCR检测MRSA结果与药敏鉴定一致.结论 实时荧光PCR直接检测患者样本中MSSA具有高度敏感性及特异性,但检测MRSA会受到样本中其他含有mecA基因菌的干扰,对于临床结果解释需慎重.即便如此,该方法对于MRSA检测在院感防控方面仍有重要意义.
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烧伤患者创面感染金黄色葡萄球菌分离株耐药性及流行病学分析
目的 对河北地区烧伤患者创面分离的120株金黄色葡萄球菌进行mecA和SCCmec检测分析MRSA耐药机制,为临床合理用药提供依据. 方法 在2009～2013年收治的烧伤患者创面中分离的120株金黄色葡萄球菌,采用头孢西丁纸片法进行MRSA筛选,对mecA基因,SCCmec和spa基因进行PCR扩增以及分型. 结果 120株金黄色葡萄球菌中有74株为MRSA,占61.7％.药敏试验显示,MRSA对16种临床常见抗生素耐药率,超过85％的有7种,依次为苯唑西林(98.6％),青霉素(96.0％),环丙沙星(94.6％),阿莫西林和头孢唑林(89.2％),亚胺培南(87.8％),庆大霉素(85.1％),另有1株对万古霉素耐药. 结论 本组金黄色葡萄球菌MRSA检出率较高,并表现出较高的耐药性.MRSA具有的多重耐药性mecA基因密切关系.
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金黄葡萄球菌中毒休克综合征毒素1的研究
目的 应用PCR技术,检测金黄葡萄球菌的mecA基因和染色体上编码中毒休克综合征毒素1(TSST-1)的tst基因,了解tst基因的携带情况.方法 用PCR法对我院2006年8月-2007年5月临床分离的84株金黄葡萄球菌mecA基因和tst基因进行体外扩增,建立快速、特异、灵敏的检测产TSST-1耐甲氧西林金黄葡萄球菌(MRSA)的方法.结果 成功的对金黄葡萄球菌mecA基因和tst基因进行了检测,并进行基因测序.在我院84株受检金黄葡萄球菌中,41株金黄葡萄球菌的mecA基因扩增呈阳性,阳性株占48.81%.16株tst基因阳性,阳性株占19.05%.10株金黄葡萄球菌同时扩增出mecA基因和tst基因,阳性株占24.39%(10/41).结论 tst基因阳性株在临床分离的耐甲氧西林金黄葡萄球菌中占有较高的比例,应予以足够重视.
关键词： 金黄葡萄球菌 中毒体克综合征毒素1 mecA基因 tst基因 -
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性分析及mecA和PVL基因检测
目的 检测临床分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) mecA基因和杀白细胞素(PVL)基因携带情况,并分析其对常用抗菌药物的耐药性,指导临床上合理规范用药.方法 应用96孔肉汤微量稀释法对菌株进行10种常用抗菌药物敏感性试验,全部药物敏感试验采用MIC法鉴定,采用聚合酶链反应(PCR)法检测mecA基因和PVL基因携带情况,并对PVL基因阳性菌株感染患者的临床资料进行分析.结果 60株MRSA对克林霉素、庆大霉素、利福平耐药率均＞80％,环丙沙星、莫西沙星、左氧氟沙星耐药率均＞90％,对呋喃妥因,复方新诺明较敏感,耐药率＜10％,60株MRSA对万古霉素,利奈唑胺均敏感.60株MRSA的mecA基因均为阳性,其中检出3株菌株携带PVL基因,占5.0％,另外57株MRSA为PVL基因阴性,占95.0％.结论 本地区临床分离出的MRSA耐药性较高,以携带mecA耐药基因为主,因此治疗应以糖肽类抗生素为主,合理规范用药.MRSA-PVL基因阳性率相对较低,但其与一些严重的金黄色葡萄球菌感染有关,临床应予以关注并加强对PVL基因的监测,有效控制及防止此类菌株播散流行.
关键词： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 耐药性 杀白细胞毒素 mecA基因 聚合酶链反应 -
医院感染金黄色葡萄球菌的耐药性和SCCmec基因型分析
目的 了解天津市肿瘤医院医院感染金黄色葡萄球菌对抗菌药物的耐药状况和葡萄球荫盒式染色体mec(SCCmec)基因型特点.方法 检测89株医院感染金黄色葡萄球菌对抗菌药物的敏感性及其mecA携带率,用多重PCR法对mecA阳性菌株进行SCCmec基因分型.结果 89株金黄色葡萄球菌中表型甲氧西林耐药率为23.6%(21/89),mecA基凶检出率为43.8%(39/89),两者比较差异有统计学意义(χ2=8.146,P=0.004).耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)表现出多药耐药特点,未发现万古霉素耐药株.SCCmec基因型以Ⅲ型为常见,占66.7%(26/39).结论 天津市肿瘤医院分离的MRSA具有多重耐药特点,SCCmee基凶型以Ⅲ型为主.
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金黄色葡萄球菌耐药性及mecA、qacA/B和pvl基因检测
金黄色葡萄球菌是临床上常见的致病菌之一,可产生多种毒素和酶,包括凝固酶、葡萄球菌溶血素、杀白细胞素、肠毒素和表皮溶解毒素等.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)具有多药耐药特征,是导致医院感染的主要革兰阳性菌[1],已成为临床抗感染治疗的难题.监测金黄色葡萄球菌的耐药现状,了解金黄色葡萄球菌的耐药和致病机制,以及分析感染的危险因素与治疗对策具有重要的临床意义.
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mecA基因扩增法与细菌鉴定仪法鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌比较及耐药性研究
目的 比较mecA基因PCR扩增法与细菌鉴定仪法对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的鉴定差异,分析MRSA耐药性,为有效控制MRSA医院感染提供参考依据.方法 收集2012年10月-2013年11月从临床分离出142株金黄色葡萄球菌,采用VITEK-2 Compact全自动细菌鉴定仪和mecA基因PCR扩增方法 检测MRSA,并对其进行耐药性分析,使用WHONET5.6软件统计病原菌的耐药率,采用SPSS 17.0软件对数据进行统计分析.结果 142株金黄色葡萄球菌中两种方法 检测到MRSA分别为30、35株,检出率分别为21.1%、24.6%,两种检测方法 对MRSA检出率差异无统计学意义,MSSA对除利奈唑胺、万古霉素、喹奴普汀/达福普汀及替加环素外,对抗菌药物的敏感度均高于MRSA,差异有统计学意义(P<0.05).结论 全自动细菌鉴定仪、mecA基因扩增法两种方法 检测MRSA结果 差异无统计学意义;但是全自动细菌鉴定仪可能会产生漏检,MRSA耐药现状严峻,应规范合理用药,控制感染与扩散.
关键词： 聚合酶链式反应 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 mecA基因 -
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因的临床研究
目的：比较荧光定量 PCR法和传统细菌培养药敏试验两种方法鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（M RSA ）的能力，评估荧光定量 PCR直接检测不同类型标本中 M RSA的 mecA 基因是否具有临床应用价值。方法收集2013年11月－2014年11月经细菌培养和纸片药敏试验确定为金黄色葡萄球菌的111份临床标本，荧光定量PCR法检测标本的 mecA基因，比较两种方法结果。结果两种方法具有较好一致性、吻合度，差异有统计学意义；以传统方法为对照，荧光定量PCR直接检出M RSA的敏感性为100．0％、特异性90．9％；PCR检出痰液标本的M RSA的敏感性为100．0％、特异性100．0％；PCR检出其他标本的M RSA的敏感性为100．0％、特异性81．8％；mecA基因直接检测与传统方法不一致的全部为血培养标本，但分离菌落基因检测与药敏结果一致。结论荧光定量PCR直接检测临床标本mecA基因用于筛查M RSA可靠，临床微生物实验室可推广以早期控制医院感染和指导临床抗菌药物使用。
关键词： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 荧光定量聚合酶链反应 mecA基因 药敏试验 -
耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌及糖肽类耐药的检测与分析
目的 了解中日友好医院临床耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)糖肽类耐药的流行情况和耐药机制,为MRCNS医院感染的预防与控制提供可靠依据.方法 头孢西丁纸片法、mecA基因PCR检测MRCNS;万古霉素耐药确证试验筛选对万古霉素敏感性下降的凝固酶阴性葡萄球菌(CNS),E-test法检测其MIC及多重PCR检测其van基因.结果 CNS对头孢类、β-内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类、克林霉素类抗菌药物耐药程度较高;52株CNS菌中头孢西丁纸片法与mecA基因检测MRCNS的符合率为96.2%,mecA基因阳性率为92.3%;256株CNS菌中筛选出4株异质性耐万古霉素葡萄球菌(VRS),均为MRCNS,未检出vanA、vanB、vanC1及vanC2基因.结论 对VRS和MRCNS进行有效的实验室检测与院内监测并采取有效措施预防与控制其传播是非常重要的.
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荧光实时PCR法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的研究
目的 建立检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)mecA基因的荧光实时PCR法.方法 对荧光实时PCR法的实验条件进行优化,并用该法检测临床分离的109株金黄色葡萄球菌,其结果与苯唑西林纸片扩散法的结果进行比较.结果 109株金黄色葡萄球菌中,荧光实时PCR法检测出mecA基因阳性37株、阴性72株;苯唑西林纸片扩散法检测出MRSA 27株、MSSA 82株,经配对x2检验,荧光实时PCR法检出率显著高于苯唑西林纸片扩散法(P＜0.01).结论 荧光实时PCR法能敏感、特异检测MRSA并可实时监测反应进程,比普通PCR法更加简便、快速,可以弥补苯唑西林纸片扩散法漏检隐匿型、临界型耐药株的不足.
关键词： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 mecA基因 荧光实时PCR -
mecA、mecI和mecR1基因在耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌中的分布与变异
目的 检测126株临床分离的耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌中mecA、mecI和mecR1基因分布与变异.方法 采用多重PCR的方法,使用11条特异性的引物,分别检测mecA、mecI和mecR1基因易发生突变的位点.结果 126株临床分离的耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌均检测到mecA基因,阳性率100.0%,3株发现在与引物P1退火的区域发生突变,2株在mecA基因的内切酶ClaI区域发生变异,39株未发现在mecI和mecR1基因内发生突变,42株发现在mecR1基因的跨膜区(PB domain)发生突变,mecR1基因青霉素结合区发生突变18株,27株发生mecI基因的缺失,9株同时发生mecI和mecR1基因缺失.结论 研究结果表明,mecA基因在耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌中比较稳定,较少发生突变,mecI和mecR1基因容易发生缺失,检测临床分离的耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌中mecA、mecI和mecR1基因的分布和变异对于正确分析和解释耐药性的结果、追踪耐药菌株来源有重要意义.
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mecA基因在金黄色葡萄球菌中的分布及对耐药性的影响
目的 探讨mecA基因在金黄色葡萄球菌中的分布以及对其耐药性的影响.方法 收集金黄色葡萄球菌临床分离菌株47株,用琼脂扩散法进行敏感性检测,提取分离株DNA,通过聚合酶链反应(PCR)对mecA基因进行扩增,分析mecA基因和金黄色葡萄球菌耐药性的关系.结果 47株金黄色葡萄球菌中,有33株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),占70.2%;甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)有14株,占29.8%;在33株MRSA中,只有3株对除替考拉宁、万古霉素等糖肽类以外的抗菌药物敏感,占9.1%;14株MSSA中只有2株对全部12种抗菌药物敏感,仅占14.3%;PCR结果 显示,在33株MRSA中,32株携带mecA基因,占97.0%;而在14株MSSA中有3株携带mecA基因,3株携带mecA基因的MSSA耐药性较不携带mecA基因MSSA的耐药性严重.结论 金黄色葡萄球菌中MRSA具有较高的分离率,MRSA的耐药性非常严重,万古霉素等糖肽类抗菌药物是惟一有效的抗菌药物,绝大多数的MRSA携带有mecA基因,mecA基因在金黄色葡萄球菌的耐药机制中发挥重要作用,携带mecA基因的MSSA耐药情况比不携带mecA基因的MSSA严重.
关键词： mecA基因 金黄色葡萄球菌 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 耐药性 -
用双重聚合酶链快速鉴别葡萄球菌及其甲氧西林耐药性
目的建立一种同时鉴别金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的快速方法. 方法利用双重聚合酶链反应(PCR)技术同时检测金黄色葡萄球菌特有的耐热核酸酶(NUC)基因和编码耐甲氧西林葡萄球菌青霉素结合蛋白(PBP2a)的mecA基因. 结果 94株金黄色葡萄球菌(SA)的NUC基因100%阳性,mecA基因阳性率为48.9%,药敏法MRSA的阳性率为47.9%;101株凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)的NUC基因100%阴性,mecA基因阳性率为35.6%,药敏法MRCNS阳性率为34.7%. 结论双重PCR技术检测葡萄球菌(SA、CNS)及其甲氧西林耐药性具有简便、快速、敏感和特异的特点,是一种非常有效的鉴别方法.
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表皮葡萄球菌医院感染耐药性的基因型研究
目的 研究医院感染表皮葡萄球菌(SEP)耐药的分子机制,以控制其医院感染的发生.方法 对分离的18株表皮葡萄球菌进行耐药分析,抽提细菌染色体DNA,用聚合酶链反应(PCR)扩增mecA、gyrA和grlA基因,用酶切、测序检测这些基因的存在及变异,分析与耐药的关系.结果 18株表皮葡萄球菌中对甲氧西林耐药15株,耐药率83.3%,耐药菌株全部检测到mecA基因;18株中对喹诺酮类(诺氟沙星和环丙沙星)、克拉霉素、红霉素和克林霉素均耐药者11株,其中10株存在gyrA和(或)grlA突变;gyrA突变点为gyrA 84位TCA→TTA,grlA突变点为grlA80位TCC→TTC.结论 医院感染表皮葡萄球菌存在严重的多重耐药现象,必须进一步规范临床用药,以减少耐药性的增加.
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临床分离的金黄色葡萄球菌mecA和qacA/B基因检测
目的 了解临床分离的金黄色葡萄球菌对常用抗菌药物的耐药性及mecA基因和qacA/B基因携带现状.方法 收集临床分离的111株金黄色葡萄球菌,采用K-B药敏纸片法检测其对抗菌药物的耐药性,用聚合酶链反应检测mecA和qacA/B基因.结果 111株金黄色葡萄球菌对青霉素G、氨苄西林、红霉素和苯唑西林的耐药率较高,分别为97.3%、93.4%、86.5%和82.9%,对万古霉素和替考拉宁均敏感;mecA基因和qacA/B基因的检出率分别为63.9%和13.5%;将部分菌株的mecA和qacA/B基因扩增产物进行测序,并将测序结果登录NCBI进行比对.结论 临床分离的金黄色葡萄球菌mecA基因检出率较高且呈多药耐药趋势;大部分MRSA和少部分MSSA中携带消毒剂抵抗基因qacA/B;临床应重视由此类金黄色葡萄球菌所引起的感染的诊断、治疗和医院感染的控制,并合理使用消毒剂.
