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慢病毒介导的E2F-1沉默对人胃癌细胞MGC803中药人参黄芪复方药物敏感性的影响
目的:利用重组慢病毒介导的E2F-1基因沉默载体感染人胃癌MGC-803细胞,观察其对中药人参黄芪复方药物敏感性的影响.方法:将胃癌MGC-803细胞接种于培养板中分为4组:正常组(正常培养基)、空白对照组(中药培养基)、阴性对照LV-RNAi组(中药培养基+感染空载体慢病毒颗粒2.0×109 TU/mL)、E2F-1-RNAi-LV组(中药培养基+感染E2F-1基因重组慢病毒颗粒2.0×109 TU/mL),分别采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测E2F-1 mRNA及蛋白表达;MTT方法检测细胞的增殖抑制率;Giemsa染色检测细胞的克隆形成;流式细胞仪检测细胞的凋亡;细胞划痕实验检测细胞迁移能力.结果:E2F-1基因沉默蛋白及mRNA表达水平均明显下降,差异有统计学意义(0.384±0.036vs 0.883±0.051和0.923±0.049,0.220±0.056vs 0.729±0.021和0.712±0.037,P<0.05).中药人参黄芪复方能抑制人胃癌MGC-803细胞生长、诱导胃癌细胞凋亡、抑制细胞克隆形成及迁移;与空白对照组及阴性对照组相比较,E2F-1基因沉默组MGC-803细胞增殖抑制率、细胞凋亡率显著提高,其细胞克隆形成、细胞迁移面积显著降低,差异均有统计学意义(0.789±0.013 vs 0.484±0.060和0.454±0.006,0.383±0.027 vs 0.114±0.038和0.089±0.051,0.024±0.003 vs 0.036±0.004和0.052±0.002,0.553±0.038 vs 0.897±0.020和0.928±0.051,P<0.05).结论:重组慢病毒载体介导的E2F-1基因沉默能有效增强中药人参黄芪复方对人胃癌MGC-803细胞的药物敏感性.
关键词: 中药人参黄芪复方 E2F-1 人胃癌MGC803细胞 药物敏感性 -
2型糖尿病合并肺部感染病原菌分布及药物敏感性
目的:探讨2型糖尿病合并肺部感染病原菌的分布情况与药物敏感性。方法选取2013年1月-2015年10月该院收治的2型糖尿病合并肺部感染患者80例,对所有患者都进行痰培养,并准确统计出病原菌的实际分布情况与对药物的敏感性情况。结果80例患者标本当中共分离93株病原菌,其中革兰阴性菌病原菌高,共占58.06%,其次是革兰阳性菌病原菌,共占32.26%,而真菌仅占9.68%。铜绿假单胞菌革兰阴性菌病原菌对所有药物耐药率都较高,>60%,且大肠埃希菌革兰阴性菌与肺炎克伯菌革兰阴性菌对第三代头孢菌素药物以及氨基糖苷类药物等的耐药率高。但是革兰阳性菌对克林霉素药物、青霉素药物以及红霉素药物等耐药率较高。结论给予2型糖尿病合并肺部感染患者进行病原菌鉴定与药敏检测能够在一定程度上提高疾病治疗有效性,避免患者的盲目用药,减少耐药株的快速形成,从根本上降低感染率。
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糖尿病合并泌尿系感染患者微生物分布及药物敏感性分析
目的:探讨糖尿病合并泌尿系感染患者微生物分布及药物敏感性试验结果。方法选择该院于2013年11月—2014年12月期间收治的97例糖尿病合并泌尿系感染患者作为监测对象,采集该组患者尿液标本,分别进行细菌培养、菌株分离和鉴定、药物敏感性试验,分析检验结果。结果该组尿液样本中,革兰阴性菌总占比(69.61%)高,显著高于革兰阳性菌和真菌,差异有统计学意义(P<0.05)。在革兰阴性菌中,大肠埃希菌总占比高(69.01%),与其他革兰阴性菌相比,差异有统计学意义(P<0.05)。在革兰阳性菌中,表皮葡萄球菌总占比高(65.38%),与其他革兰阳性菌相比,差异有统计学意义(P<0.05)。青霉素G药敏试验,大肠埃希菌对青霉素G的耐药性高,较其他病原菌差异有统计学意义(P<0.05);罗红霉素药敏试验,表皮葡萄球菌对罗红霉素的耐药性高,较其他病原菌差异有统计学意义(P<0.05);头孢哌酮药敏试验,肺炎克雷伯菌对头孢哌酮的耐药性高,较其他病原菌差异有统计学意义(P<0.05);左氧氟沙星药敏试验,金黄色葡萄球菌对左氧氟沙星的耐药性高,较其他病原菌差异有统计学意义(P<0.05)。结论糖尿病合并泌尿系感染者患者病原微生物以革兰阴性菌为主,且耐药菌株较多,提示临床治疗中应综合考虑细菌培养和药物敏感性试验结果。
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核苷(酸)类似物抗病毒治疗慢性乙型肝炎的优化策略
目前我国有4种核苷(酸)类似物可用于慢性乙型肝炎的抗病毒治疗,即拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦和替比夫定.但由于患者的性别、年龄、遗传传背景、感染乙型肝炎病毒(hepatits B virus,HB BV)的途径、病毒基因型、病程长短、肝脏病变程程度和对治疗药物敏感性等不同,即使有同样治疗疗适应证的患者按同样的规范方案治疗后,仍有相相当一部分患者早期应答欠佳,从而影响了抗病毒毒治疗的长期疗效.如何进一步优化现有的治疗方方法以提高远期疗效已成为国内外专家关注的热点点问题.
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第四次全国结核病流行病学抽样调查--结核分支杆菌耐药性分析与评价
目的分析我国结核分支杆菌耐药现状,为评价和指导国家结核病控制规划(NTP)提供基本数据.方法对第四次全国流调的分离菌株进行6种抗结核药物(INH、SM、RFP、EMB、PAS-Na和TB1)的耐药性测定.结果 392株结核分支杆菌的总耐药率为27.8%,初始耐药率和获得性耐药率分别为18.6%和46.5%;耐多药率为10.7%,其中初始和获得性耐多药率分别为7.6%和17.1%;6种抗结核药物的耐药率由高到低分别为INH(17.6%)、SM(17.3%)、RFP(16.6%)、PAS-Na(2.8%)、EMB(1.5%)和TB1(1.3%);耐1种、2种、3种和4种以上药物的初始耐药率和获得性耐药率分别为7.6%、4.6%、4.6%、1.9%和14.7%、19.4%、10.1%和2.3%;不同性别、年龄组初始耐药差异无显著性.结论本次流调的总耐药率、初始耐药率与第二次和第三次流调资料比较有显著性降低(P<0.01),但仍处于较高水平,且耐药性的发生更趋向于对主要一线药物耐药和对多种药物耐药,尤其是MDR-TB发生率高,应引起重视.
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非小细胞肺癌肿瘤药敏与耐药基因MDR1、MRP、GST-π表达的相关性研究
目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)多药耐药(MDR1)、谷胱甘肽转移酶(GST-π)、多药耐药相关蛋白(MRP)基因表达和肿瘤药物敏感试验之间的相关性及临床指导意义.方法 48例NSCLC(可手术)进入研究,药敏方法采用磷脂结合蛋白V(Annexin V)联合碘化丙啶(PI)双参数法,耐药基因MDR1、GST-π、MRP采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测.结果抗癌药物检测显示:紫杉醇(商品名:泰素)、顺铂、去甲长春花碱、丝裂霉素、鬼臼乙叉甙、双氟胞苷、长春碱酰胺、长春新碱的平均抑瘤率分别为(15.7±21.8)%, (20.7±22.2)%,(7.9±16.2)%,(10.3±17.1)%,(9.7±20.1)%,(11.2±13.8)%,(5.6±14.9)%,(4.7 ±8.7)%.耐药基因MDR1、MRP、GST-π阳性率分别为67%(32/48),42%(20/48),48%(23/48).耐药基因MRP、GST-π阳性及阴性表达与病理类型之间未见明显相关;而在MDR1组中鳞癌及腺癌的MDR1阳性表达明显高于阴性表达组(P<0.05).NSCLC各期别中MDR1、MRP、GST-π阳性表达统计学上未见明显差异.在所检测的所有抗癌药物与MDR1耐药基因阳性与阴性表达未见相关性.MRP表达阳性者对去甲长春花碱、长春碱酰胺、长春新碱和丝裂霉素的肿瘤抑制率显著低于阴性表达组(P<0.05).而MRP表达与顺铂、鬼臼乙叉甙、紫杉醇肿瘤药敏未见明显相关.耐药基因GST-π阳性表达者对顺铂、去甲长春花碱、丝裂霉素的抑瘤率显著低于阴性表达组(P<0.05).结论肺癌耐药基因GST-π、MRP表达与部分化疗药物肿瘤药敏存在相关性,耐药基因检测对指导临床化疗药物的选择具有一定的帮助.
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X射线反复照射后肺癌D6细胞系对放射和化学治疗的敏感性研究
放射治疗(简称放疗)及化学治疗(简称化疗)是肺癌非手术治疗的重要手段.我们以非小细胞肺癌(NSCLC)D6细胞系为对象,在体外对其进行反复照射,观察存活细胞克隆对射线及化疗药物敏感性的变化.
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结核分支杆菌耐乙胺丁醇分离株embB基因突变的测序分析
乙胺丁醇(EMB)是具有广谱抗分支杆菌活性的一线抗结核合成药物,被广泛应用于结核分支杆菌、鸟分支杆菌和堪萨斯分支杆菌等多种非结核分支杆菌的治疗.近年来,EMB在原发和复发结核病患者中的耐药率有上升趋势[1],我们应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)银染技术和PCR-自动测序法对结核分支杆菌embB基因进行了检测,以探讨建立直接快速检测结核分支杆菌EMB药物敏感性的实验方法.
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分子诊断技术在分支杆菌菌种鉴定中的应用价值
在微生物分类中,分支杆菌属于裂殖菌纲、放线菌目、分支杆菌科、分支杆菌属.分支杆菌种类繁多,<伯杰系统细菌学手册>(第九版)所确认的分支杆菌有54种,临床可见能引起人类疾病的主要是结核分支杆菌(MTB),此外还有堪萨斯、鸟、胞内、猿猴、蟾蜍、海、溃疡、瘰疬、马尔摩、苏加、偶然、龟、脓肿等10余种非结核分支杆菌(NTM).NTM病具有与结核病临床表现相似的全身中毒症状和局部损害,在无菌种鉴定结果的情况下,与结核病难以鉴别.NTM与MTB药物敏感性大不相同,许多NTM对抗结核药物天然耐药,不同NTM菌种对药物敏感性亦不相同,化疗方案应根据不同菌种有所不同,因此,分支杆菌菌种鉴定不仅在流行病学上,而且在临床诊断和治疗上均有重要意义.而目前传统的分支杆菌菌种鉴定方法依据生物学表型特征及细胞化学反应多项指标综合分析,方法复杂,费时,急需建立快速、简便、准确的分支杆菌菌种鉴定方法.近年来,随着分子生物学理论及技术,特别是以聚合酶链反应(PCR)为基础的各种分子诊断技术的快速发展,分子诊断技术已在分支杆菌菌种鉴定中得以研究应用,文中就此做一概述.
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结核分支杆菌L型
结核分支杆菌属于容易发生细胞壁缺陷变异的细菌,其不但能够被多种因素诱导发生细胞壁缺陷变异,而且在其生长繁殖的过程常常可自发形成细胞壁缺陷细菌. 细胞壁缺陷结核分支杆菌(cell wall deficient M. tuberculosis)存在的现象早已在临床标本或人工培养基内发现,曾将其称为"Much颗粒"或认为是结核分支杆菌生长繁殖周期的一个环节[1].近年来的研究证实结核分支杆菌丧失细胞壁成为L型后仍然能够生长繁殖,其生物学特性、致病性、药物敏感性或染色体DNA结构等特性可发生改变.
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结核分枝杆菌常规药物敏感性测验和临床化疗疗效相关性的再认识
结核界常谈论我国结核病控制实践中存在的高耐药率和高治愈率,以及有时药敏测验耐药而临床治疗有效的矛盾现象,由此延伸出对常规药物敏感性测验和临床化疗疗效相关性的困惑.笔者尝试思考其产生背景和原因,现将所得的一些肤浅认识阐述如下.
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用显微镜观察药物敏感性方法快速检测结核分枝杆菌耐药性
背景和目的:结核病的早期快速诊断是阻断结核病传播,尤其是耐药结核病传播的关键.显微镜观察药物敏感性(microscopic-observation drug-susceptibility,MODS)方法是一种通过痰液标本的液体培养,在镜下检测细菌生长特性的方法.
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血管内皮生长因子反义核酸增强急、慢性髓细胞白血病细胞对三氧化二砷敏感性的影响
研究发现,某些恶性血液病细胞亦高表达血管内皮生长因子(VEGF)和VEGF受体;到目前为止,VEGF和它的受体在白血病发生、发展中的作用还不明确,它对白血病细胞的生存、增殖、分化、化疗药物敏感性的影响等有待揭示[1] .
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XIAP反义寡核苷酸对HL-60细胞凋亡及化疗药物敏感性的影响
X 连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor apoptosis protein,XIAP)是急性白血病患者一项独立的预后指标,高表达者预后差、生存期短[1],提示XIAP在白血病中具有重要作用,有可能成为治疗白血病的一个新靶点.
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白血病细胞耐药与凋亡及bcl-2和bax-α表达水平关系的研究
白血病细胞对化疗耐药是当前白血病治疗的难题,其机制尚不很明了。目前认为细胞凋亡是化疗诱导肿瘤细胞死亡的重要机制,bcl-2家族在调节细胞凋亡过程起核心作用[1]。有关bcl-2与白血病细胞耐药关系的报道结果不一致[2,3],bcl-2与bax-α比率可能是影响白血病细胞对化疗药物敏感性的关键因素[3]。我们拟通过比较化疗敏感和耐药白血病细胞内bcl-2和bax-α的表达水平,探讨白血病细胞耐药的分子机制。
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全膝关节置换术后假体周围感染的病原学分析
目的 分析全膝关节置换术后假体周围感染患者的病原菌构成及药敏结果,为假体周围感染的诊治提供参考.方法 收集自2008-01-2014-12诊治的全膝关节置换术后假体周围感染28例,对全膝关节置换术后假体周围感染标本培养的病原菌及药敏结果进行统计分析.结果 28例中共检出病原菌19株,病原菌检出率为67.86%.19株病原菌包括革兰阳性球菌12株(63.16%),革兰阴性杆菌5株(26.32%),分支杆菌属及奴卡菌属各1株.革兰阳性球菌对万古霉素、利耐唑胺、米诺环素等药物敏感率高.革兰阴性杆菌对亚胺培南、美罗培南、舒普深等药物敏感率高.结论 全膝关节置换术后应积极预防假体周围感染,一旦发生假体周围感染,应多次行细菌培养与药敏试验,及时应用敏感抗生素.
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吉林地区临床新生隐球菌微卫星分型分析
新生隐球菌(Cryptococcus Neoformans,CN)是临床上重要的致病真菌,主要可导致器官移植、艾滋病等免疫抑制患者发生新生隐球菌病[1]。本文采用多位点微卫星基因分型法( MLMT)对吉林地区的新生隐球菌临床株进行分析,同时对不同微卫星型的菌株进行了药物敏感性的比较,以帮助临床上深入认识新生隐球菌的流行病学及发病机制。
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不同年龄段儿童鹅口疮发病情况和药物敏感性调查
目的:调查儿童各年龄段鹅口疮发病情况和各类抗真菌药物的敏感性。方法:收集2012年到哈尔滨市儿童医院口腔科就诊的655例鹅口疮患儿,划分为新生儿组、婴儿组和幼儿组,分析各年龄段的疾病分布。其中241例用棉拭子法采集患者口腔粘膜病变部位的白念菌进行细菌培养,选取制霉菌素、酮康唑、伊曲康唑和氟康唑,进行体外抗真菌药敏敏感度试验,各年龄段进行对比。结果:新生儿组和婴儿组患病率相似,幼儿组患病率低。婴儿组大多数患儿单纯患鹅口疮,而幼儿组患儿多合并其他疾病。药物有效率(敏感和中介例数所占的比例)高的药物分别是:新生儿组:氟康唑,婴儿组:酮康唑,幼儿组:酮康唑和氟康唑。结论:各年龄段鹅口疮发病情况有差异,治疗敏感药物不同,临床用药应参考药敏结果进行选择。
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某院泌尿科病原菌分布及药敏分析
泌尿道感染的病原体多为病原微生物,由于近年来临床抗生素的不合理使用,导致泌尿道感染病原菌的菌群分布及细菌耐药不断发生变化,因此,对病原菌及其药物敏感性进行追踪和检测分析是非常必要的[1]。为了解我院泌尿科患者的病原菌分布及耐药情况,现对本院泌尿科2013年度634份泌尿道感染病人的中段尿微生物培养阳性结果进行分析,报告如下。
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痰噬菌体生物扩增法检测一线抗结核药物敏感性的临床应用研究
目的 观察噬菌体生物扩增(PhaB)法测定痰样本结核分枝杆菌的药物敏感性在临床应用的效果.方法 应用PhaB法检测143例涂阳肺结核患者痰样本中的结核分枝杆菌对一线抗结核药物的敏感性,并根据检测结果及时调整化疗方案,随访这些患者的痰菌转阴情况和临床疗效,与同期住院未行PhaB法检测的菌阳肺结核患者进行回顾性地对比.均数的比较采用成组t检验;计数指标采用卡方检验进行对比,其中若出现值为0时采用四格表精确检验法.结果 143例涂阳肺结核患者PhaB法检测的阳性率为94.4%( 135/143),三类患者的阳性率比较差异无统计学意义(x2=1.886,P>0.05).PhaB组患者痰送检至获得药敏检测结果的时间为(6.6±1.8)d,对照组为(29.4±8.7)d,差异有统计学意义(t=29.01,P<0.01).Ⅱ类肺结核患者中,PhaB组的2个月转阴率(63.2% vs.35.1%,x2 =3.989,P<0.05)和总治愈率较对照组高(100% vs.78.4%,P<0.05).Ⅰ类和Ⅲ类肺结核患者的PhaB组和对照组在转阴率和治愈率方面比较无明显差异.结论 PhaB法检测痰样本中的结核分枝杆菌药敏结果对涂阳肺结核的方案制订具有较好的指导意义.