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532株血液科血培养主要病原菌分布及药物敏感性分析
目的 统计分析2013—2017年南京医科大学第一附属医院血液科血培养主要病原菌分布及药物敏感性情况.方法 血培养采用BACTEC FX全自动血培养仪,细菌鉴定、药物敏感和真菌鉴定试验采用VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定及药敏系统,链球菌药敏为纸片扩散法( K-B法),真菌药敏试验采用ATB FUNGUS 3方法,WHONET5. 6软件进行统计分析.结果 2013—2017年南京医科大学第一附属医院血液科血培养阳性率为7. 6% ,分离前5 位的病原菌是大肠埃希菌(20. 9% )、肺炎克雷伯菌(18. 0% )、凝固酶阴性葡萄球菌(12. 4% )、铜绿假单胞菌(11. 5% )和阴沟肠杆菌(3. 6% ).肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物敏感(94. 4% ),铜绿假单胞菌对除氨曲南之外的抗菌药物均有较好的敏感性,而鲍曼不动杆菌对常见抗菌药物敏感性均较低,革兰阳性球菌对万古霉素、利奈唑胺、替考拉宁敏感性较好.结论 血液科患者易并发医院感染,应引起临床和微生物室的高度重视,合理选用抗菌药物是治疗和预防细菌耐药的关键.
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实时荧光定量PCR技术检测结核分枝杆菌方法的建立与初步应用
结核分枝杆菌不产外毒素和侵袭性酶,而结核分枝杆菌分泌的蛋白及菌体蛋白在宿主抗结核分枝杆菌的细胞免疫和体液免疫应答中发挥着重要作用.结核分枝杆菌mRNA的半衰期很短(3～5 min),是结核分枝杆菌活菌诊断及检测药物敏感性很好的分子标志.因此通过检测临床上分离的结核分枝杆菌的mRNA可以快速判断是否为致病性结核杆菌及结核分枝杆菌是否为活菌.
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耐多药结核分枝杆菌对贝达喹啉的耐药性及其与基因型关系分析
目的：分析耐多药结核分枝杆菌菌株对贝达喹啉( Bedaquiline, BDQ)的耐药性并探讨耐药表型与基因型之间的关联,为临床合理使用贝达喹啉治疗耐多药结核病( multidrug-resistant tu-berculosis, MDR-TB)提供科学依据。方法选取2015年重庆市结核病防治所分离的全敏感临床株100株、MDR-TB临床株77株、2007—2008年全国结核病耐药基线调查收集的 MDR-TB菌株210株,采用微孔板法测定BDQ的低抑菌浓度(MIC),并采用间隔区寡核苷酸分型方法(Spoligotyping)对其进行基因分型,进一步比较MDR-TB菌株中北京基因型和非北京基因型的BDQ耐药率差异。结果287株MDR菌株中,BDQ的MIC50为0.03μg/ml,MIC90为0.25μg/ml,BDQ耐药株19株,耐药率为6.6%(19/287),北京基因型菌株195株,非北京基因型菌株92株,北京基因型菌株对BDQ的耐药率[4.6%(9/195)]低于非北京基因型[10.9%(10/92)](χ2=3.955,P=0.047)。100株全敏感菌株中, BDQ的MIC50为0.03μg/ml,MIC90为0.12μg/ml,北京基因型与非北京基因型菌株数分别为63株、37株,均未发现BDQ耐药株。结论 BDQ对MDR结核分枝杆菌有较好的体外抗菌活性,MDR菌株非北京基因型与BDQ耐药相关,北京基因型菌株对BDQ的敏感性优于非北京基因型。
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儿童医院重症监护病房金黄色葡萄球菌分子特征的研究
目的 了解儿童医院重症监护病房(intensive care unit,ICU)金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)的分子学分型、毒力基因携带及耐药情况.方法 收集鉴定2016年1月至2016年12月北京儿童医院新生儿及儿童ICU患儿临床送检标本中培养出的金葡菌,采用头孢西丁纸片法和mecA检测鉴定耐甲氧西林金葡菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)或甲氧西林敏感金葡菌(methicillin-susceptible Staphylococcus aureus,MSSA);对所有菌株进行多位点序列分型(muhilocus sequence typing,MLST)和spa分型,并对MRSA菌株进行葡萄球菌盒氏染色体(staphylococcal cassette chromosome mec,SCCmec)分型;采用PCR方法检测21种超抗原基因和杀白细胞素(Panton-Valentine leukocidin,pvl)基因;采用E-test方法检测12种抗生素药物敏感性.使用Fisher's确切概率法比较MRSA与MSSA菌株在毒力因子携带及耐药方面的差异.结果 共收集金葡菌39株(其中MRSA菌株18株),分别来源于肺炎(包括重症肺炎)、败血症和皮肤软组织感染;ST59-SCCmecⅣa-t437 (55.6％)和ST398-t571 (28.6％)分别是MRSA和MSSA分离株常见的流行克隆.26株(66.7％)金葡菌菌株至少携带一种超抗原基因,常见的分别是seb(38.5％)、sek (30.8％)和seq (20.5％),常见的超抗原基因型为seb-sek-seq,占18.0％.在本研究中,pvl基因阳性率为25.6％,MRSA和MSSA分离株pvl基因携带率的差异无统计学意义(P＜0.05).所有菌株的多重耐药率为79.9％,红霉素耐药率为100％,其次为青霉素、克林霉素和氯霉素,耐药率分别为94.9％、53.8％和51.3％,均对复方新诺明、利福平、万古霉素和利奈唑胺敏感.结论 儿童医院ICU金葡菌分离株主要来源于肺炎、败血症和皮肤软组织感染,MRSA和MSSA分离株常见的流行克隆分别是ST59-SCCmecⅣa-t437和ST398-t571.金葡菌分离株的超抗原基因携带率和多重耐药率较高.
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老年医院获得性肺炎病原学及药物敏感性分析
目的调查老年住院患者医院获得性肺炎（ HAP）的病原学分布及药物敏感性，为临床治疗提供参考。方法回顾性分析2010年1月至2015年12月在首都医科大学附属北京友谊医院老年内科住院并诊断为HAP的老年患者的病原学及药物敏感性资料。结果共纳入600例老年 HAP患者，占同期老年内科住院患者医院获得性感染的59.9%（600/1001）。2010年至2015年老年HAP发生例数分别为60例、89例、75例、67例、155例和154例，晚发HAP占87.5%（525/600）。600例老年HAP患者中81.3%（488/600）病原学检查阳性，常见的病原菌依次为铜绿假单胞菌（21.5%，105/488）、鲍曼不动杆菌（21.3%，104/488）、金黄色葡萄球菌（17.2%，84/488）、白色念珠菌（10.5%，51/488）和肺炎克雷伯杆菌（5.1%，25/488）。铜绿假单胞菌对氨基糖甙类抗生素的敏感率高（83.2%~95.5%），哌拉西林/他唑巴坦次之（79.3%），对美罗培南和亚胺培南的敏感率仅为54.5%和52.6%。鲍曼不动杆菌几乎对所有常用抗菌药物的敏感率均低于50%，对亚胺培南耐药率高达84.3%。肺炎克雷伯菌对亚胺培南、阿米卡星和头孢替坦敏感率高于80%，对其他抗菌药物敏感率均低于80%。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌占金黄色葡萄球菌的85.7%（72/84），对万古霉素、利奈唑胺、奎奴普丁/达福普汀和替加环素100%敏感。结论 HAP是老年住院患者常见的医院获得性感染。老年HAP患者常见的分离菌是铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和肺炎克雷伯菌。老年HA P常见致病菌多重耐药情况严重，需引起关注。
林/他唑巴坦次之（79.3%），对美罗培南和亚胺培南的敏感率仅为54.5%和52.6%。鲍曼不动杆菌几乎对所有常用抗菌药物的敏感率均低于50%，对亚胺培南耐药率高达84.3%。肺炎克雷伯菌对亚胺培南、阿米卡星和头孢替坦敏感率高于80%，对其他抗菌药物敏感率均低于80%。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌占金黄色葡萄球菌的85.7%（72/84），对万古霉素、利奈唑胺、奎奴普丁/达福普汀和替加环素100%敏感。结论 HAP是老年住院患者常见的医院获得性感染。老年HAP患者常见的分离菌是铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和肺炎克雷伯菌。老年HA P常见致病菌多重耐药情况严重，需引起关注。 -
人脑多形性胶质瘤细胞系BT325对5种抗肿瘤药物敏感性的研究
目的 检测人脑多形性胶质瘤细胞系BT325对顺铂(DDP)、替尼泊甙(VM26)、尼莫斯汀(ACNU)、替莫唑胺(TMZ)及长春新碱(VCR)5种临床常用抗肿瘤药物的敏感性,筛选脑胶质瘤化疗敏感药物.方法用含0％、10％及20％胎牛血清的DMEM培养基培养BT325胶质瘤细胞,分别在24 h、48 h、72 h、96 h、120h、144 h进行细胞计数,绘制细胞生长曲线,以确定细胞生长的佳血清浓度；采用CCK-8法检测不同血浆峰浓度(PPC)5种药物对BT325胶质瘤细胞活性的影响,计算抗肿瘤药物的抑制率及IC50.结果细胞形态观察及细胞生长曲线显示含10％胎牛血清的DMEM培养基对BT325胶质瘤细胞生长较为适宜.细胞活性检测显示DDP在0.625×PPC(抑制率为51.8％)及以上浓度时可抑制BT325细胞生长,在1.25×PPC(抑制率为75.1％)及以上浓度时BT325细胞高度敏感,且有量效关系；VM26对BT325细胞抑制率均在79.6％以上,为高度敏感,剂量范围广且存在量效关系；VCR各浓度对BT325细胞抑制率为50％左右,但是与药物剂量无关；各浓度ACNU、TMZ对BT325细胞抑制率均在34％以下,无抑制作用.结论BT325胶质瘤细胞对DDP、VM26敏感,对VCR、ACNU、TMZ不敏感.
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1～5岁儿童咽拭细菌感染及耐药分析
目的:分析1～5岁儿童住院患者咽拭感染的细菌病原学及药物敏感性,为临床合理应用抗生素提供依据.方法:分析2010年1 ～12月份儿科住院患者106例标本,包括肺内感染、感冒、咳嗽、发热等患儿.结果:106例标本中检出卡他布兰汉菌45株占42.4％、大肠埃氏菌25株占23.6％、葡萄球菌16株占15％、念珠菌属5株占5％、正常菌群15株占14％.头孢哌酮/舒巴坦100％敏感,红霉素、阿奇霉素耐药率达94％以上.结论:1～5岁婴幼儿感染以卡他布兰汉菌为主占42.4％,其次大肠埃氏菌,葡萄球菌属,偶见念珠菌属.
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老年人的生理变化与用药原则
老年人因机体老化,各器宫发生一系列的生理变化,故对药物敏感性高于年轻人,不少药物更易在老年人中引起副作用.因此,为保证老年患者合理用药、有效、安全,了解老年人的生理变化、用药原则是一个不可忽视的课题.
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碳青霉烯类耐药克雷伯菌属细菌的药物敏感性及同源性探讨
目的 研究分析碳青霉烯类耐药克雷伯菌属细菌的耐药机制,探究碳青霉烯类耐药克雷伯菌属细菌流行状况,建立克雷伯菌属细菌的脉冲场凝胶电泳分型数据库,以便此菌属在医院流行爆发时快速的溯源,及时控制该细菌的传播.方法 收集我院2013年3月-2014年6月临床分离的300株肠杆菌科细菌,经药物敏感性实验筛选出碳青霉烯类耐药克雷伯菌属细菌,应用聚合酶链式反应(PCR)和改良的Hodge试验分别测定其基因型和表现型,后应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行同源分析.结果 本研究中菌属细菌的以产生碳青霉烯酶为主要耐药机制,经PFGE分析得出克雷伯菌22株,可大体分为A、B两型,数目各半.结论 我院克雷伯菌属细菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要机制为产生了碳青霉烯酶,因此加强对细菌耐药机制的监测有利于医院感染的控制.
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呼吸病房下呼吸道感染病原菌及药敏现状分析
目的 了解该院呼吸病房住院患者下呼吸道感染病原菌分布及药物敏感情况.方法 收集2003年1月～2004年12月该院呼吸病房下呼吸道感染住院患者痰菌(或纤维支气管镜吸取分泌物)培养阳性标本结果进行回顾性统计分析.结果 分离出细菌20余种共522株,革兰阴性杆菌411株(78.7%),主要为铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、不动杆菌、副流感嗜血杆菌和克雷伯菌;革兰阳性球菌111株(21.3%),主要为表皮葡萄球菌、肺炎链球菌及金黄色葡萄球.流感及副流感嗜血杆菌对三代头孢菌素敏感;铜绿假单胞菌、不动杆菌、克雷伯菌对美洛培南、舒普深、头孢吡肟敏感,对三代头孢菌素敏感性较差;葡萄球菌对万古霉素均敏感;肺炎链球菌对美洛培南、左氟沙星敏感性好,对青霉素大部分耐药.结论 下呼吸道感染以革兰阴性杆菌感染为主,且常见病原菌耐药现象较严重,临床上应合理应用抗生素以延缓细菌耐药性的产生.
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广东流感H3N2亚型神经氨酸酶基因变异和耐药分析
目的 揭示广东地区2007～2010年甲型H3N2毒株神经氨酸酶(NA)基因特征、变异及对奥司他韦和扎那米韦的药物敏感性.方法 采用时空抽样方法选取毒株,检测广东2007～2010年甲型H3N2毒株NA基因核苷酸序列,同时检索全球NA基因序列作为参照,采用Mega 5.05和BioEdit 7.0.1软件对NA基因核苷酸序列进行比对和分析;分析毒株变异进化速度;采用NA酶活性阻断试验检测病毒的奥司他韦和扎那米韦药物敏感性.结果 广东2007～2010年H3N2毒株NA基因同义进化(Ks)和错义进化(Ka)速度分别为1.69×10-3～1.84×10-3核苷酸/年和1.07×10-3～1.15×10-3核苷酸/年,Ks值约为Ka值的1.5倍,揭示NA基因受自然选择压力较大.疫苗株A/Perth/10/2009与2010年和2011年广东毒株NA基因同源性分别为97.7%～98.2%、97.6%～97.7%.广东毒株NA基因有6个抗原表位变异,尤其是367位和369位氨基酸的变异频率较高.毒株A/Guangdong/548/2008发生耐药相关位点D151V,出现对奥司他韦敏感性降低;其余分离毒株均对奥司他韦和扎那米韦敏感;各年份毒株药物敏感性差异没有统计学意义.结论 广东2007～2010年甲型H3N2毒株NA基因的6个抗原表位有变异,抗原变异的积累可能出现流感暴发;D151V变异可能降低H3N2病毒对奥司他韦敏感性,但广东大多数H3N2毒株对奥司他韦和扎那米韦仍敏感.
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流行性脑脊髓膜炎患者脑脊液中脑膜炎奈瑟球菌的菌群分布与药物敏感性分析
流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)是由脑膜炎奈瑟菌引起的一种急性呼吸道传染病,主要的致病血清群是A、B、C、Y和W135群.近几年发生了由A群向B群及W135群变迁的趋势,我们分析了流行性脑脊髓膜炎患者脑脊液中脑膜炎奈瑟氏球菌菌群分布及药物敏感性.
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人大肠癌原代培养体外药敏试验的研究
目的探讨用生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATP-TCA)研究大肠癌药敏的异质性和个体化疗的可行性.方法用ATP-TCA技术检测50份大肠癌标本对16种抗癌药单药或联合用药的敏感性.结果不同标本的药物敏感性存在着明显差异,单药中有效的药物依次为长春瑞滨、羟基喜树碱、氟尿嘧啶和紫杉醇,敏感率分别为34.1%、31.6%、27.6%和24.3%.有效联合用药方案是氟尿嘧啶+丝裂霉素+阿糖胞苷,敏感率为100%(11/11份),其次是氟尿嘧啶+顺铂+阿霉素和健择+顺铂.结论大肠癌对抗癌药物的敏感程度普遍较低,且存在明显异质性.试验结果与临床治疗经验比较一致,ATP-TCA可用于为大肠癌患者选择合适的化疗药物.
关键词： 生物荧光肿瘤药敏检测技术 大肠癌 药物敏感性 -
301例恶性梗阻性黄疸胆汁细菌培养与药物敏感性的临床研究
近年来,有关良性梗阻性黄疸(benign obstructive jaundice,BOJ)合并胆系感染的细菌谱特点及抗感染治疗指南,已得到公认.然而,对恶性梗阻性黄疸(malignant obstructive jaundice,MOJ)有关胆汁培养、药敏试验、与胆系感染关系、菌种分布构成,抗感染对策是否异同,尚无系统的报道.
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生物荧光肿瘤体外药敏检测技术的临床应用
化学治疗是治疗恶性肿瘤的常规有效手段之一[1].由于肿瘤本身存在个体差异性,即便是同一组织学类型、分化程度相同的肿瘤,对药物敏感谱也显著不同.如果在用药前缺乏该癌症患者对化疗药物敏感性和耐药性的直接实验依据,在化疗方案的制定上不可避免地存在一定的盲目性.选药物不准,不仅将有损患者身体,更重要的是可诱导肿瘤细胞产生对多种药物的多药耐药,贻误治疗时机.因此,临床亟需一种能在治疗前为患者筛选敏感药物的技术方法,以确定高效的针对肿瘤患者的个体化治疗方案.
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美国临床实验室标准化委员会2003年版产孢丝状真菌药敏试验方案简介
美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)1997年版推出了关于酵母菌的液体培养基稀释法(全量法与微量法)抗真菌药物敏感性试验方案M27-A .该方案准确性高、重复性好,实验室间结果的一致性可以与抗细菌的药物敏感试验相媲美.之后,NCCLS 1998年版又提出了关于产孢丝状真菌的抗真菌药敏试验倡导方案M38-P.该方案包括微量液基稀释法与多量液体培养基稀释法,适用于曲霉菌、镰刀菌、波氏霉菌等丝状真菌,一致性好.近年来,NCCLS在该方案的基础上,又在某些药物的低抑菌浓度(MIC),即MIC值的判定等因素方面进行了广泛深入的多中心研究,加上新型三唑类药物的问世和临床应用的逐渐增多,于是NCCLS在2003年新版中又推出了产孢丝状真菌抗真菌药物敏感性试验方案,即M38-A,简介如下.
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不同部位气单胞菌感染的特点、药物敏感性及预后
目的分析比较不同部位气单胞菌感染的特点、药物敏感性及预后.方法搜集不同部位的气单胞菌感染病例及菌株,加以分析比较.结果气单胞菌感染的特点是血液中以嗜水气单胞菌为主,腹水及大便中以温和气单胞菌为多,血液及腹水感染的气单胞菌以院内感染为主,主要发生于重症肝炎及肝硬化患者,预后较差,而肠道气单胞菌均为院外感染,主要与不洁饮食有关.不同部位感染的气单胞菌对抗生素的耐药率比较略有不同,但无显著差异.敏感率较高的抗生素包括头孢吡肟、左旋氧氟沙星、头孢噻肟及头孢曲松.肠道气单胞菌感染治愈率达100%;而败血症及腹膜炎的病死率分别达28.6%及37.5%.结论不同部位气单胞菌感染的预后不同,患者的整体状况是影响患者预后的关键所在.
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MA120微生物鉴定/药敏分析系统在临床微生物鉴定与药物敏感性测定中的效果评价
目的：评价国产微生物鉴定/药敏分析系统（MA120）在临床微生物鉴定和药物敏感性测定的效果。方法收集解放军第三〇二医院2013年1月—2014年12月间的临床分离株1803株，包括革兰阴性菌1205株及革兰阳性菌598株，共28个菌属，107个菌种，菌种经16S rDNA 测序（测序）鉴定确认。用 MA120进行细菌的鉴定与药敏检测，鉴定结果与测序确认结果比较，计算种的鉴定符合率；药敏结果与 VITEK 2全自动细菌鉴定/药敏分析系统（VITEK 2）的药敏检测结果比较，计算耐药的符合率。结果MA120鉴定革兰阴性菌19个菌属67个菌种1205株，与测序结果总体符合率为91.12%；鉴定革兰阳性菌9个菌属40个菌种598株，与测序结果总体符合率为94.31%。MA120药敏卡涵盖常见的抗生素，耐药率与 VITEK 2的符合率分别为：肠杆菌科89.54%，非发酵菌86.11%，葡萄球菌属94.74%，肠球菌属与链球菌属82.61%。结论MA120在常见临床微生物的鉴定与药敏中的应用具有较好的效果，鉴定细菌种类涵盖临床常见的致病菌，且具有的药敏抗生素种类齐全，并可根据美国临床和实验室标准协会的建议及临床需求及时完善，应用灵活。
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不同消化道癌对化疗药物敏感性的应用研究
目的:通过常见消化道癌对不同抗癌药物以及不同联合用药方案的敏感性作比较,以期寻找各自的合理的化疗用药方案,从而指导不同消化道癌的化疗.方法:通过肿瘤细胞体外药敏试验(即四甲基偶氮唑盐着色法.MTT),对97例食管癌、116例胃癌、34例肝癌以及169例大肠癌新鲜标本进行化疗药物敏感性检测,并对其结果作比较.结果:除对丝裂霉素(mitomycin C,MMC)、顺氯氨铂(cisplatin,DDP)、5-氟尿嘧啶(5-flurouracil,5-FU)加DDP的敏感性无差异外(P＞0.05),对其余所有药物的敏感性均有显著性差异(P＜0.01),其中,食管癌、胃癌及大肠癌均对5-FU加羟基喜树碱(hydroxycamptothecine.HCPT.OPT)、5-FU加MMC敏感,其敏感率分别为79.4%和73.2%、78.4%和62.7%、60.4%和55.6%,肝癌则对5-FU加MMC及5-FU加柔红霉素(aunorubicin,DNR)敏感,其敏感率分别为70.5%和79.4%.结论:不同的消化道肿瘤对不同抗癌药物的敏感性存在差异,且联合药物的敏感性优于单药.
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细胞黏附对结肠癌细胞凋亡及化疗敏感性的影响
目的:研究结肠癌细胞株与基质黏附对肿瘤细胞凋亡及药物敏感性的影响.方法:应用MTT法研究细胞与基质成分纤维粘连蛋白(FN)结合对药物敏感性的影响;采用TUNEL法检测细胞凋亡,采用流式细胞术观察Bcl-2和Bax基因表达.结果:HT29细胞与FN结合后,其耐药性明显增加(抑制率为12.2%,对照组为53.0%,P＜0.01),用抗β-1整合素抗体阻断其与FN结合,其对药物的敏感性又恢复至对照水平(抑制率为50.6%,与对照组比P＜0.05);HT29细胞与FN结合后,Bcl-2基因蛋白表达上升(62.1%),Bax表达降低(12.86%),凋亡率(8.75±1.08%)显著降低,对照组为(19.46±1.08%);阻断其与FN结合,Bcl-2表达明显下降(22.68%),而Bax表达上升(73.8%),凋亡率也升至(18.9±1.4%)(与对照组比P＜0.05).结论:肿瘤细胞与基质成分结合可上调Bax和下调Bcl-2基因表达,增强肿瘤细胞的抗凋亡能力,从而增加肿瘤耐药性.
